КОМБИНИРОВАННАЯ ТРАНСПЛАНТАЦИЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ ОРГАНОТИПИЧЕСКИХ КУЛЬТУР ЭНДОКРИННЫХ ЖЕЛЕЗ (экспериментальное исследование)

brief description

НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНЫ
ИНСТИТУТ ПРОБЛЕМ КРИОБИОЛОГИИ И КРИОМЕДИЦИНЫ

На правах рукописи

ЛЕГАЧ ЕВГЕНИЙ ИВАНОВИЧ

УДК 616089.843:615.361.43/.44.014.41

КОМБИНИРОВАННАЯ ТРАНСПЛАНТАЦИЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ ОРГАНОТИПИЧЕСКИХ
КУЛЬТУР ЭНДОКРИННЫХ ЖЕЛЕЗ
(экспериментальное исследование)

14.01.08 трансплантология и искусственные органы
14.01.35 криомедицина

Д и с с е р т а ц и я
на соискание ученой степени
доктора медицинских наук

Научный консультант:
д.б.н., проф. Бондаренко
Татьяна Петровна

Харьков 2008

СОДЕРЖАНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ...

5

ВВЕДЕНИЕ

6

РАЗДЕЛ I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

17

1.1. Трансплантация эндокринных желез как метод коррекции гормональной недостаточности в эксперименте и клинике.

17

1.2. Реакция трансплантационного иммунитета и ее роль в приживляемости пересаженных органов и тканей..

34

1.3. Криоконсервирование клеток и тканей эндокринных желез.

42

1.4. Комбинированная трансплантация как метод пролонгирования жизнеспособности и функционирования трансплантата..

55

1.5. Взаимовлияние эндокринных желез на гормональный гемостаз..

63

РАЗДЕЛ II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ..

72

2.1. Объекты исследований..

72

2.2. Экстирпация эндокринных желез.

72

2.3. Органотипическое культивирование эндокринных желез экспериментальных животных

73

2.4. Криоконсервирование органотипических культур эндокринных желез.

76

2.5. Рекультивирование криоконсервированной ОКЭЖ...

76

2.6. Тестирование функциональной активности органных культур in vitro

76

2.7. Хирургические операции на животных...

77

2.8. Измерение уровня гормонов эндокринных желез и некоторых биохимических показателей крови.

81

2.9. Микроскопическое и гистологическое исследование трансплантантов..

82

2.10. Измерение количества жизнеспособных клеток...

83

2.11 Флуоресцентная микроскопия.

83

2.12. Реактивы

84

2.13. Статистическая обработка результатов..

85

РАЗДЕЛ III РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

86

3.1. Гормонопродуцирующий потенциал криоконсервированной органотипической культуры щитовидной железы при комбинированном культивировании и трансплантации

86

3.1.1. Гормонопродуцирующий потенциал криоконсервированной органотипической культуры щитовидной железы при комбинированном культивировании

86

3.1.2. Гормонопродуцирующий потенциал криоконсервированной органотипической культуры щитовидной железы при комбинированной трансплантации..

108

3.2. Гормонопродуцирующий потенциал криоконсервированной органотипической культуры семенников при комбинированном культивировании и трансплантации

138

3.2.1. Гормонопродуцирующий потенциал криоконсервированной органотипической культуры семенников при комбинированном культивировании

138

3.2.2. Гормонопродуцирующий потенциал криоконсервированной органотипической культуры семенников при комбинированной трансплантации..

161

3.3. Гормонопродуцирующий потенциал криоконсервированной органотипической культуры надпочечных желез при комбинированном культивировании и трансплантации

183

3.3.1. Гормонопродуцирующий потенциал криоконсервированной органотипической культуры надпочечных желез при комбинированном культивировании

183

3.3.2. Гормонопродуцирующий потенциал криоконсервированной органотипической культуры надпочечных желез при комбинированной трансплантации..

197

3.4. Гормонопродуцирующий потенциал криоконсервированной органотипической культуры поджелудочной железы при комбинированном культивировании и трансплантации

217

3.4.1. Гормонопродуцирующий потенциал криоконсервированной органотипической культуры поджелудочной железы при комбинированном культивировании...

217

3.4.2. Гормонопродуцирующий потенциал криоконсервированной органотипической культуры поджелудочной железы при комбинированной трансплантации..

229

3.4.3. Гормонопродуцирующий потенциал островков поджелудочной железы при комбинированной трансплантации.

248

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

264

ВЫВОДЫ

273

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ..

279

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АКТГ адренокортикотропный гормон (кортикотропин)
АО акридиновый оранжевый
БСА бычий сывороточный альбумин
ДМСО диметилсульфоксид, димексид
КРС крупный рогатый скот
ЛГ лютеинизирующий гормон
НЖ надпочечные железы
ОКНЖ органотипическая культура надпочечных желез
ОКЩЖ органотипическая культура щитовидной железы
ОКС органотипическая культура семенников
ОКПЖ органотипическая культура поджелудочной железы
ОКЭЖ органотипическая культура эндокринных желез
ОПЖ островки поджелудочной железы
ПЖ поджелудочная железа
ПЙ пропидий йодид
С семенник
СД сахарный диабет
СТЗ стрептозотоцин
Т4 тироксин
ТТГ тиреотропный гормон
ФДА флуоресцеина диацетат
ФСГ фолликулостимулирующий гормон
ХГ хорионический гонадотропин
цАМФ циклический аденозинмонофосфат
ЩЖ щитовидная железа
ЭАГ эксплантат аденогипофиза
ЭГ эксплантат гипофиза
ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота
ЭТС эмбриональная телячья сыворотка

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Частота заболеваний эндокринной системы среди населения трудоспособного возраста в мире и в Украине по статистическим данным неуклонно растет [3]. Распространенность манифестного гипотиреоза в мире составляет по различным данным 1,56%, а субклинического 4,315% [9, 74, 93, 114, 539, 613]. По данным ВОЗ смертность от сахарного диабета (СД) составляет 5,2% от общей летальности, а число людей страдающих диабетом возрастет к 2030 году почти до 366 млн человек [484, 594]. Считается, что 4060% всех случаев мужского бесплодия объясняется гипогонадизмом [309], а возрастной дефицит андрогенов (синдром PADAM) наблюдается у 20% мужчин [45, 165]. Первичная хроническая надпочечниковая недостаточность (ХНН) встречается 1 на 10000 человек [29], однако синдром ХНН после отмены глюкокортикоидов, назначенных в качестве курса противовоспалительной и иммуносупрессивной терапии, наблюдается у 5070% больных [4].
Практически при всех формах гипотиреоза, гипокортицизма, СД 1 типа и дефиците андрогенов заместительная гормональная терапия (ЗГТ) является терапией выбора. Большое количество исследований указывает на важную роль ЗГТ в патогенезе заболеваний сердечнососудистой, иммунной и пищеварительной систем [4, 41, 64, 65, 69, 122, 456]. Нельзя также не учитывать то, что в организме, скомпрометированном нейроэндокринными нарушениями, существует возможность возникновения порочного метаболизма лекарственного вещества с проявлением токсических эффектов его дериватов, что ведет к нечувствительности или непереносимости препарата и, в результате - к возврату проблемы лечения основного заболевания.
Альтернативой ЗГТ является трансплантация ткани/клеток эндокринных желез. Экспериментальные и клинические данные свидетельствуют об успешном лечении таких эндокринных нарушений, как сахарный диабет и его осложнения [125, 518], субклинического и послеоперационного гипотиреоза, первичной ХНН и андрогендефицитного состояния методом трансплантации [51, 52, 109, 434, 447, 487]. Во многих работах данный метод оценен как более физиологичный по сравнению с традиционной медикаментозной терапией. Трансплантированные эндокринные железы, кроме синтеза и секреции соответствующих гормонов, способны продуцировать биологически активные медиаторы в основном пептидной природы, которые выполняют функции как паракринных, так и аутокринных физиологических регуляторов.
Существенным недостатком метода лечения эндокринной недостаточности трансплантацией эндокринных клеток и тканей является непродолжительность эффекта. Максимальная продолжительность действия трансплантата без использования иммуносупрессантов по различным оценкам составляет от 1,5 месяца до 1 года [90, 506]. Применение иммуносупрессивной терапии при трансплантации эндокринной ткани нежелательно и даже противопоказано, т.к. она угнетает гормональную секрецию [273, 451]. Эти обстоятельства сильно уменьшают привлекательность использования метода трансплантации в клинической эндокринологии.
В связи с этим поиск способов продления функционирования трансплантата, является актуальной медицинской проблемой. Одним из направлений ее решения является комбинированная трансплантация клеток/тканей эндокринных желез. В литературе встречаются единичные работы о значительном преимуществе комбинированных трансплантатов тканей/клеток по сравнению с монотрансплантатами. Это преимущество заключается в увеличении секреции биологически активных веществ, продуцируемых клетками трансплантата [477, 479], пролонгировании срока выживаемости, стимуляции пролиферативных процессов [135], а также протекции трансплантата от агрессии иммунокомпетентных клеток реципиента [134, 512]. Защитный агент дополнительный трансплантат, который пересаживают вместе с основным трансплантатом, выполняет функцию протектора (например, клетки Сертоли) и помогает предотвратить реакцию отторжения [215]. Использование комбинированной трансплантации может способствовать улучшению функционирования основного трансплантата за счет регуляторнотрофических факторов, которые секретируются дополнительным трансплантатом. Это особенно важно для гетеротопических тканевых/клеточных трансплантатов, которые при пересадке вначале не имеют васкулярной поддержки, вследствие чего наблюдается некроз и деструкция трансплантата.
До настоящего времени не проведены комплексные исследования различных аспектов проблем в комбинированной трансплантации клеток/ткани эндокринных желез при гормонодефицитных состояниях. Актуальным является всестороннее изучение эффективности комбинированной трансплантации эндокринных желез, в том числе как метода лечения полиэндокринопатий, когда требуется замещение функции одновременно нескольких эндокринных желез.
На современном этапе развития технологий клеточного культивирования применение технологий клеточного культивирования, использование тканевых и клеточных трансплантатов становится все более распространенным. Однако при использовании этого метода для лечения эндокринных нарушений необходимо учитывать, что функциональной единицей эндокринных тканей являются конгломераты клеток (фолликулы, островки и др.), поэтому в трансплантате важно сохранить нативную тканевую архитектуру и регуляторные взаимоотношения, а это возможно при получении органотипической культуры.
Комбинированный метод трансплантации требует решения задачи по изучению целесообразности и возможности предварительного совместного культивирования клеток разных тканей, что особенно важно для эндокринных тканей, связанных между собой в организме сложными нейрогуморальными отношениями в рамках гипоталамогипофизарноэффекторной оси. Необходимо также решить вопрос о том, могут ли клетки адреналового кортекса, которые секретируют иммуносупрессорные гормоны, оказывать иммунопротекторный эффект при комбинированной трансплантации. При всем этом для достижения максимально позитивного трофического эффекта и предотвращения подавления секреторной функции или жизнедеятельности важно учитывать, в какой регуляторно-метаболической взаимосвязи находятся используемые эндокринные ткани.
Потребность в долгосрочном хранении донорского материала способствовала разработке технологий криоконсервирования клеток и тканей эндокринных желез [27, 81, 82, 88, 120]. Несмотря на достигнутые успехи в об

bibliography

ВЫВОДЫ
Диссертационная работа содержит теоретическое и экспериментальное обоснование нового решения проблемы повышения эффективности лечения гормональной недостаточности (гипотиреоза, сахарного диабета I типа, гипокортицизма, андрогенодефициного состояния), которое состоит в использовании метода комбинированной трансплантации, а также предтрансплантационной обработки биологического материала (тканей щитовидной, поджелудочной желез, надпочечников и семенников) путем культивирования и криоконсервирования, что позволило не только повысить гормональную продукцию, но и продлить срок выживаемости трансплантата в организме реципиента.
1. Установлена потенциальная возможность повышения эффективности терапии экспериментальных гипотиреоза, сахарного диабета 1 типа, гипокортицизма, андрогенодефицитного состояния у животных за счет использования комбинированного подхода в предтрансплантационной обработке биологического материала (культивирование, криоконсервирование, рекультивирование) и трансплантации органотипических культур эндокринных желез. Определены оптимальные комбинации тканей эндокринных желез в трансплантате при лечении исследованных патологий.
2. Показано, что комбинированное культивирование и комбинированное рекультивирование тканей эндокринных желез оказывает выраженное положительное влияние на уровень гормональной секреции и пролиферативные процессы in vitro, улучшает функционирование и выживаемость трансплантатов in vivo в сравнении с результатами, полученными для монокультур.
3. Органотипическое монокультивирование тканей щитовидной железы, надпочечников и семенников новорожденных поросят способствует сохранности гормонопродуцирующей функции и реакции эндокринной ткани на тропные гормоны гипофиза в течение первых 3 суток; в последующие 45 сутки культивирования определяется снижение секреторной активности тканей. Органотипическое монокультивирование фрагментов ткани поджелудочной железы, а также изолированных островков, в течение 56 суток, не сопровождается снижением инсулин-продуцирующей функции.
4. Гистологическими исследованиями установлены морфологические особенности переживания фрагментов эндокринных тканей при органотипическом моно- и комбинированном культивировании. Монокультивирование тканей щитовидной железы, надпочечников и семенников новорожденных поросят и половозрелых крыс сопровождается развитием дегенеративно-дистрофических процессов, начинающихся в центральной части фрагментов на 2-3 сутки и распространяющихся на периферические участки в последующие сутки. При монокультивировании ткани поджелудочной железы новорожденных поросят наблюдается значительный аутолиз ацинарных клеток, который отсутствует при комбинированного культивировании с тканями надпочечников или семенников.
5. При комбинированном органотипическом культивировании щитовидной железы новорожденных поросят установлено: присутствие в культуре эксплантата гипофиза вызывает повышение секреции Т4 в среднем на 50%, что сохраняется на протяжении всего срока культивирования; в присутствии ткани надпочечников происходит повышение уровня Т4 в 1,52,5 раза; присутствие ткани семенников не влияет на секрецию гормона по сравнению с монокультурой. Гистологическими исследованиями установлено, что в образцах культур щитовидной железы, комбинированных с тканью надпочечников и эксплантатом гипофиза, наблюдаются все признаки повышения гормональной секреции, а в образцах культур, комбинированных с тканью семенников были выявлены признаки пролиферации фолликулярного эпителия.
6. Комбинированное органотипическое культивирование ткани надпочечных желез новорожденных поросят с двумя эксплантатами аденогипофиза приводит к повышению секреции кортизола на 66%. В результате криоконсервирования происходит снижение уровня секреции кортизола фрагментами ткани надпочечников в среднем на 20%, однако комбинированное рекультивирование криоконсервированной ткани в присутствии эксплантатов аденогипофиза позволяет достичь уровня продукции гормона на 43% выше, чем при монорекультивировании.
7. Комбинированное культивирование ткани поджелудочной железы новорожденных поросят с тканью надпочечников сопровождается прогрессирующим уменьшением уровня инсулина в питательной среде по сравнению с монокультурой; реакция на присутствие стимулирующей концентрации глюкозы отсутствовала, что свидетельствовало о подавлении функции островков Лангерганса в этой культуре глюкокортикоидами. При комбинированном культивировании с тканью семенников достоверных отличий в содержании инсулина не наблюдалось, что свидетельствовало о сохранении инсулинопродуцирующей функции островков в подобранных условиях комбинированного культивирования.
8. Сравнительное изучение результатов, полученных in vitro при комбинированном культивировании ткани семенников двух видов животных (половозрелые крысы и новорожденные поросята), показало, что культивирование ткани семенников с эксплантатом гипофиза и тканью надпочечных желез приводит к уменьшению уровня секреции тестостерона по сравнению с монокультурой. Подобный эффект наблюдался in vivo при комбинированной алло- и ксенотрансплантации, что свидетельствует об угнетении функции тестостеронпродуцирующих клеток семенников, пребывающих длительное время в присутствии тропных факторов, выделяемых гипофизом, а также глюкокортикоидов, секретируемых надпочечниками.
9. Разработаны методы криоконсервирования органотипических культур щитовидной железы, надпочечников и семенников новорожденных поросят с на основе использования ДМСО и быстрых (85-100°С/мин) скоростей охлаждения, позволяющие сохранять основные структурно-функциональных свойства эндокринных тканей. Показано, что введение дополнительного этапа реабилитации криоконсервированных культур после размораживания рекультивирования способствует восстановлению их гормональной активности и способности к реакции на стимуляторы гормонопоэза, а также имеет иммуномодулирующее влияние на выживаемость эндокринной ткани при трансплантации, возможно, за счет селективного удаления клеток, экспрессирующих антигены ГКГ II класса, что было установлено с помощью иммуногистохимического анализа.
10. Установлено, что ксенотрансплантация нативных фрагментов и органотипической культуры щитовидной железы новорожденных поросят крысам с послеоперационным гипотиреозом компенсирует тиреоидную недостаточность в среднем на 50% по сравнению с интактными животными. Комбинированная ксенотрансплантация фрагментов ткани щитовидной железы с фрагментами ткани семенников позволяет повысить этот показатель до 71%, а с фрагментами ткани надпочечников до 85%. Показано преимущество комбинированной трансплантации криоконсервированной и рекультивированной культур щитовидной железы с эксплантатом гипофиза, в результате которой увеличивается уровень Т4 в плазме крови животныхреципиентов соответственно на 43% и 17% по сравнению с монотрансплантацией. Гистологическими исследованиями комбинированных трансплантатов установлена лучшая сохранность и признаки секреторной активности фолликулов щитовидной железы (на 30 сутки), а также признаки пролиферации фолликулярного эпителия (на 120 сутки).
11. Сравнительная оценка эффективности восстановления уровня гормонов в плазме крови реципиентов с экспериментальной гормональной недостаточностью при использовании алло- и ксенотрансплантации эндокринных тканей половозрелых крыс и новорожденных поросят позволила установить преимущество комбинаций ксеногенного материала. При комбинированной ксенотрансплантации ткани щитовидной железы с тканью надпочечников, семенников и эксплантатом гипофиза были получены показатели содержания Т4, превышающие на 30% (при комбинации с тканью надпочечников) и на 9% (при комбинации с тканью семенников) по сравнению с аллотрансплантацией.
12. Монотрансплантация нативных фрагментов надпочечников новорожденных поросят, а также ткани надпочечников после различных видов предтрансплантационной обработки (органотипическая культура, криоконсервированние и рекультивированние) адреналэктомированным крысам приводит к появлению кортизола в крови, что связано с функционированием пересаженной ткани. В результате комбинированной трансплантации нативной, криоконсервированной и рекультивированной ткани надпочечных желез с эксплантатом аденогипофиза содержание кортизола в крови экспериментальных животных увеличивается соответственно на 34, 42 и 94% по сравнению с монотрансплантатом. Гистологический анализ выявил позитивное влияние эксплантата аденогипофиза на сохранность ткани надпочечников в комбинированном трансплантате, что проявлялось в уменьшении некротизации центральных участков пересаженных фрагментов надпочечников, по сравнению с монотрансплантацией.
13. Экспериментально установлена потенциальная возможность повышения эффективности лечения инсулинозависимого сахарного диабета путем комбинированной ксенотрансплантации ткани поджелудочной железы новорожденных поросят с тканью надпочечников или семенников. Использование комбинированной трансплантации криоконсервированной органотипической культуры поджелудочной железы ускоряло коррекцию гипергликемии (2 недели в отличие от 34 недель при монотрансплантации). На основании комплекса показателей углеводного обмена (тест толерантности к глюкозе, содержание гликозилированного гемоглобина) установлена компенсация сахарного диабета у животных с комбинированной трансплантацией тканей поджелудочной железы и семенников на длительном сроке наблюдения (3 месяца). Гистологическими исследованиями показано, что достигнутый эффект обусловлен не только фукционированием трансплантата, но и стимуляцией регенеративных процессов в поджелудочной железе реципиента.
14. Интрапортальная монотрансплантация островков поджелудочной железы новорожденных поросят в течение 1214 суток приводит к нормализации уровня глюкозы у кроликов с аллоксановым диабетом, однако после 2931 суток у реципиентов наблюдается возврат к гипергликемическому состоянию. Интрапортальная комбинированная трансплантация островков поджелудочной железы с клетками Сертоли позволяет повысить выживаемость островков в 2,3 раза по сравнению с монотрансплантатом. Степень компенсации углеводного обмена у животных с комбинированной трансплантацией значительно выше, чем у животных с монотрансплантацией.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Або Жеяб Салех, Луговой С.В. Губина Н.Ф. Влияние криоконсервирования на секрецию тестостерона органотипической культурой семенников крыс // Патогенетичні аспекти фармакотерапії ендокринних захворювань. - Харків. - 2002. - С.17-18.
2. Алабедалькарім Н.М., Божок Г.А., Легач Є.І., Бондаренко Т.П. Експериментальна трансплантація органотипової культури надниркових залоз в ало- та ксеногенній системах. Матеріали ІІІ з’їзду трансплантологів України // Трансплантологія. 2004. Т.7, №3. С.223-225.
3. Александрова Г.Ф., Трошина Е.А., Абдулхабирова Ф.М. Особенности течения и терапии гипотиреоза у пациентов с ишемической болезнью сердца // Лечащий Врач. 2002. № 07-08. С. 79-88.
4. Балаболкин М.И., Клебанова М.И., Креминская В.М. Дифференциальная диагностика и лечение эндокринных заболеваний (руководство). М.: Медицина. 2002. 138 с.
5. Белоус А.М., Бондаренко В.А. Структурные изменения биологических мембран при охлаждении. - Киев: Наук. думка, 1982. 256 с.
6. Белоус А.М., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф. Биохимия мембран. Замораживание и криопротекция // М.: Высш.шк., 1987. 80 с.
7. Билявская С.Б., Бондаренко Т.П., Алабедалькарим Н.М., Божок Г.А. Регуляция тиреоидной секреции специфическими и неспецифическими стимуляторами гормонопоэза in vitro // Укр. Біохім. Журн. 2004. Т.76, №4. С.125.
8. Білявська С.Б., Бондаренко Т.П., Алабедалькарім Н.М., Божок Г.А. Подвійний ефект надниркових залоз на базальний та стимульований гормонопоез культури тиреоїдної тканини // Установчій з`їзд Українського товариства клітинної біології. Львів, 2004. С. 151.
9. Божок Г.А., Алабедалькарім Н.М., Легач Є.І. Вплив кріоконсервування на імуно-біологічні властивості фрагментів надниркових залоз при алотрансплантаціі // Трансплантологія. - 2004. - Т.5, №1.- С.88-92.
10. Бондаренко Т.П., Божок Г.А, Алабедалькарім Н.М., Легач Є.І. и др. Ксенотрансплантація кріоконсервованного ендокринного матеріалу як метод корекції гіпофункції залоз в експерименті // Трансплантологія. - 2003. - Т.4, №4. - С.60-63.
11. Бондаренко Т.П., Легач Е.И. Секретирующая способность адренокортикальной ткани новорожденных и половозрелых свиней // Проблемы криобиологии. - 1998. - №2. С. 50-54.
12. Бондаренко Т.П., Луговой С.В. Влияние димексида на секретирующую способность тироцитов новорожденных поросят // Проблемы криобиологии. - 2001. - №1. - С. 48-51.
13. Бредихин Т.Ф. Эффективность пересадки щитовидной железы в переднюю камеру глаза //Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1962. Т. 53, № 3. С. 92-96.
14. Габер Е.С., Данилова Л.В., Князева Е.Ф. и др. Сперматогенез и его регуляция. - М.: Наука, 1983. - 232 с.
15. Гаврилюк Б.К., Сафронов В.П. Органотипическое культивирование тканей. - М.: Наука, 1983. 128 с.
16. Гальченко С.Є., Бєлочкіна І.В., Мамонтова А.В. и др. Вплив препаратів із ксеногенної підшлункової залози на рівень глікемії і вільнорадикальні процеси у щурів з експериментальним цукровим діабетом // Мед. хімія. - 2004. - №4. - С. 63-67.
17. Геращенко Г.В. Функціональні характеристики органної культури надниркових залоз при криоконсервуванні та ксенотрансплантації. - Автореф. дис. канд. біол. наук, Харків., 2002. - 18 с.
18. Герег Ш. Количественный анализ стероидов. - М.: Мир, 1985. - 505с.
19. Гехман Б.С. О лечении импотенции пересадкой яичка на сосудистой ножке // Урология и нефрология. - 1964. - №1. С. 59-60.
20. Гладкова А.И., Бондаренко Л.А., Даценко Б.М. Достижения и перспективы развития криобиологии и криомедицины: Тез. Докл. междунар. конф. (Харьков, 1012 февр. 1988). Харьков: Б.и. С. 63.
21. Гнилорыбов Т.Е., Гришин Н.П., Семенов В.С. Пересадка надпочечника на сосудистой ножке при аддисоновой болезни. // Здравоохранение Белоруссии. 1964. - № 2. - С. 63-65.
22. Гнилорыбов Т.Е. Гомотрансплантация яичек при их гипофункции или отсутствии // Урология и нефрология. - 1965. - № 2. - С.50-53.
23. Гончарова В.Н., Ильина О.Н. О функциональной активности коры надпочечника при болезни Иценко-Кушинга после двусторонней тотальной адреналэктомии // Пробл. Эндокринологии. - 1973. - № 6. - С.37-39.
24. Горбатюк Д.Л. Трансплантация яичка в эксперименте. Автореф. дис. канд. мед. наук: Москва, 1971. 23 с.
25. Гордиенко В.М., Козырицкий В.Г. Ультраструктура желез эндокринной системы. Киев: Здоров’я, 1978. 288 с.
26. Гордиенко Е.А., Пушкарь Н.С. Физические основы низкотемпературного консервирования клеточных суспензий. - Киев: Наук.думка, 1994. 142 с.
27. Грищенко В.И., Чуйко В.А., Пушкарь Н.С. Криоконсервация тканей и клеток эндокринных органов. - К.: Наукова думка, 1993. 241 с.
28. Губина Н.Ф., Карпенко Л.Г. Влияние замораживания до -196оС на связывание адренергических гормонов-медиаторов и активность аденилатциклазы в клетках коры надпочечников животных // Патофизиологические аспекты действия холода на организм: Сб. научн. тр. - Харьков, 1989. - С.36-38.
29. Дедов И.И. Фадеев В.В. Мельниченко Г.А. Недостаточность надпочечников. - Москва, 2002. - 320 с.
30. Дедов И.И., Шестакова М.В. Сахарный диабет. Руководство для врачей. - М., 2003. - 265с.
31. Денисов В.К. Трансплантология. Учебное пособие. Киев. Наукова думка. 1998. - 248с.
32. Долот В.Д. Вивчення ефективності клінічного використання трансплантації культури тканин щитоподібної залози новонароджених поросят як методу лікування гіпотиреозу // Трансплантологія. 2003. Т.4, №1. С.143144.
33. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология // М.: ООО ”Медицинское информационное агентство”, 2003. 604 с.
34. Дрожевецкая И.А. Эндокринная система растущего организма. - М.: Высшая школа, 1987.- 137с.
35. Егоров У.И. Лечение болезней надпочечных желез используя трансплантацию культуры адренокортикальной ткани новорож­денных поросят // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. - 1994. - Т.117, №4. - С.389-391.
36. Ефимов А.С., Тронько Н.Д., Комиссаренко И.В. и др. Влияние алло - и ксенотрансплантации островковых клеток поджелудочной железы на течение инсулинзависимого сахарного диабета и диабетических ангиопатий // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1983. - Т. 95, №5. - С.71-72.
37. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захарин Е.А., Западнюк Б.В. Лабораторные животные: Разведение, содержание, использование в эксперименте.- 3-е изд.- Киев, 1983.- 254 с.
38. Зеленевский Г. Аутотрансплантат коры надпочечников. В кн.: Современные вопросы эндокринологии. М., 1969. - С.128-131.
39. Змушко Е.И., Белозеров Е.С. Медикаментозные осложнения // С.-Петербург, Краткий справочник. 2001. - 104с.
40. Золотухина В.М., Тарасенко Н.Е Нові пропозиції негормональної корекції порушеного сперматогенезу // Патогенетичні аспекти фармакотерапії ендокринних захворювань. - Харків. - 2002. - С.46.
41. Зубкова С.Т., Тронько М.Д. Сердце при эндокринных заболеваниях // Киев. 2006. 146 c.
42. Ильина О.И. Отдаленные результаты и реабилитация больных после двусторонней тотальной адреналэктомии по поводу болезни Иценко-Кушинга. Автореф. дис. канд. мед. наук, М., 1977. - 21 с.
43. Исмаилов С.И.,Туракулов И.Х., Ташходжаева Т.П. и др. Влияние криоконсервирования и факторов трансплантации на морфофункциональное состояние щитовидной железы у собак // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1989. Т.108, №12. С. 727-730.
44. Кабак Я.М. Практикум по эндокринологии.- М.:Сов. наука, 1968. - С. 61-64.
45. Калинченко С.Ю., Вадов В.В., Ворслов Л. Возрастной дефицит андрогенов (синдром Padam) у мужчин: диагностика и лечение // Врач. 2003. №6. С.2124.
46. Караченцев Ю.И., Лях И.А., Македонская В.А. Влияние аллотрансплантации криоконсервированной ткани щитовидной железы на гормональный и иммунный статус больных послеоперационным гипотиреозом // Проблемы криобиологии. - 2001. - №1. - С. 65-69.
47. Караченцев Ю.И., Лях И.А., Хазиев В.В. Эффективность и перспектива применения трансплантации криоконсервированной щитовидной железы как метод лечения различных форм первичного гипотиреоза, в том числе послерадиационного // Inter. J. Rad. Med. 1999. Т.34, №34. С.104108.
48. Керос В.А. Криоконсервирование тестикулярной ткани плодов человека и создание низкотемпературного банка для использования в клинической трансплантологии// Пробл. криобиологии. - 1999. - №3. - С.54-59.
49. Керос В.А. Кріоконсервування фетотестикулярної тканини людини // Автореф. дис. канд. мед. наук: - Харків, 2001. 19с.
50. Ким Джон Сан. Лечение некоторых форм гипокортицизма при помощи трансплантации органных культур клеток коры надпочечников новорожденных поросят //Автореф. дисс. ...канд. мед. наук.- Киев, 1986. - 22с.
51. Кирпатовский И.Д. Нейроэндокринная трансплантация как новое направление в современной трансплантации. Успехи сочетанных аллотрансплантаций органы гипоталамо-гипофизарно-гонадной системы // Вестник трансплантологии и искусственных органов. - 2005. №3. - С.14-15.
52. Кирпатовский И.Д., Васильев В.И., Зюзько А.М., Головко М.И. Одномоментная пересадка яичка и гипофиза // Хирургия. - 1980. - №3. С.9-11.
53. Ковалев А.А. Повторные и множественные трансплантации культур криоконсервированных островков клеток поджелудочной железы в лечении больных с осложненным инсулинзависимым сахарным диабетом // Автореф. дис. ... д-ра мед. наук.- Харкiв, 1996. - 57с.
54. Комиссаренко И.В. и соавт. Трансплантация надпочечников // Врачебное дело. 1988. - №11. - С.2932.
55. Легач Е.I. Вплив крiоконсервування на адренокортикальну тканину // Автореферат дисканд.мед.наук. - Харкiв, 1998. 18с.
56. Легач Е.И. Синтез кортизола тканевыми и клеточными культурами коры надпочечных желез новорожденных и половозрелых свиней // Проблемы криобиологии.- 1997. - №3. С. 63-65.
57. Легач Е.И. Ретроградный способ тиреоидэктомии крыс как адекватная модель гипотиреоза // Трансплантология. 2005. Т.8, №2. С.92-94.
58. Легач Е.И., Чуйко В.А., Бондарева И.М. Влияние димексида и пропандиола на освобождение кортизола срезами адренокортикальной ткани и ее чувствительность к действию стимуляторов // Проблемы криобиологии. - 1997. - №4. С. 37-41.
59. Лечение хронического гипокортицизма методом трансплантации культуры клеток коры надпочечных желез: Метод.рекомендации // Сост.: Тронько Н.Д., Рыбаков С.И., Комиссаренко И.В. и др. - Киев. - 1990. - 24с.
60. Луговой С.В. Бондаренко Т.П., Губина Н.Ф., и др. Органная культура щитовидной железы новорожденных поросят как объект криоконсервирования // Проблемы криобиологии. - 2003. - № 2.- С. 98-103.
61. Луговой С.В., Бондаренко Т.П., Гурина Т.М., Глушко Т.А. Влияние режимов замораживания на морфологические характеристики органной культуры щитовидной железы новорожденных поросят // Проблемы эндокринной патологии. - 2003. - №3. - С. 77-82.
62. Лучицкий Е.В., Турчин И.С., Кобяков С.К., Потиха О.П. Экспериментально-клиническое обоснование применения ксенотрансплантации клеточной культуры семенников в андрологии // Сб.: Сексология и андрология. — Киев, 1993. - Вып. 1. С. 71-75.
63. Лучицький E.B., Кобяков С.К., Зубкова Г.А. и др. Iмуногеннiсть та функцiонадьна активнiсть органноi ксенокультури сiм'яникiв// Трансплантологiя. - 2000. - Т.1, № 1. - C.159-160.
64. Мельниченко Г.А., Александрова Г.Ф., Анциферов М.Б. и др. Роль минералокортикоидов в лечении больных с хронической надпочечниковой недостаточностью // Лечащий Врач. 2003. №10. C. 38-43.
65. Мельниченко Г.А., Фадеев В.В. Лабораторная диагностика надпочечниковой недостаточности // Пробл. эндокринологии. 1997. Т.43, №5. С. 39-47.
66. Никитина В.В. Трансплантация надпочечников в клинике и эксперименте // Пробл. Эндокринологии. 1974. - №3. - С. 114-119.
67. Никитина В.В., Капиэников М.М. Сравнительная оценка состояния ауто- и алло трансплантантов надпочечников в динамике. В кн.: Ранние проявления тканевой несовместимости. М., 1976. - С. 74-78.
68. Никоненко А.С., Сандомирский Б.П., Ковалев А.А. Ксенотрансплантация криоконсервированных культур островковых клеток поджелудочной железы при инсулинзависимом сахарном диабете и его хронических осложнениях: Метод. рекомендации //Запорожье, 1995. 18 с.
69. Орлова Ю.А. Структурно-функциональные характеристики миокарда левого желудочка и особенности вариабельности ритма сердца у больных первичным гипотиреозом с артериальной гипертензией // Автореф. дисканд.мед.наук. - Нижний Новгород, 2006. 12c.
70. Патент 4567 А Україна, МПК7, №12N5/08 A01N1/02, Спосіб кріоконсервування органної культури надниркових залоз новонароджених поросят / Т.М.Гуріна, Н.М. Алабедалькарім, В.Д. Устиченко, Т.П. Бондаренко. (Україна). Заявлено 7.06.2004; Опубл. 17.01.05 // Промислова власність. Бюл. №1.
71. Патент 4845 А Україна, МПК7 А12N5/08, A61K35/55. Спосіб підготовки кріоконсервованої органотипової культури надниркової залози для трансплантації / Н.М. Алабедалькарим, Г.А. Божок, Е.И. Легач, Т.П. Бондаренко (Україна). Заявлено 29.04.2004; Опубл. 15.02.05 // Промислова власність. Бюл. №2.
72. Патент 34848 А Україна, МПК5 С12N5/02. Спосіб кріоконсервування культури клітин адренокортикальної тканини / Т.П. Бондаренко, Є.І. Легач (Україна). Заявлено 13.07.99; Опубл. 15.03.01 // Промислова власність. Бюл. № 2, ІІ ч. С. 1.73.
73. Патент 9367 А Україна, МПК7 А01N1/02. Спосіб кріоконсервування органної культури щитоподібної залози новонароджених поросят / Т.П. Бондаренко, Е.И. Легач, Г.А. Божок, Н.М. Алабедалькарим (Україна). Заявлено 28.03.05; Опубл. 15.09.05 // Промислова власність. Бюл. №9.
74. Петунина Н.А. Субклинический гипотиреоз: подходы к диагностике и лечению // Трудный пациент. 2006. Т.4, №2. C.3035.
75. Попова Л.И. Разработка иммунологических подходов для решения эффективности трансплантации эндокринной ткани поджелудочной железы при сахарном диабете : Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Киев, 1988. - 26с.
76. Потемкин В.В. Эндокринология:Учебник. М.: Медицина, 1999. 640 с.
77. Потиха О.П., Турчин И.С., Тронько Н.Д. Цитологическая и гормональная характеристика клеточных культур из семенников новорожденных поросят // Физиологический журнал. - 1990. - Т.36, №4. С. 80-84.
78. Потіха О.П., Челнакова І.С., Турчин І.С. Ауто- і ксенотрансплантація органних культур сім’яників кастрованим щурам та щурам з експериментальним гіпогонадізмом // Физиол. Журнал. 1993. Т.39, №5-6. С. 70-75.
79. Прохоров А.В., Третьяк С.И., Горанов В.А., Маркелов Д.В. Свободная трансплантация культуры в-клеток в лечении экспериментального сахарного диабета // Актуальные вопросы современной медицины: Материалы юбилейной научн. конф., посв. 80-летию БГМУ в двух частях. ЧастьII / Под ред. С.Л.Кабака. - Мн.: БГМУ, 2001, С.91-93.
80. Прядко К.А., Шкуматов Л.М., Горох Г.А., Багель И.М. Определение концентрации тироксина в крови крыс с помощью радиоиммунологических наборов, предназначенных для определения уровня гормона в крови человека // Проблемы эндокринологии. 2000. Т. 46, №3. - С. 28-31.
81. Пушкарь Н.С., Утевский А.М., Чуйко В.А. и др. Криоконсервирование и трансплантация щитовидной железы человека // Криобиология и криомедицина. - 1983. - №11. - С.64-74.
82.