Новые методы получения высокоочищенных нуклеаз и нуклеотидов из животного и микробиального сырья Бочков, Денис Владимирович

brief description

Бочков,ДенисВладимирович.Новыеметодыполучениявысокоочищенныхнуклеазинуклеотидовизживотногоимикробиальногосырья: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Уфа, 2005. - 129 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
Новосибирский государствеииыи педагогический уииверситет Новосибирский ииститут оргаиической химии им. Н.Н.Ворожцова СО РАН УДК 577.157.07БОЧКОВДЕННС ВЛАДИМНРОВИЧНовыеметодыполучениявысокоочищенныхпуклеаз и иуклеотидов изживотногои микробиальиогосырьяСпециальиость 03.00.04. - биохимия Диссертапия

стр. 3
крупного рогатого скота 75 3.2.Новыеподходы к синтезу дезоксирибо- и рибонуклеозид-5'^-монофосфатов и их трифосфатов 3.2.1.Получениесубстрата ДНК дляполучениянуклеотидов3.2.2. Выделение S'-нуклеазыиз микробиологической субстанции 77 77 — 77 79 амилоризина 3.2.3.Иммобилизация S'-нуклеазы3.2.3.1. Адсорбционная иммобилизация S'-нуклеазына углерод минеральных неорганических носителях 79 3.2.3.2. Исследование ковалентной...

стр. 8
холестеролэстеразы. Созданиеновогоэкономичногометодапрепаративного синтезануклеотидови их полифосфатов. Основные задачи исследования. 1. Нредложитьновыйподход и разработать технологичныйметодполучениявысокоочищенныхи высокоактивных ферментных препаратов РНКазы, ДНКазы, холестеролэстеразы и

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Бочков, Денис Владимирович
Список сокращений.
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Ферменты, содержащиеся в поджелудочной железе животных и методы их выделения.
1.1.1. Рибонуклеаза (РНКаза).
1.1.1.1. Получение рибонуклеазы (РНКазы).
1.1.2. Дезоксирибонуклеаза (ДНКаза).
1.1.2.1. Получение дезоксирибонуклеазы (ДНКазы). ф 1.1.3. Фермент холестеролэстераза.
1.1.3.1. Получение холестеролэстеразы.
1.1.4. Фермент трипсин.
1.1.4.1. Получение трипсина.
1 ^.Использование ферментов нуклеазного действия для получения рибо- и дезоксирибонуклеозид-5-монофосфатов и биосинтез их полифосфатов
1.2.1 .Перспективные микробные нуклеазы.
1.2.1.1. Перспективный фермент нуклеазного действия - S'-нуклеаза и ф технология его выделения.
1.2.2. Синтез рибо- и дезоксирибонуклеозид-5 - трифосфатов.
1.2.3. Иммобилизация ферментов.
1.2.4. Методы модификации сорбентов.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Разработка методов получения РНКазы, ДНКазы, трипсина и холестеролэстеразы из поджелудочной железы крупного рогатого скота. ф 3.1.1. Получение "грубых" экстрактов ферментов: РНКазы, ДНКазы, трипсина и холестеролэстеразы.
3.1.2. Фракционирование ферментов экстракта поджелудочной железы сульфатом аммония.
3.1.2.1. Выделение и анализ холестеролэстеразы.
3.1.2.2. Выделение и анализ трипсина.
3.1.2.3. Выделение и анализ ДНКазы.
3.1.2.4. Получение РНКазы высокой очистки.
3.1.2.5. Получение субстрата (РНК) для анализа активности фермента рибонуклеазы.
3.1.2.6. Эффективность предлагаемого метода получения ферментов РНКазы, Щ ДНК-азы, трипсина и холестеролэстеразы из поджелудочной железы крупного рогатого скота.
3.2. Новые подходы к синтезу дезоксирибо- и рибонуклеозид-5/-монофосфатов и их трифосфатов.
3.2.1. Получение субстрата ДНК для получения нуклеотидов.
3.2.2. Выделение Б'-нуклеазы из микробиологической субстанции — амилоризина.
3.2.3.Иммобилизация S'-нуклеазы.
3.2.3.1. Адсорбционная иммобилизация S'-нуклеазы на углерод минеральных ф неорганических носителях.
3.2.3.2. Исследование ковалентной иммобилизации S'-нуклеазы на силикатных носителях.
3.2.4. Гидролиз нуклеиновых кислот ферментом Б'-нуклеазой.
3.2.5. Получение и анализ ацетилфосфата лития.
3.2.6. Ферментативное фосфорилирование индивидуальных NMP.
3.2.7. Получение dNTP и NTP сопряжённым фосфорилированием продуктов гидролиза РНК и ДНК.
ГЛАВА 4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
4.1. Получение ферментов РНКазы, ДНКазы, трипсина и хол естеролэстеразы.
4.1.1. Получение субстрата (РНК) для анализа активности фермента рибонуклеазы.
4.1.2. Очистка ферментов РНКазы, ДНКазы, трипсина и хол естеролэстеразы.
4.1.3. Электрофоретический анализ чистоты ДНКазы и РНКазы.
4.1.4. Определение удельной активности ферментов.
4.1.5. Стерилизация, розлив и лиофильная сушка.
4.2. Новые подходы к синтезу дезоксирибо- и рибонуклеозид-б'-монофосфатов и их трифосфатов.
4.2.1. Получение субстрата (ДНК) для ферментов ДНКазы и S1-нуклеазы.
4.2.2. Выделение ферментного препарата 8!-нуклеазы из амилоризина.
4.2.3. Определение активности З^нуклеазы.
4.2.4. Иммобилизация З'-нуклеазы.
4.2.5. Гидролиз ДНК ферментом Б'-нуклеазой.
4.2.6. Гидролиз РНК Б^нуклеазой в растворе.
4.2.7. Гидролиз РНК иммобилизованной З^нуклеазой.
4.2.8. Последовательный гидролиз ДНК ферментами ДНК-азой и иммобилизованной Б^нуклеазой.
4.2.9. Последовательный гидролиз ДНК ферментами ДНКазой и не иммобилизованной З'-нуклеазой.
4.2.10. Получение и анализ ацетилфосфата лития.
4.2.11. Выделение суммарного препарата нуклеотидилкиназ с ацетокиназой.
4.2.12. Ферментативное фосфорилирование индивидуальных NMP.
4.2.13. Ферментативное фосфорилирование NMP и dNMP в смеси.