Функционально-важные остатки аминокислот неорганических пирофосфатаз S. Cereviciae и e. coli Разников, Андрей Валерьевич

brief description

Разников, Андрей Валерьевич.
Функционально-важные остатки аминокислот неорганических пирофосфатаз S. Cereviciae и e. coli : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.10. - Москва, 1992. - 129 с. : ил.
Оглавление диссертациикандидат химических наук Разников, Андрей Валерьевич
введение
ГЛАВА I. ФШЩЮКАЛЬНО-ВАЖНЫЕ АМИНОКИСЛОТНЫЕ ОСТАТКИ НЕОРГАНИЧЕСКИХ ПИРОФОСФАТАЗ (обзор литературы)
1 . РАСТВОРИМЫЕ ПИРОФОСФАТАЗЫ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ИСТОЧНИКОВ
A. Пирофосфатаза S.cerevisiae
1.А.1. Общие свойства фермента—
1 .А.2. Функционально-важные аминокислотные остатки
1.А.2.1. Химическая модификация
I.А. 2.2. Рентгено-структурный анализ
B. Пирофосфатаза е.coli
1.Б.1. Общие свойства фермента
1.Б.2. Функционально-важные, аминокислотные остатки
В. Пирофосфатаза термофильной бактерии PS-3
Г. Пирофосфатаза о?.thermophilic------------:
Д. Пирофосфатаза S. faecal is
Е. Пирофосфатаза Т. thiooxidans------■----------—■
Ж. Пирофосфатаза В.stearothermophilus
3. Пирофосфатаза s. commune
И. Пирофосфатаза U.urealiticum
2. ПРЕДПОЛАГАЕМЫМ ОБЩИМ МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ НЕОРГАНИЧЕСКИХ ПИРОФОСФАТАЗ. ОТЛИЧИЯ ФЕРМЕНТОВ ИЗ РАЗНЫХ ИСТОЧНИКОВ-------- '
ГЛАВА II. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Функционально-важный остаток тирозина в пирофосфатазе
S. cere vis iae
1.1. Химическая модификация и локализация в первичной структуре
1.1.1. Инактивация и модификация пирофосфатазы
1.1.2. Определение природы остатка, модификация которого приводит к инактивации фермента----------:
1.1.3. Локализация в первичной структуре функционально-важного остатка тирозина
1.2. Возможная роль Т;ут89 в механизме действия фермента—
1.2.1. Влияние лигандов активного центра на реакционное состояние Tyr89
1.2.2. Гшсохромный эффект в спектре поглощения пирофосфатазы, модифицированной NBD
1.2.3. Аномальная реакционная способность остатка Тугвэ—
1.2.4. Функциональная роль остатка Туг89
2. Функционально-важный остаток глутаминовой кислоты в пиро-фосфатазе Е.coli
2.1. Химическая модификация и локализация в первичной структуре
2.1.1. Инактивация и модификация фермента
2.1.2. Локализация функционально-важного остатка дикарбоновой аминокислоты в первичной структуре пирофосфатазы
2.2. Возможная роль остатка глутаминовой аминокислоты в механизме действия фермента
2.2.1. Аффинная элюция
2.2.2. Активность модифицированного фермента
2.2.3. Возможная функциональная роль остатка Е98
3. Селективная модификация пирофосфатазы E.coli реагентом Вудворда К вне активного центра
ГЛАВА III. ЭКСПЕРЗШЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
1. Метода исследования
1.1. Определение концентрации бежа
1.2. Определение активности ферментов
1.3.Определение количества радиоактивных веществ
1.4. Протеолиз
1.4.1. Алкилирование SH-групп
1.4.2. Гидролиз трипсином
1.4.3. Гидролиз протеазой Staphilocooous aureus Y8
1.4.4. Гидролиз химотрипсином
1.5. Ступенчатая деградация по методу Эдмана
1.6. Масс-спектрометрический анализ пептидов
2. Исследование реакции РРазы S.oerevisiae с 4-хлор-7-нитробензо-2-окса-1,3-диазолом
2.1. Инактивация фермента
2.2. Получение модифицированного фермента
2.3. Спектры поглощения модифицированного фермента
2.4. Определение природы модифицированной аминокислоты
2.4.1. Реактивация модифицированной РРазы-------:——
2.4.2. Инактивация РРазы с модифицированными SH-группами
2.4.3. Модификация SH-rpyim РРазы, модифицированной ЖВБ—
2.5. Локализация в первичной структуре функционально-важного остатка тирозина
2.5.1. Разделение пептидов
2.5.2. Установление структуры пептидов
2.6. Выяснение возможной функциональной роли остатка тирозина
2.6.1. Влияние ионов металлов
2.6.2. Влияние фосфата
2.6.3. pH-зависимость скорости инактивации
3. Исследование реакции РРазы е.coli с реагентом Вудворда К. 83 3.1. Изучение устойчивости реагента Вудворда К при различных
3.2. Инактивация фермента
3.3. Получение модифицированного фермента—
3.4. Исследование устойчивости винилового эфира, образующегося при модификации РРазы реагентом Вудворда К
3.5. Локализация в первичной структуре функционально-важного остатка дикарбоновой аминокислоты
3.5.1. Разделение пептидов
3.5.2. Установление структуры пептидов--------:---------—
3.6. Выяснение возможной функциональной роли остатка дикарбоновой аминокислоты
3.6.1. Аффинная элюция
3.6.3. pH-зависимость остаточной активности модифицированного фермента
4. Селективная модификация пирофосфатазы Е-coli реагентом Вудворда К вне активного центра
4.1. Модификация РРазы
4.2. Выделение модифицированного пептида
4.3. Установление структуры пептида
ВЫВОДЫ