РОЗРОБКА І ВИГОТОВЛЕННЯ ДІАГНОСТИКУМІВ ДЛЯ ІМУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛІЗУ ПРИ КЛАСИЧНІЙ ЧУМІ СВИНЕЙ, ХВОРОБІ АУЄСКІ, ТЕШЕНА, БЕШИСІ, ЛЕЙКОЗІ ВЕЛИКОЇ РОГАТОЇ ХУДОБИ, ТРИХІНЕЛЬОЗІ СВИНЕЙ ТА ПРАКТИЧНЕ ЇХ ЗАСТОСУВАННЯ (ТЕОРЕТИЧН

Краткое содержание

         Очищення і концентрування вірусів КЧС, хвороби Тешена, Ауєскі, лейкозу великої рогатої худоби  з використанням адсорбційної і молекулярноситової хроматографії  на  макропористих сорбентах.

        При розробці  методу  імуноферментного аналізу важливим етапом роботи було одержання високоочищених концентрованих  вірусних  антигенів, придатних для постановки реакції.

         Нами були  апробовані  такі  методики очищення і концентрування вірусів: ультрацентрифугування,  ультрафільтрація, адсорбція і елюція на еритроцитах різних тварин,  поліетиленгліколі,  сульфаті амонію  та інші.

         Проте вони не дозволили одержати достатню кількість очищеного вірусного матеріалу для  використання  в реакції імуноферментного  аналізу  і працювати  з великими об'ємами вірусної сировини, яка була недостатньо очищена від клітинних компонентів.

          Для одержання очищених і концентрованих вірусних препаратів нами  розроблена  високотехнологічна  методика  адсорбційної та гель-хроматографії на макропористих сорбентах (МПС).

          Численними дослідженнями з використання макропористих сорбентів (МПС) для очищення і  концентрування  вірусів  хвороби Ауєскі (ВХА), Тешена, класичної чуми свиней, лейкозу великої рогатої худоби доведено, що віруси можуть активно адсорбуватися на поверхні МПС.

          Досягнення високого ступеня чистоти, розділення тканинних компонентів від  вірусних, можливе  лише за ретельного  вибору  співвідношень між розмірами віріонів і діаметром пор сорбенту, розміру гранул МПС, вибору оптимальних параметрів адсорбційної і гель хроматографії.

         Макропористі сорбенти успішно використовувались для очищення і  концентрування  вірусів  грипу (Коліков В.М., Мчедлішвілі Б.В., 1986).

  Параметри макропористих сорбентів,  які були використані в роботі наведено в таблиці 1.

         Для очищення і  концентрування  використовували  культуральний вірус хвороби  Ауєскі, шт.  УНДІЄВ-18В,  хвороби Тешена -шт. "Закарпатський",  вірус класичної чуми свиней- шт."ЛК",  вірус лейкозу великої рогатої худоби, репродукований в культурі клітин FLK.     

         Хроматографію та контроль виходу пікових фракцій  проводили  за допомогою  ультрафіолетового  детектора типу "Увікорд".

         Вибір сорбентів здійснювали із розрахунку розмірів вірусів  та їх властивостей.

  Розроблений нами метод  очищення і концентрування вірусів з  використанням  макропористих  сорбентів  включає  три  етапи: попередня очистка вірусутримуючої суспензії, адсорбційна хроматографія, моле- кулярно-ситова   хроматографія.

         Попередня очистка  вірусу хвороби Тешена включає етап обробки культуральної  вірусної  рідини  від  ліпідоутримуючих  компонентів  20  %-вим  розчином  хлороформу.

         Вірусутримуючу   рідину   хвороби  Ауєскі, КЧС, лейкозу великої рогатої  худоби  попередньо  очищали від антигенів клітинної природи шляхом   адсорбції   їх   на   сорбент   МПС 4000.

        Паспортні  дані  сорбента: середній діаметр пор - 4000 А, пористість - 2,16 см /г,   насипна маса  -  0,21 г/см,  об'єм колонки - 11 см³,  висота - 5 см,

переріз - 2,2 см². Культуральну вірусутримуючу рідину пропускали через колонки  з швидкістю 18 см/хв при рН 7,2-7,4.