Ксиланаза Penicillium Canescens: выделение гена, изучение его регуляции и создание штамма-продуцента Серебряный, Всеволод Александрович

brief description

Серебряный,ВсеволодАлександрович.КсиланазаPenicilliumCanescens:выделениегена,изучениеегорегуляцииисозданиештамма-продуцента: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 2006. - 117 с.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
61:07-3/184 ФГУН «ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНОИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕНЕТИКИ И СЕЛЕКЦИИ НРОМЫШЛЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ» На правах рукописиСеребряныйВсеволодАлександровичКСИЛАНАЗАPENICILLWMCANESCENS:ВЫДЕЛЕНИЕГЕНА,ИЗУЧЕНИЕЕГОРЕГУЛЯЦИИИСОЗДАНИЕШТАММА- НРОДУЦЕНТА. Диссертация на соискаиие учеиой

стр. 7
продукции эндо-1,4-Р-ксиланазыэтим организмом, и оценить возможностьсозданиянаегооснове промышленногоштамма-продуцента.Созданиесовременныхпродуцентовявляется комплексной задачей, и одним из первых этапов этой работы является клонированиегенов, кодирующих целевой фермент.Выделениегенаоткрывает

стр. 8
нродукцию других внеклеточных ферментов выясгшть наличие у Р.canescensF178 другихгенов, кодирующихксиланазы, и оценить их влияние на суммарную продукциюксиланазыизучитьрегуляциютранскрипциигена(генов), кодирующихксиланазуР.canescens¥7S кло1шроватьген, кодирующий позитивный регулятор транскрипциигенамажорнойксиланазыР.canescensF178, и онределитьегороль в нродукции других...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Серебряный, Всеволод Александрович
Введение.
Список сокращений, использованных в работе.
1. Обзор литературы.
1.1 Структура полисахаридов растительных клеточных стенок.
1.1.1. Целлюлоза.
1.1.2. Лигнин.
1.1.3. Гемицеллюлозы.
1.1.3.1. Р-Глюканы.
1.1.3.2. Ксилоглюкан.
1.1.3.3. Ксилан.
1.1.3.4. Галактоманнан, галактоглюкоманнан.
1.1.4. Пектин.
1.2. Ксиланазы мицелиальных грибов.
1.2.1. Молекулярная масса.
1.2.2. Температурный и рН оптимум грибных ксиланаз, классификация
1.2.3. Субстратная специфичность и продукты расщепления.
1.2.4. Побочные активности грибных ксиланаз.
1.2.5. Структура ксиланаз 10 и 11 семейства.
1.2.6. Аминокислотные последовательности грибных ксиланаз и структуры кодирующих их генов.
1.2.7. Посттрансляционная модификация ксиланаз.
1.3. Регуляция транскрипции генов ксиланаз мицелиальных грибов.
1.3.1. Aspergillus.
1.3.2. Регуляторы транскрипции ксиланазных генов Aspergillus XlnR и CreA.
1.3.3. Координированная экспрессия арабиназных генов A. niger.
1.3.4. Trichoderma.
1.3.5. Регуляторы транскрипции ксиланазных генов Т. reesei.
1.3.6. Регуляция промотора xynl Т. reesei.
1.3.7. Регуляция промоторахуп2 Т. reesei.
1.3.8. Penicillium.
1.3.9. Регуляция транскрипции генов ксиланаз в зависимости от рН среды.
1.4. P. canescens F178 (ВКПМ).
2. Материалы и методы.
2.1. Реактивы, плазмидные вектора, ферменты и материалы.
2.2. Бактериальные и грибные штаммы, их культивирование.
2.3. Общие методы.
2.4. Исследование ростовых характеристик грибов.
2.5. Электрофоретическое разделение белков.
2.6. Получение [а-32Р]-меченных фрагментов ДНК.
2.7. Выделение ДНК из грибного мицелия.
2.8. Выделение РНК из грибного мицелия.
2.9. Обратная транскрипция РНК и ОТ-ПЦР.
2.10. Электрофорез РНК и перенос на нейлоновую мембрану.
2.11. Гибридизация.
2.12. Плазмидная трансформация Е. coli.
2.13. Скрининг фаговой библиотеки генов и анализ ДНК рекомбинантных фагов.
2.14. Трансформация гриба Penicillium canescens.
2.15. Компьютерные программы для анализа нуклеотидных последовательностей ДНК.
2.16. ПЦР с использованием грибных спор в качестве матрицы.
2.17. Измерение активностей ферментов.
2.18. Определение нуклеотидной последовательности ДНК.
2.19. Клонирование xylA P. canescens.
2.20. Получение кДНК xylA и определение ее нуклеотидной последовательности.
2.21. Определение числа копий xylA в геноме мультикопийного продуцента.
2.22. Клонирование xlnR P. canescens.
2.23. Делеция xlnR.
2.24. Синтез праймеров для амплификации фрагмента гена у-актина
P. canescens.
3. Результаты и их обсуждение.
3.1. КсиланазаА.
3.1.1. Клонирование гена, кодирующего мажорную эндо-1,4-бета-ксиланазу Penicillium canescens.
3.1.2. Определение структуры xylA.
3.1.4. Сравнение свойств ксиланазы, производимой однокопийным и мультикопийным штаммами.
3.1.5. Индукция синтеза ксиланазы мицелиальным грибом
P. canescens.
3.1.6. Влияние суперпродукции ксиланазы на продукцию других внеклеточных ферментов.
3.2. Ксиланаза В.
3.3. Клонирование гена P. canescens, кодирующего регулятор транскрипции ксиланолитических генов.
3.3.1. Анализ геномной ДНК P. canescens и клонирование гена.
3.3.2. Влияние делеции и амплификации xlnR на продукцию ксиланазы и рост штамма.
3.3.3. FonbxlnR в регуляции продукции других ферментов.
3.3.4. Транскрипция xlnR.
Выводы.