Корчак Оксана Михайлівна. Функціонально-фенотипічна модифікація фібробластів хронічних венозних виразок із використанням методів клітинного культивування

brief description

Корчак Оксана Михайлівна. Функціонально-фенотипічна модифікація фібробластів хронічних венозних виразок із використанням методів клітинного культивування : дис... канд. мед. наук: 14.03.08 / АМН України; Інститут невідкладної і відновної хірургії ім. В.К.Гусака. — Донецьк, 2007. — 167арк. — Бібліогр.: арк. 144-162.

Корчак О.М. Функціонально-фенотипічна модифікація фібробластів хронічних венозних виразок з використанням методів клітинного культивування.- Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата медичних наук за спеціальністю 14.03.08 імунологія та алергологія - Донецький державний медичний університет ім. М. Горького МОЗ України, 2007.
Дисертація присвячена визначенню мембранних рецепторів фібробластів хронічних венозних виразок, здорової шкіри і фетальних фібробластів, відмінностей проліферативної активності та фенотипу цих типів клітин, а також
можливості функціонально-фенотипічної модифікації фібробластів хронічних венозних виразок у мікс-культурі з фетальними фібробластами.
Показано, що на поверхні фібробластів хронічної венозної виразки відсутні деякі молекули активації й адгезії - CD60w, CD58, CD49b, CD49d, CD49f, CD56, HLA-A,B,C, а рівень експресії CD44, CD166, CD54, CD49e, CD141 і CD95 знижений. Виявлені відмінності швидкості проліферації фібробластів здорової шкіри і фібробластів хронічного виразкового дефекту.
Розроблено культуральну модельмикс-культуру фібробластів хронічної виразки і фетальних фібробластів. Показано, що сукупне культивування приводить до збільшення темпів проліферації виразкових фібробластів і відновленню ушкоджених рецепторів, зокрема 2 (СD49b) і 4 (CD49d) ланцюгів інтегринів.
Отримані результати доводять здатність фетальних фібробластів позитивно впливати на функціональні можливості фібробластів хронічної виразки венозної етіології.

У дисертаційній роботі дано теоретичне підґрунтя для вирішення актуальної науково-практичної задачі стосовно доцільності використання культивованих фетальних фібробластів для стимуляції репарації хронічних виразкових дефектів. Показана втрата фібробластами хронічної венозної виразки нижніх кінцівок молекул костимуляції та активації міжклітинних взаємодій (CD58, CDw60, CD141), рецепторів адгезії (СD166, CD56, CD54) і 2, б4 і б6 ланцюгів інтегринів, а також доведена можливість часткового відновлення рецепторного апарату та проліферативної активності фібробластів хронічного виразкового дефекту при сукупному культивуванні з фетальними фібробластами.
1. Установлено, що загальними мембранними антигенами для фібробластів хронічного виразкового дефекту, фібробластів здорової шкіри й фетальних фібробластів в умовах культивування є: CD44, CD147, CD166, CD141, CD140б, CD29, CD49c, CD49e і CD54. Не ідентифікуються CD51, CD104, CD23, CD40, CD36, CLA, CD24, CLІР, HLA-DR, HLA DQ, ІL-1-R, ІL-1-R, CD122, CD126, CDw128, CD106, CD50, CD31, CD62E, CD62P, CD62L, CD41a, CD11a, CD11b, CD11c, CD2, CD22, СD140, CD49a.
2. Визначені фенотипічні відмінності фібробластів хронічного виразкового дефекту і фібробластів здорової шкіри. На виразкових фібробластах не визначаються, або присутні у слідовій кількості CD60w, CD58, 2 ланцюг інтегрину (CD49b), 4 ланцюг інтегрину (CD49d), 6 ланцюг інтегрину (CD49f), CD56 і молекула HLA-A,B,C (р<0,001). Експресія CD44, CD166, CD54, 5 ланцюга інтегрину (CD49e), CD141 і CD95 вірогідно знижена (р<0,01 і р<0,001). Більш високий рівень експресії 3 ланцюга інтегрину (СD49c) на фібробластах хронічного виразкового дефекту (р<0,05) може бути компенсаторною реакцією на втрату інших інтегринових ланцюгів.
3. Виявлено відмінності спектра мембранних маркерів для фетальних фібробластів і фібробластів здорової шкіри. Відсутність 4 ланцюга інтегрину (CD49d), вірогідно знижений рівень СD141 (р<0,01), підвищений рівень СD58 і СD95 (р<0,05) на мембрані фетальних фібробластів можуть бути наслідком малодиференційованого статусу ембріональних тканин.
4. Проліферативна активність при культивуванні максимальна у фетальних фібробластів (утворення моношару на 1,8±0,1 доби), нижче у фібробластів здорової шкіри (7,5±0,4 доби), мінімальна для фібробластів хронічного виразкового дефекту (16,3±0,4 доби, р<0,001).
5. Морфологія фібробластів хронічного виразкового дефекту і їхньої культури має наступні особливості: змінені форма і розміри клітин, визначається вакуолізація цитоплазми, порушена спрямованість росту і полярність клітинної культури.
6. Сукупне культивування фібробластів хронічного виразкового дефекту і фетальних фібробластів приводить до активації проліферації виразкових фібробластів, про що свідчить збільшення темпів росту культури, коли розрахунковий показник кількості клітин на 5 добу культивування становить (116±8)х103клітин для мікс-культури в порівнянні з (28±2)х103клітин для культивованих ізольовано виразкових фібробластів (р<0,01).
7. Показана можливість часткового відновлення за рахунок синтезуde novoвтрачених ланцюгів інтегринових рецепторів (2 і 4) на мембрані фібробластів хронічного виразкового дефекту при сукупному культивуванні з фетальними фібробластами.