Молекулярный механизм действия и цитотоксические свойства РНКазы Streptomyces aureofaciens Митькевич, Владимир Александрович

brief description

Митькевич,ВладимирАлександрович.МолекулярныймеханизмдействияицитотоксическиесвойстваРНКазыStreptomycesaureofaciens: диссертация ... кандидата химических наук : 03.00.03. - Москва, 2005. - 108 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
Российская академия наук Институтмолекулярнойбиологии им. В.А.Энгельгардта На правах рукописиМитькевичВладимирАлександровичМолекулярныймеханизмдействияицитотоксическиесвойстваРНКазыStreptomycesaureofaciens03.00.03-Молекулярнаябиология диссертация на соискание учёной степени кандидата

стр. 2
Принципы классификации нуклеаз 1.2.Механизмкаталитическогодействияциклизующих рибонуклеаз 1.3. Структура исвойстваРНКазыSa и подобных ейРНКаз1.3.1. Структура имеханизмдействияРНКазыSa 1.3.2. КаталитическиесвойстваРНКазыSa и ее гомологов 1.3.3. ТермостабильностьРНКазыSa, ее гомологов

стр. 6
установлениюмолекулярногомеханизмадействияи определениюцитотоксическихсвойствРНКазыSa изStreptomycesaureofaciens. Выбор этого фермента обусловлен тем, чтоРНКазаSa является одним из наименьших ферментов, состоящим из 96 аминокислотных остатков. Ее пространственная структура хорошо изучена как в кристалле,

Оглавление диссертациикандидат химических наук Митькевич, Владимир Александрович
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. РИБОНУКЛЕАЗА SA, РОДСТВЕННЫЕ ФЕРМЕНТЫ И ИХ ИНГИБИТОРЫ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1. Принципы классификации нуклеаз
1.2. Механизм каталитического действия циклизующих рибонуклеаз
1.3. Структура и свойства РНКазы Sa и подобных ей РНКаз
1.3.1. Структура и механизм действия РНКазы Sa
1.3.2. Каталитические свойства РНКазы Sa и ее гомологов
1.3.3. Термостабильность РНКазы Sa, ее гомологов и мутантов
1.4. Влияние остатков активного центра на стабильность белка
1.5. Ингибиторы рибонуклеаз
1.5.1. Низкомолекулярные ингибиторы РНКаз
1.5.2. Белковые ингибиторы РНКаз
1.5.2.1. Барстар
1.5.2.2. Цитоплазматический ингибитор рибонуклеаз животного происхождения
1.6. Цитотоксичность РНКаз
1.6.1. Токсическое действие РНКазы на клетку
1.6.2. Молекулярные детерминанты цитотоксичности РНКаз
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Объекты и материалы
2.1.1. Бактериальные рибонуклеазы
2.1.2. Барстар А и его мутанты
2.1.3. Получение З'-Ы-гидроксиуреидо-З'-дезокситимидин 5'-фосфата
2.1.4. Использованные реагенты
2.2. Методы исследований
2.2.1. Измерение каталитических параметров реакций гидролиза субстратов РНКазами
2.2.2. Определение жизнеспособности клеток в присутствии РНКазы
2.2.3. Дифференциальная Сканирующая Калориметрия (ДСК)
2.2.4. Круговой Дихроизм (КД)
2.2.5. Измерение констант связывания
2.2.6. Определение концентраций
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Структурно-функциональный анализ активного центра РНКазы Sa
3.1.1. Роль остатков GIn3 8 и GIu41 в связывании субстрата
3.1.2. Функциональная роль остатков GIu54, Arg65, His85 и GIu
3.1.3. Влияние изменения общего заряда молекулы РНКазы Sa на ее активность
3.2. Конструирование ингибиторов РНКазы Sa и родственных ферментов
3.2.1. Ингибирование РНКаз металлохелатами
3.2.2. Ингибирование активностей РНКазы Sa и биназы З'-М-гидроксиуреидо-З1-дезокситимидин 5-фосфатом в присутствии цинка(Н)
3.2.3. Ингибирование активности Glu54GIn мутанта РНКазы Sa
З'-Ы-гидроксиуреидо-З'-дезокситимидин 5-фосфатом в присутствии цинка(П)
3.3. Изучение вклада остатков активного центра РНКазы Sa в конформационную стабильность фермента
3.4. Цитотоксические свойства РНКазы Sa, ее близких гомологов и мутантов с измененным зарядом
3.4.1. Изменение общего заряда молекулы с отрицательного на положительный делает РНКазу Sa цитотоксичной
3.4.2. Роль активируемых кальцием калиевых (Кса) каналов в преодолении цитотоксичности, индуцированной РНКазами
3.4.3. Положительный заряд является основной детерминантой цитотоксичности микробных РНКаз
ВЫВОДЫ