Фосфолипаза А: Роль окисления фосфолипидов in vitro и in vivo в регуляции фосфолиполиза Купцова, Ольга Сергеевна

brief description

Купцова, Ольга Сергеевна.
Фосфолипаза А : Роль окисления фосфолипидов in vitro и in vivo в регуляции фосфолиполиза : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.15, 03.00.23. - Москва, 2001. - 150 с. : ил.
Оглавление диссертациикандидат химических наук Купцова, Ольга Сергеевна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР
ЛИТЕРАТУРЫ.
СТРОЕНИЕ И ФУНКЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕМБРАН.
1Л Клетки: мешки с ферментами или нечто большее?.
1ЛЛ Структура биомембран.
1Л.2 Функции биологических мембран.*.
1 1.3 Биомембраны и сигнальная трансдукция в клетках.
1.3 Искусственные мембраны.
1.3.1 Мономолекулярные слои.
1.3.2 Плоские бислойные мембраны.
1.3 .3 Липосомы.
1.4 Методы изучения упаковки и движения липидных молекул в мембранах.Использование пиреновых зондов в модельных мембранах. 16 II. ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ.„.
2.1 Инициация липидного перекисного окисления супероксидным и пергидроксидным радикалами.
2.2 Инициация окисления липидов перекисью водорода и гидроксильными радикалами.
2.3 Инициация окисления липидов синглетным кислородом и озоном.
2.4 Роль переходных металлов в инициации липидного окисления.
2.5 Изучение окисления фосфолипидов in vivo.
2.6 Окисление фосфолипидов in vitro.
III ФОСФОЛИПАЗА А2: СТРОЕНИЕ И СВОЙСТВА.
3.1 Типьцфосфрлйпаз Аг.
3.2 ФЛА2 в растительных клетках.
3.3 Участие фосфолипазы А2 в передаче сигналов.
3.4 Структура фосфолипазы А2.
3 .5 Активный центр.
3.6 Кальций-связывающий центр.
3.7 Центр узнавания поверхности раздела.
3 .8 Вторичный кальций-связывающий центр.
3.9 Механизм катализа.
3.10 Кинетическая модель липолиза.
3.11 Методы детекции активности фосфолипаз.
3.12 Свойства мембранного бислоя и реакционная способность фосфолипазы Аг.
3.13 Фосфолипаза А2 и окисленные фосфолипиды: история вопроса.
ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ.,.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
I. МАТЕРИАЛЫ.
-U. МЕТОДЫ.
2.1 Приготовление липосом.
2.2 Окисление фосфолипидов.
2.3 Изучение катализируемого фосфолипазой Аг липолиза в липосомах, состоящих из DOPC/DOPCox и SAPC/SAPC0X методом флуоресцентного замещения DAUDA.
2.4 Изучение катализируемого фосфолипазой А2 гидролиза bis-BODIPY Cll PC, включенного в липосомы, состоящие из DOPC/DOPCox и SAPC/SAPCox.
2.5 Изучение катализируемого фосфолипазой А2 гидролиза
SAPC/SAPCox в мицеллах гликохолата натрия.
2.6 Анализ продуктов реакции, катализируемой фосфолипазой А2.
2.7 Изучение структуры липосом.
2.7.1 Микровязкость: соотношение интенсивностей флуоресценции эксимер/мономер для diPy^PC и diPyrioPC в липосомах.
2.7.2 Латеральная подвижность: варьирование концентрации топоРугш-НРС.
2.8 Изучение фосфолипазной активности в клетках BY-2.
2.8.1 Культивирование клеток.
2.8.2 Введение флуоресцентного зонда bis-BODIPY CI 1 PC в клетки BY-2.69 2.8.2.1 Приготовление липосом, содержащих bis-BODIPY Cll PC.
2.8.2.2 Введение bis-BODIPY CI 1 PC в клетки. Определение оптимального времени инкубации клеток с зондом.
2.8.3 Инкубирование клеток с Са2+, мастопараном и ингибиторами.
2.8.4 Окисление мембранных липидов.
2.8 5 Конфокальный лазерный микроскоп.
2.8.6 Флуориметрические измерения.
2.8.7 Анализ флуоресцентных продуктов фосфолипазной активности в клетках BY-2.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.,.
I. ФОСФОЛИПАЗА А2 ИЗ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
СВИНЬИ: ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ФЕРМЕНТА
С НЕОКИСЛЕННЫМИ И ОКИСЛЕННЫМИ ФОСФОЛИПИДАМИ.
1.1 Изучение фосфолиполиза в липосомах, состоящих из DOPC/DOPCox и SAPC/SAPCox, методом флуоресцентного замещения DAUDA.
1.2 Изучение липолиза bis-BODIPY CI 1 PC, включенного в липосомы, состоящие из DOPC/DOPCox и SAPC/S АРСох.
1.3 Изучение фосфолиполиза в липосомах DOPC/SAPC и DMPC/SAPCox.
1.4 Анализ продуктов реакции, катализируемой свиной панкреатической фосфолипазы А2.
II. ФОСФПОЛИПАЗА А2 ИЗ NAJA MOSSAMBICA
MOSSAMBICA: ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ФЕРМЕНТА С НЕОКИСЛЕННЫМИ И
ОКИСЛЕННЫМИ ФОСФОЛИПИДАМИ.
2.1 Изучение фосфолиполиза в липосомах, состоящих из DOPC/DOPCox и SAPC/SAPCox, методом флуоресцентного замещения DAUDA.
2.2 Изучение гидролиза SAPC/SAPC0X фосфолипазой А в мицеллах гликохолата натрия.
2.3 Изучение липолиза bis-BODIPY CI 1 PC, включенного в липосомы, состоящие из DOPC/DOPCox и SAPC/SAPC0X.
III. СТРУКТУРА ЛИПОСОМ, СОСТОЯЩИХ ИЗ ОКИСЛЕННЫХ ФОСФОЛИПИДОВ: МИКРОВЯЗКОСТЬ И ЛАТЕРАЛЬНАЯ ДИФФУЗИЯ.
3.1 Микровязкость: соотношение интенсив но стей флуоресценции эксимер/мономер для diPy^PC и сНРугюРС в липосомах.
3.2 Измерения латеральной подвижности.
IV. ПРИРОДНЫЕ ФОСФОЛИПИДЫ: ДЕЙСТВИЕ ФОСФОЛИПАЗЫ А2 И СТРУКТУРА ЛИПОСОМ.
4.1 Изучение фосфолиполиза в липосомах, состоящих из природных фосфолипидов.
4.2 Микровязкость в липосомах, состоящих из природных фосфолипидов.
V. ФОСФОЛИПАЗА А2 В КЛЕТКАХ ТАБАКА BY-2. ДЕТЕКЦИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТА IN VIVO. ВЛИЯНИЕ ОКИСЛЕНИЯ МЕМБРАННЫХ ФОСФОЛИПИДОВ НА АКТИВНОСТЬ ФОСФОЛИПАЗЫ А2.
5.1 Детекция активности ФЛА2 в клетках BY-2.
5.2 Стимуляция активности ФЛА мастопараном.
5.3 Влияние окисления мембран на активность ФЛА2 в клетках BY-2.
ВЫВОДЫ.
БЛАГОДАРНОСТИ.