Функциональная роль неканонических белковых факторов р50 и РТВ в инициации трансляции у млекопитающих Писарев, Андрей Владимирович

brief description

Писарев, Андрей Владимирович.
Функциональная роль неканонических белковых факторов р50 и РТВ в инициации трансляции у млекопитающих : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.10. - Москва, 2003. - 102 с. : ил.
Оглавление диссертациикандидат химических наук Писарев, Андрей Владимирович
Список сокращений.
Введение.
Обзор литературы
Глава 1. Инициация трансляции у эукариот.
1.1 Механизмы инициации трансляции
1.1.1 Сканирующая модель.
1.1.2 Внутренняя инициация трансляции.
1.2 Канонические факторы инициации трансляции у эукариот.
1.2.1 Факторы, участвующие в образовании 4 8S предынициаторного комплекса eIF2. eIF3. elFl. elFIA. eIF4F. eIF4A. eIF4B. eIF4H.
1.2.2 Факторы, участвующие в образовании 80S комплекса eIF5. eIF5B.
1.3 Неканонические транс-действующие факторы в инициации трансляции. р50.22* гяРНП Е1/Е2 и К.
La аутоантиген.
1.4 Общая модель инициации трансляции у эукариот.
Глава 2. Метод тоупринта в изучении сборки инициаторного комплекса из индивидуальных компонентов.
Результаты и обсуждение
Р50 в инициации трансляции.
1. р50 влияет на связывание 40S рибосомной субчастицы с инициаторным кодоном в сборке 4 8S предынициаторного комплекса из очищенных компонентов in vitro.
2. р50 способен стимулировать образование аберрантного
4 8S комплекса на 5'-конце мРНК.51"
3. Способность р50 стимулировать образование 48S предынициаторного комплекса из очищенных компонентов при низких отношениях р50/мРНК не является универсальным свойством мРНК-связывающих белков.
4. р50 связывается с сахаро-фосфатным остовом мРНК, проявляя предпочтение к последовательностям, содержащим полностью неспаренные нуклеотидные основания.
5. Связывание всего нескольких молекул р50 на молекулу |3-глобиновой мРНК достаточно для стимуляции образования
4 8S предынициаторного комплекса.
6. р50- "менеджер" мРНК-белковых взаимодействий в мРНП млекопитающих.
РТВ- активный участник инициации трансляции на IRES-элементе РНК вируса энцефаломиокардита.
1. РТВ значительно усиливает сборку 48S инициаторного комплекса на РНК ВЭМК из очищенных компонентов in vitro.
2. РТВ проявляет свойства РНК-шаперона.7Q
3. Функция РТВ в IRES-опосредованной инициации трансляции на РНК ряда пикорнавирусов специфична, но не распространяется на все пикорнавирусы.
Материалы и методы
1. Реактивы и материалы.
2 . Плазмидные конструкции.
Ш^Ч 3. Генноинженерные манипуляции.
4. Получение РНК-транскриптов.
5. Трансляция в лизате ретикулоцитов кролика.
6. Реконструкция инициаторных комплексов из очищенных компонентов.
6.1. Выделение рибосомных субчастиц и факторов инициации.
6.2. Аминоацилирование инициаторной тРНК.866.3. Собственно сборка инициаторных комплексов.
6.4. Тоупринт.
7. Центрифугирование комплексов в сахарозном градиенте.
8. Зондирование вторичной структуры мРНК.
Wf^ 9. Иммуноблоттинг-анализ.
10. Ультрафиолетовые сшивки.
11. Количественная обработка результатов.
Выводы.