Митохондриальный пептид L116 является посредником между клеточным дыханием и липидным метаболизмом Чугунова Анастасия Андреевна

brief description

Чугунова, Анастасия Андреевна.
Митохондриальный пептид L116 является посредником между клеточным дыханием и липидным метаболизмом : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.10 / Чугунова Анастасия Андреевна; [Место защиты: Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова]. - Москва, 2019. - 118 с. : ил.
Оглавление диссертациикандидат наук Чугунова Анастасия Андреевна
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Методы детекции кОРС-пептидов
Вычислительные методы
Рибосомное профилирование
Масс-спектрометрия
Различные виды кОРС
5'-НТО
Кодирующая область мРНК
3'-НТО
Длинные некодирующие РНК
Циркулярные РНК
Пре-микроРНК
Рибосомная РНК
Методы исследования и характеризации кОРС-пептидов
Проверка кодирующего потенциала кОРС
Поиск биологической функции кОРС-пептида
Заключение
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Реактивы и биопрепараты
Буферы и растворы
Праймеры, использованные для клонирования и секвенирования
Методики, использованные в работе
ПЦР
Приготовление компетентных клеток
Трансформация компетентных клеток
Выделение плазмидной ДНК
Разделение фрагментов ДНК в агарозном геле
Выделение фрагментов ДНК из агарозного геля
Секвенирование
Клонирование гидовых РНК в px458
Клонирование кДНК Cyb5r3 в векторpUC19
Клонирование конструкцийpSBtet_L116, pSBtet_HAL116, pSBtet_L116mCherry
Клонирование конструкцийpSBtet_Cyb5r3, pSBtet_Cyb5r3HA, pSBtet_Cyb5r3eGFP
Клонирование матрицы для гомологичной рекомбинации для замены Gly2 на Ala2 Cyb5r3
Проверка эффективности CRISPR-Cas9 с помощью Т7-эндонуклеазы
Белковый электрофорез по Леммли
Окрашивание белковых гелей нитратом серебра
Трипсинолиз белковых образцов для анализа методом MALDI-MS
Вестерн-блоттинг
Культивирование эукариотических клеток
Получение модифицированных клеточных линий с помощью CRISPR-Cas9 системы
Получение модифицированных клеточных линий с помощью транспозиции
Проверка моноклонов
Иммунопреципитация
Иммуноцитохимия и конфокальная микроскопия
Измерение клеточного дыхания
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Постановка задачи
Доказательство экспрессии и определение локализации L116 в клетках
Создание клеток с инактивированным геном 1500011к16Шк
Изучение фенотипа клеток с инактивированным 1500011к16Шк
Поиск белковых партнеров L116
Изучение фенотипа клеточной линии с нарушением митохондриальной локализации Cyb5r3
Изучение функциональности взаимодействия L116 и Cyb5r3
Изучение влияния инактивации L116 на Cyb5r3
Изучение влияния инактивации Cyb5r3 на L116
Изучение окислительно-восстановительного баланса клетки
Изучение липидного состава нокаутных клеток
Обсуждение результатов
ВЫВОДЫ