Разработка иммуноферментной тест-системы для серологической диагностики парвовирусной инфекции крупного рогатого скота Яруллин, Айнур Ильнурович

Краткое описание

Яруллин Айнур Ильнурович. Разработка иммуноферментной тест-системы для серологической диагностики парвовирусной инфекции крупного рогатого скота : диссертация ... кандидата биологических наук : 16.00.03 / Яруллин Айнур Ильнурович; [Место защиты: Федер. центр токсик. и радиац. безопасности животных].- Казань, 2009.- 149 с.: ил. РГБ ОД, 61 10-3/239
ОГЛАВЛЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИкандидат биологических наук Яруллин, Айнур Ильнурович
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Классификация и общая характеристика парвовирусов.
1.2. Парвовирусная инфекция свиней.
1.3. Общие сведения о парвовирусах плотоядных.
1.3.1. Панлейкопения кошек.
1.3.2. Вирусный энтерит норок.
1.3.3. Парвовирусный энтерит собак.
1.4. Парвовирусная инфекция крупного рогатого скота.

Список литературы

Введение к работе
1.1 Актуальность темы.В структуре заболеваемости сельскохозяйственных животных наибольшее экономическое значение имеют респираторные, желудочно-кишечные болезни молодняка и патология органов воспроизводства маточного поголовья крупного рогатого скота (КРС), связанныесбесплодием, ранней эмбриональной смертностью и абортами, доминирующими возбудителями которых являются вирусы, относящиеся к различным таксономическим группам (Гаффаров Х.З., 1983; Иванов А.В., 2008).
Среди них по тяжести проявления клинической картины на первый план выходят герпесвирусная инфекция (ИРТ), вирусная диарея - болезнь слизистых (ВД-БС) крупного рогатого скота, парвовирусная и реовирусная инфекции, вызывающие не только поражения органов дыхания и пищеварения у телят, но и нарушения функций репродуктивных органов коров и быков. Доказано, что сперма быков, инфицированных этими вирусами, служит источником заражения коров и телок (Крюков Н.Н. с соавт., 1988; Глотов А.Г. с соавт., 2006; Broderson B.W. et al., 1998; Mandy Elschner, 1994; David Sandals et a!., 1995; Fulton R.W.etal., 2005).
Заслуживает внимание тот факт, что отечественные и зарубежные авторы придают большое значение в этиопатогенезе указанных выше форм патологий парвовирусу КРС, антигенно отличающийся от парвовирусов других видов животных и человека, вызывающий не только поражения органов пищеварения и дыхания у телят, но и нарушения воспроизводительной функции у коров (Сюрин В.Н., Фомина Н.В., 1979; David Sandals et al., 1995).
Парвовирусная инфекция КРС характеризуется широким географическим распространением среди естественно восприимчивых животных. Так, например, имеются сведения о выделении парвовируса в США, Европе, Северной Америке, Японии и в ряде других стран (Vincent J., 1971; Bachmann P. A., 1971; Storz J., Bates R., 1973; Inaba et. al., 1973; Крюков Н.Н. с соавт., 1988).
В лабораторной диагностике многих вирусных болезней широкое применение находит иммуноферментный анализ (ИФА) (Юсупов Р.Х., 2004; Khismatullina N.A., 2005; Юсупова Г.Р., 2009). Который особенно важен для выявления тех болезней, возбудители которых мало изучены, плохо размножаются в культурах клеток без видимого цитопатического действия (Мникова Л.А., Авилов B.C., Гоголев М.М., 1985; Кузнецов Д.П. с соавт., 1990).
Использование ИФА может иметь важное значение и для определения напряженности и прогнозирования длительности поствакцинального иммунитета у животных, а также изучения иммунного статуса в регионах, где проводилась вакцинация (Самуйленко А.Я. с соавт., 1988, 2006; Матвеева И.Н., 2006).
Однако до настоящего времени в РФ, по нашим представлениям, недостаточно раскрыта степень распространенности парвовирусной инфекции КРС, недооценивается этиологическая роль парвовируса при патологиях респираторно-кишечного тракта молодняка и нарушениях функций репродуктивных органов взрослого поголовья скота. На сегодняшний день
ветеринарная служба не располагает средствами, предназначенными для ретроспективной диагностики данной инфекции, созданными на основе достижений биотехнологии.
Поэтому особенно велика роль лабораторных исследований с использованием современных диагностических наборов на основе антигенных тест-систем иммуноферментного анализа.
Перечисленные выше нерешенные проблемы указывают на актуальность намеченных исследований.
1.2 Цель и задачи исследований.Целью данной работы явиласьразработка тест-системы ИФА, предназначенной для серологическойдиагностики парвовирусной инфекции крупного рогатого скота и определенияуровня поствакцинальных антител, а также определение степенираспространения этой инфекции в хозяйствах Республики Татарстан (РТ) ирегиона Среднего Поволжья. Для достижения поставленной цели необходимобыло решить следующие задачи:
1. Изучить биологические, физико-химические свойства штамма «Parvo32459» - возбудителя парвовирусной инфекции крупного рогатого скота;

Разработать технологию изготовления компонентов тест-системы ИФА, предназначенной для серологической диагностики парвовирусной инфекции крупного рогатого скота и определения уровня поствакцинальных антител, и стандартизировать условия ее проведения;

Провести оценку активности, специфичности и воспроизводимости парвовирусной иммуноферментной тест-системы путем тестирования сывороток крови различных возрастных групп крупного рогатого скота и сравнительного изучения степени корреляции результатов, полученных методами аналогичной направленности (РВН и РТГА);

Определить диагностическую ценность иммуноферментной тест-системы, провести анализ и интерпретацию результатов испытания непрямого твердофазного ИФА;

Провести серологический мониторинг в отношении парвовирусной инфекции крупного рогатого скота в хозяйствах РТ и региона Среднего Поволжья.

1.3 Научная новизна работы.На основе результатов серо-иммунологического мониторинга впервые представлены данные о степенираспространения парвовирусной инфекции крупного рогатого скота вхозяйствах РТ и региона Среднего Поволжья.
Впервые в РФ разработана «Тест-система ИФА для серологической диагностики парвовирусной инфекции крупного рогатого скота и определения уровня поствакцинальных антител». Оптимизированы условия ее проведения при исследовании сывороток крови животных взятых в одном разведении. Сравнительными исследованиями установлена чувствительность, специфичность и воспроизводимость диагностического иммуноферментного набора и выявлена положительная корреляция результатов, полученных с помощью методов аналогичной направленности (РВН и РТГА).
1.4 Практическая значимость работы.
Внедрение разработанной тест-системы ИФА в практику ветеринарных лабораторий РФ позволит решить проблему как серологической диагностики парвовируснои инфекции КРС, так и оценки напряженности поствакцинального иммунитета.
Материалы исследований по разработке и применению тест-системы ИФА вошли в научно-нормативные документы.
1.5 Апробация работы.Основные положения диссертации доложены на:научно-практической конференции молодых ученых и специалистов«Актуальные проблемы ветеринарии» - ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (Казань, 2007);международной научно-практической конференции, посвященной 135-летиюКазанской государственной академии ветеринарной медицины (КГАВМ)«Современные подходы развития АПК» (Казань, 2008); международнойнаучно-практической конференции, посвященной 50-летию ВНИИВВиМ«Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими ималоизученными инфекционными болезнями животных» (Покров, 2008).
1.6 Публикации результатов исследований.По теме диссертацииопубликовано 4 научные работы, в т.ч. 2 статьи в изданиях, рекомендованныхВАКРФ.
1.7 Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

Характеристика биологических и физико-химических свойств штамма «Parvo 32459» - возбудителя парвовируснои инфекции крупного рогатого скота.

Технология изготовления специфических компонентов тест-системы ИФА для серологической диагностики и определения уровня поствакцинальных антител.

Оценка диагностической ценности иммуноферментной тест-системы, анализ и интерпретация результатов испытания набора.

Результаты серологического мониторинга в отношении парвовируснои инфекции КРС в хозяйствах РТ и в ряде хозяйств соседних республик и областей.

1.8 Объем и структура диссертации.Диссертация изложена на 149страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: общаяхарактеристика работы, обзор литературы, материалы и методы исследований,результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований,выводы, практические предложения, библиографический списокиспользованной литературы, состоящий из 240 источников, в том числе 168иностранных авторов и приложение. Диссертация содержит 24 таблицы ииллюстрирована 4 рисунками.