Тараканова Юлия Николаевна Влияние условий адсорбции моноклональных антител на их антигенсвязывающую активность в твёрдофазном иммуноферментном анализе

brief description

Тараканова Юлия Николаевна. Влияние условий адсорбции моноклональных антител на их антигенсвязывающую активность в твёрдофазном иммуноферментном анализе: диссертация ... кандидата Биологических наук: 14.03.09 / Тараканова Юлия Николаевна;[Место защиты: ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова»], 2019

Тараканова Юлия Николаевна Влияние условий адсорбции моноклональных антител на их антигенсвязывающую активность в твёрдофазном иммуноферментном анализе

ОГЛАВЛЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

кандидат наук Тараканова Юлия Николаевна

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Краткая история иммуноферментного анализа (ИФА)

1.1.1. Изобретение радиоиммунологического анализа (РИА)

1.1.2. Возможность использования ферментной метки в

иммунохимическом анализе

1.1.3. Открытие способа получения моноклональных антител методом

слияния клеток

1.1.4. Краткий обзор последних достижений и дальнейшего

развития иммуноферментного анализа

1.2. Особенности иммунохимических процессов в «классических» твердофазных ИФА

1.2.1. Скорость реакций

1.2.2. Формирование монослоя иммобилизованных молекул на твердой фазе

1.2.3. Вопрос о прочности прикрепления молекул к твердой фазе и друг к

другу в твердофазных ИФА

1.2.4. Образование прочных циклических иммунных комплексов в сэндвич-методе

1.2.5. Иммунохимические факторы, определяющие

аналитическую чувствительность твердофазных ИФА

1.2.6. Проблема инактивации антител при пассивной адсорбции на

твердой фазе

Глава 2. Методы исследований и использованные материалы

2.1. Использованные материалы

2.2. Методы исследований

2.2.1. Получение гибридом - продуцентов моноклональных антител

2.2.2. Определение антигенсвязывающей активности моноклональных антител с антигеном, адсорбированным на поверхность

планшетов из полистирола

2.2.3. Очистка моноклональных антител с помощью

ионообменной хроматографии

2.2.4. Определение белка

2.2.5. Приготовление конъюгата р24ВИЧ с LC-LC-биотином

2.2.6. Адсорбция антител на поверхность планшетов для

определения антигенсвязывающей активности антител

2.2.7. Определение оптимального рН адсорбции тестируемых антител

2.2.8. Определение оптимальной концентрации антител в адсорбционных растворах при иммобилизации моноклональных

антител на поверхность планшетов

2.2.9. Определение антигенсвязывающей активности

иммобилизованных моноклональных антител

2.2.10. Количественное определение относительной

антигенсвязывающей активности антител

2.2.11. Приготовление антител и HBsAg, меченных

2.2.12. Определение концентрации 1251-НВвА§

2.2.13. Определение количества антител, адсорбированных на

поверхности планшетов из полистирола

2.2.14. Радиоиммунологическое определение количества антител, сохранивших антигенсвязывающую активность после адсорбции

2.2.15. Конъюгация антител с флуоресцентным красителем Су5

2.2.16. Определение количества меченых Су5 моноклональных антител, иммобилизованных на поверхность планшетов при

использовании адсорбционных буферов с различными значениями рН

2.2.17. Определение поверхностной концентрации иммунных

комплексов, образованных при различных условиях адсорбции антител

2.2.18. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-ПААГ)

2.2.19. Статистическая обработка данных

Глава 3. Результаты исследований

3.1. Получение гибридом - продуцентов моноклональных антител к

белку р24 вируса иммунодефицита человека (ВИЧ)

3.2. Очистка моноклональных антител и их характеристика

3.3. Оценка чистоты моноклональных антител

3.4. Отбор моноклональных антител, пригодных для анализа в

качестве адсорбируемых

3.5. Определение оптимального рН адсорбции иммобилизуемых антител

в условиях избыточной насыщающей концентрации

3.6. Подбор оптимальных насыщающих концентраций тестируемых

антител при оптимальном рН адсорбции

3.7. Определение относительной антигенсвязывающей активности антител после адсорбции на поверхность планшетов (при оптимальной насыщающей концентрации антител в адсорбционном

буфере)

3.8. Определение доли активных антител в общем количестве моноклональных антител, адсорбированных на поверхность планшетов

3.9. Определение количества антител, адсорбированных на поверхности полистироловых планшетов при различных рН с

125

использованием меченых I антител

3.10. Определение количества антител, сохраняющих активность после адсорбции на поверхность полистироловых планшетов при разных

значениях рН

Обсуждение

Выводы

Список сокращений

Список литературы