Изучение каталитической активности гетеродимера и индивидуальных субъединиц пенициллинацилазы из E. coli Шамолина, Татьяна Анатольевна

brief description

Шамолина, Татьяна Анатольевна.
Изучение каталитической активности гетеродимера и индивидуальных субъединиц пенициллинацилазы из E. coli : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.15. - Москва, 1999. - 101 с. : ил.
Оглавление диссертациикандидат химических наук Шамолина, Татьяна Анатольевна
Список сокращений.
ВВЕДЕНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Биосинтез и структура пенициллинацилазы.
1.1.1. Источники пенициллинацилаз.
1.1.2. Субъединичный состав.
1.1.3. Структура гена и экспрессия пенициллинацилазы.
1.1.4. Основные достижения рентгеноструктурного анализа в изучении структуры и механизма действия пенициллинацилазы.
1.2. Каталитические свойства пенициллинацилазы.
1.3. Роль субъединиц в формировании активного центра пенициллинацилазы.
1.3.1. Ренатурация гетеродимера пенициллинацилазы и индивидуальных субъединиц после разделения в денатурирующих условиях.
1.3.2. Получение каталитически активной пенициллинацилазы из отдельно экспрессированных субъединиц.
1.3.3. Изучение поведения пенициллинацилазы в системе обращенных мицелл.
1.3.3.1. Краткая характеристика систем обращенных мицелл поверхностно активных веществ в органических растворителях.
1.3.3.2. Каталитические свойства ферментов, солюбилизированных в системах обращенных мицелл.
1.3.3.3. Пенициллинацилаза в системе обращенных мицелл АОТ в октане.
2. ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ.
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3.1. Материалы.
3.2. Методы.
3.2.1. Измерение скорости ферментативной реакции в буферном растворе.
3.2.2. Измерение скорости ферментативной реакции в системе обращенных мицелл.
3.2.3. Определение концентрации активных центров пенициллинацилазы
3.2.4. Очистка пенициллинацилазы из Е. coli.
3.2.5. Разделение субъединиц пенициллинацилазы в денатурирующих условиях.
3.2.6. Ренатурация гетеродимера и субъединиц пенициллинацилазы.
3.2.7. Модификация пенициллинацилазы N-сукцинимидил-З-малеимидобензоатом.
3.2.8. Ингибирование пенициллинацилазы фенилметилсульфонилфторидом в системе обращенных мицелл.
3.2.9. Определение содержания воды в препарате АОТ.
3.2.10. Седиментационный анализ.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Изучение поведения пенициллинацилазы в системе обращенных мицелл АОТ в октане.
4.1.1. Выбор субстрата для изучения каталитических свойств пенициллинацилазы в системе обращенных мицелл.
4.1.2. Определение pH-оптимума функционирования пенициллинацилазы в системе обращенных мицелл.
4.1.3. Зависимость каталитической активности пенициллинацилазы от концентрации ПАВ.
4.1.4. Зависимость активности пенициллинацилазы от степени гидратации.
4.1.5. Зависимость активности пенициллинацилазы от концентрации фермента при низких степенях гидратации обращенных мицелл.
4.1.6. Стабильность пенициллинацилазы в системе обращенных мицелл.
4.1.7. Седиментационный анализ обращенных мицелл, содержащих пенициллинацилазу при различных степенях гидратации.
4.1.8. Модификация пенициллинацилазы бифункциональным N-сукцинимидил-3-малеимидобензоатом (MBS).
4.1.9. Определение концентрации активных центров пенициллинацилазы: открываются ли новые активные центры при солюбилизации в системе обращенных мицелл?.
4.2. Реактивация гетеродимера и индивидуальных субъединиц пенициллинацилазы после разделения в денатурирующих условиях.