ШОВДРА Ольга Леонидовна НЕКОТОРЫЕ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ДИАБЕТИЧЕСКОЙ РЕТИНОПАТИИ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ 2 ТИПА : ШОВДРА Ольга Леонідівна ДЕЯКІ ПАТОГЕНЕТИЧНІ МЕХАНІЗМИ ДІАБЕТИЧНОЇ РЕТИНОПАТІЇ ПРИ ЦУКРОВОГО ДІАБЕТУ 2 ТИПУ SHOVDRA Olga Leonidovna SOME PATHOGENETIC MECHANISMS OF DIABETIC RETINOPATHY IN TYPE 2 DIABETES MELLITUS

summary

Клиническая характеристика обследованных групп. В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинской декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (World Medical Association Declaration of Helsinki 1964, 2000 ред.).
Методом сплошной выборки в процесс исследования были включены 90 больных СД 2 типа без ретинопатии, с непролиферативной и препролиферативной ретинопатией, проходившие медицинское обследование в ГУЗ «Забайкальский краевой консультативно-диагностический центр» в амбулаторных условиях.
Исследование проводилось в следующих группах:
Основная группа: 90 больных СД 2 типа (37 мужчин и 53 женщины), в возрасте от 45 до 70 лет (53±4,92).
Все пациенты с СД 2 типа были разделены на 3 подгруппы, в зависимости от стадии ДР (без ДР, НДР и ПреПДР):
1 подгруппа – 18 больных СД 2 типа без признаков ДР (7 мужчин и 11 женщин) в возрасте от 45 до 65 лет (55±4,63);
2 подгруппа - 39 больных с НДР (16 мужчин и 23 женщины) в возрасте от 47 до 70 лет (56,56±1,27);
3 подгруппа - 33 больных с ПреПДР (14 мужчин и 19 женщин) в возрасте от 47 до 67 лет (55,18±3,91).
Контрольная группа включала 30 жителей Забайкалья без отягощенного семейного анамнеза по СД, которые по результатам клинического, инструментального обследований были отнесены ко 2 и 3 группе здоровья(12 мужчин и 18 женщин) в возрасте от 42 до 65 лет (51,17±1,65). Критерием отбора было также отсутствие соматической патологии, приводящей к вторичному поражению глаз.
Диагноз сахарного диабета 2 типа был выставлен эндокринологом в соответствии с критериями МКБ после необходимого обследования с использованием современных клинических, инструментальных и лабораторных методов. Диагноз НДР и ПреПДР выставлен на основании данных офтальмоскопии с максимально расширенным зрачком. Стадия ретинопатии устанавливалась по классификации, принятой ВОЗ, согласно которой диабетическая непролиферативная ретинопатия характеризуется следующими изменениями сетчатки: наличием в сетчатой оболочке глаза патологических изменений в виде микроаневризм, точечных или мелких штрихообразных кровоизлияний, тёмного цвета, локализованных в центральной зоне глазного дна или по ходу крупных вен в глубоких слоях сетчатки, экссудативных очагов (локализующихся в центральной части глазного дна, жёлтого или белого цвета с чёткими или расплывчатыми границами) и отёком сетчатки, локализующимся в центральной (макулярной) области или по ходу крупных сосудов. Диагноз препролиферативной ретинопатии выставлен больным с СД, у которых на глазном дне были обнаружены венозные аномалии (чёткообразность, извитость, наличие петель, удвоение и/или выраженные колебания калибра сосудов), большое количество твёрдых и «ватных» экссудатов, интраретинальные микрососудистые аномалии (ИРМА), множество крупных ретинальных геморрагий.
Из исследования исключались пациенты с тяжелыми сердечно-сосудистыми заболеваними (ИБС, инфаркт миокарда, гипертоническая болезнь), хроническими заболеваниями желудочно-кишечного тракта, печени, почек в стадии обострения, эндокринными, аутоиммунными заболеваниями, дегенеративными заболеваниями центральной и периферической нервной системы, нарушением мозгового кровообращения, сопутствующей патологией глаз острой или в стадии обострения.
Лабораторные методы исследования. У всех обследуемых в группах изучались сыворотка крови и слезная жидкость. Забор венозной крови проводили натощак в утренние часы. Сбор слезной жидкости производили методом адсорбции на стерильную ватную турунду.
Определение IgА, IgM, и IgGобщ и подклассов (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) в сыворотке крови и слезной жидкости проводили методом твердофазного ИФА с использованием наборов производства фирмы “Evroimmun ” и “Human” (Германия).
Определение цитокинов (ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИНФ-α, ИНФ-γ) в сыворотке крови и слезной жидкости проводили методом твердофазного ИФА с применением наборов реагентов фирмы «Вектор-Бест» (г. Новосибирск) согласно прилагаемой инструкции.
Уровень эндотелина-1 определяли методом твердофазного ИФА, с помощью наборов реагентов фирмы «BIOMEDICA GROUP» (Германия) в соответствии с инструкцией производителя.
Уровень NSE определяли методом твердофазного ИФА, наборами фирмы «FUJIREBIO, Diagnostics, Inc.» (Германия) в соответствии с инструкцией производителя.
аАт к ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, эндотелину-1, нейронспецифической енолазе в сыворотке крови и слезной жидкости определяли оригинальным методом. Лунки полистирольных планшетов сенсибилизировали антигенами ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10 (Вектор-Бест, г. Новосибирск) в количестве 20 мкг в 200 мкл забуференного физиологического раствора. После 30 минутной инкубации при комнатной температуре планшет трижды отмывали дистиллированной водой, затем вводили 200 мкл исследуемой биожидкости (сыворотки либо слезной жидкости), разведенной в соотношении 1:100 забуференным физиологическим раствором и после инкубации вновь трижды отмывали лунки планшетов. Аутоантитела к интерлейкинам в СК выявляли анти-IgG-человеческими антителами (Вектор-Бест, г. Новосибирск), а в СЖ – анти-IgAs-человеческими антителами (Вектор-Бест, г. Новосибирск) по стандартной методике. Полученные результаты выражали в единицах оптической плотности (ext.).
Статистическая обработка материала. Полученные данные обработаны методом вариационной статистики для связанных и не связанных между собой наблюдений с помощью пакетов программ Microsoft Excel 2003, STATISTICA 6,0 с определением достоверности различий при достигнутом уровне значимости p<0,05. При сравнении изучаемых показателей использовались методы непараметрической статистики, в связи с ненормальным распределением значений в вариационных рядах. Для сравнения двух независимых выборочных совокупностей применялся критерий Манна-Уитни. Числовые данные приведены в виде медианы (Ме) и интерквартильного размаха (25-го; 75-го процентилей).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови и слезной жидкости у больных сахарным диабетом 2 типа без диабетической ретинопатии (ДР), с непролиферативной диабетической ретинопатией (НДР) и препролиферативной диабетической ретинопатией (ПреПДР).
Согласно полученным результатам (табл.1) в СЖ контрольной группы регистрируются иммуноглобулины классов A, M, G, правда в значительно меньшей концентрации по сравнению с СК за исключением sIgA, содержание которого в слезе в десятки раз превышает его уровень в крови (р<0,05).
В СК во всех четырех группах концентрация sIgA регистрировалась практически на одном уровне. В СЖ при развитии ретинопатии содержание sIgA (табл.1) несколько повышается.
У больных СД 2 типа без ДР и при развитии НДР и ПреПДР в СК увеличивается содержание IgGобщ. Но более выраженные изменения зарегистрированы в СЖ при развитии ДР. Так у больных с НДР его уровень возрастает в 2 раза (р<0,05), а у пациентов с ПреПДР – в 4 раза (р<0,05) по сравнению с контрольной группой. При переходе из НДР в ПреПДР содержание IgG в СЖ возрастает в 2 раза (р<0,05).
В проведенных нами исследованиях установлено, что и в СК и в СЖ людей, не страдающих СД выявлены все 4 подкласса IgG. В СЖ содержание подклассов IgG значительно ниже, чем в СК. Уровень подклассов IgG увеличивается в СК как у больных СД 2 типа без ДР, с НДР, так и, особенно, с ПреПДР. В СЖ более выраженные изменения зарегистрированы в группе с НДР и ПреПДР; повышение концентрация IgG2 - более чем в 10 раз (р<0,05); содержание IgG1 в стадии НДР увеличивается в 2,4 раза (р<0,05), а в стадии ПреПДР – в 3,3 раза (р<0,01). Уровень IgG3 и IgG4 также повышается при развитии ДР.
Следовательно, динамика IgGобщ. при ДР обусловлена суммой изменений его подклассов. Наблюдается увеличение содержания IgG и его подклассов при развитии ДР.