Малиновская Юлия Александровна Разработка, оптимизация и противоопухолевая активность наносомальной формы доксорубицина при экспериментальной глиобластоме

Короткий опис

Малиновская Юлия Александровна Разработка, оптимизация и противоопухолевая активность наносомальной формы доксорубицина при экспериментальной глиобластоме

ОГЛАВЛЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

кандидат наук Малиновская Юлия Александровна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Мультиформная глиобластома человека

1.1.1 Классификация опухолей головного мозга. Клинические формы глиобластомы

1.1.2 Лечение глиальных опухолей головного мозга

1.2 Гематоэнцефалический барьер. Особенности доставки лекарственных веществ в мозг

1.2.1 Структурно-функциональная организация ГЭБ

1.2.2 ГЭБ в условиях патологии

1.2.3 Способы доставки лекарственных веществ через ГЭБ

1.3 Наносомальные системы доставки лекарственных средств

1.3.1 Полимерные наночастицы как системы доставки лекарственных средств

1.3.2 Основные методы получения полимерных наночастиц

1.3.3 Применение наночастиц для химиотерапии злокачественных новообразований

1.3.3.1 Пассивная доставка наночастиц в опухоль

1.3.3.2 Активный транспорт наночастиц в опухоль

1.3.3.3 Противоопухолевые препараты на основе полимерных наночастиц в клинических исследованиях

1.3.4 Полилактидные наночастицы как системы доставки лекарственных средств

1.3.4.1 Применение полилактидных наночастиц для лечения онкологических заболеваний

1.3.4.2 Полилактидные наночастицы для доставки лекарственных средств через ГЭБ

1.3.5 Особенности разработки наносомальных препаратов

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Реактивы и расходные материалы

2.2. Оборудование

2.3. Разработка метода получения оптимизированной наносомальной формы доксорубицина

2.3.1 Получение наносомальной формы доксорубицина методом двойных эмульсий

2.3.2 Получение наночастиц - плацебо

2.3.3 Получение полимера (РЬОЛ), модифицированного Су5.5 (РЬОЛ-Су5.5)

2.3.4 Получение флуоресцентно меченных наночастиц

2.3.5 Физико-химические характеристики наночастиц

2.3.5.1 Определение размеров наночастиц и распределения по размерам

2.3.5.2 Определение поверхностных потенциалов НЧ

2.3.5.3 Определение общего содержания и степени включения доксорубицина и флуоресцентных красителей

2.3.5.4 Сканирующая электронная микроскопия

2.3.5.5 Определение межфазного натяжения

2.3.6 Изучение кинетики высвобождения лекарственного вещества из наночастиц

2.3.7 Изучение гидролитической деградации PLGA наночастиц

2.3.8 Флуоресцентная спектроскопия

2.3.9 Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

2.3.10 Гель-проникающая хроматография (ГПХ)

2.3.11 Стерилизация наночастиц

2.3.11.1 Радиационная стерилизация наночастиц

2.3.11.2 Стерилизующая фильтрация наночастиц

2.4 Оценка противоопухолевой активности наносомальной формы доксорубицина in vivo

2.4.1 Моделирование мультиформной глиобластомы

2.4.2 Экспериментальные животные

2.4.3 Имплантация глиобластомы

2.4.4 Имплантация глиомы С6

2.4.5 Оценка противоопухолевой активности наносомальной формы доксорубицина по увеличению продолжительности жизни

2.4.6 Оценка противоопухолевой активности наносомальной формы доксорубицина по торможению роста опухоли

2.5 Оценка цитотоксичности и гемосовместимости оптимизированной наносомальной формы доксорубицина

2.5.1 Клеточные культуры

2.5.2 Оценка цитотоксического действия наночастиц (MTS-тест)

2.5.3 Определение гемосовместимости наночастиц

2.5.3.1 Определение протромбинового времени (протромбиновый тест)

2.5.3.2 Определение активации тромбоцитов

2.5.3.3 Оценка гемолитической активности наночастиц

2.6 Изучение транспорта PLGA наночастиц, нагруженных доксорубицином, in vitro и in vivo

2.6.1 Изучение интернализации флуоресцентно меченных наночастиц в клетки

глиобластомы U87MG

2.6.1.1 Оценка накопления наночастиц в клетках с помощью проточной цитометрии

2.6.1.2 Изучение интернализации наночастиц с помощью конфокальной микроскопии

2.6.2 Изучение накопления флуоресцентно меченных наночастиц в опухоли in vivo методом

конфокальной микроскопии

2.7 Статистическая обработка данных

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Разработка метода получения оптимизированной наносомальной формы доксорубицина

3.1.1 Изучение влияния природы стабилизатора на физико-химические характеристики наночастиц

3.1.2 Изучение влияния молекулярной массы и степени гидролиза ПВС на физико-химические характеристики наночастиц

3.1.3 Изучение влияния концентрации ПВС на физико-химические параметры наночастиц

3.1.4 Изучение влияния состава внешней водной фазы двойной эмульсии на физико-химические параметры НЧ

3.1.5 Изучение влияния концентрации криопротектора на размер наночастиц

3.1.6 Изучение влияние состава наночастиц на кинетику высвобождения доксорубицина

3.1.7 Изучение влияния реакции среды на кинетику высвобождения доксорубицина из наночастиц

3.1.8 Изучение гидролитической деградации PLGA наночастиц

3.2 Выявление влияния состава наносомальной формы доксорубицина на противоопухолевую активность in vivo

3.3 Выбор оптимального метода стерилизации наносомальной формы доксорубицина

3.3.1 Оценка возможности стерилизации наночастиц ионизирующим излучением

3.3.2 Стерилизующая фильтрация наночастиц

3.4 Оценка цитотоксичности и гемосовместимости оптимизированной наносомальной формы доксорубицина

3.4.1 Оценка влияния наночастиц на свертывающую систему крови

3.4.2 Оценка гемолитической активности наночастиц

3.4.3 Оценка цитотоксического действия наночастиц

3.5 Изучение транспорта PLGA наночастиц, нагруженных доксорубицином, in vitro и in vivo

3.5.1 Получение флуоресцентно меченных наночастиц

3.5.2 Влияние модификации полимера флуоресцентными красителями на кинетику высвобождения доксорубицина из наночастиц

3.5.3 Изучение спектров флуоресценции модифицированных наночастиц

3.5.4 Изучение интернализации флуоресцентно меченных наночастиц в клетки глиобластомы U87MG

3.5.4.1 Оценка накопления наночастиц в клетках с помощью проточной цитометрии

3.5.4.2 Изучение интернализации и внутриклеточного распределения НЧ с помощью

конфокальной микроскопии

3.5.4.3 Изучение механизмов интернализации флуоресцентно меченных наночастиц в

клетки глиобластомы U87MG

3.6 Изучение накопления флуоресцентно меченных наночастиц в опухоли in vivo

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА