Нуклеазные активности антител и лактоферрина молока человека Канышкова, Татьяна Геннадьевна

brief description

Канышкова,ТатьянаГеннадьевна.Нуклеазныеактивностиантителилактоферринамолокачеловека: диссертация ... кандидата химических наук : 03.00.04. - Новосибирск, 1999. - 144 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ НОВОСИБИРСКИЙ ИНСТИТУТ БИООРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ на правах рукописиКАНЫШКОВАТАТЬЯНАГЕННАДЬЕВНАНУКЛЕАЗНЫЕАКТИВНОСТИАНТИТЕЛИЛАКТОФЕРРИНАМОЛОКАЧЕЛОВЕКА03.00.04. - Биохимия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата химических наук Н а у ч н ы е

стр. 2
1.5.4. К о м п л е м е н т 1.5.5. Л а к т о ф е р р и н и иммуноглобулины - м а ж о р н ы е з а щ и т н ы е белкимолока1.6.Лактоферрин1.6.1. Биологические функциилактоферрина1.7.Антитела1.7.1. Биологические функцииантителмолока1.8. Каталитическиеантитела1.8.1. П р и р о д н ы е а б з и м ы п

стр. 3
Модификация белков 4-диметиламинопиридиниевым производным 50 50 олигонуклеотидов 2.2.14. М е т о д ы определениянуклеазнойактивностиантителилактоферрина2.2.14.1. ОпределениеактивностиА Т и Л Ф в реакции гидролиза Д Н К фага X и Д Н К плазмид рВК-322, р В К - 3 2 7 и риС-18 2.2.14.2. Определение

Оглавление диссертациикандидат химических наук Канышкова, Татьяна Геннадьевна
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8 ЗАЩИТНЫЕ ФАКТОРЫ МОЛОКА ЧЕЛОВЕКА
1.1. Клетки молока
1.2. Гормоны и факторы роста
1.3. Олигосахариды, липиды и жирные кислоты
1.4. Нуклеиновые кислоты
1.5. Основные защитные факторы молока белковой природы
1.5.1. а-Лактальбумин
1.5.2. Лизоцим
1.5.3. Интерфероны
1.5.4. Комплемент
1.5.5. Лактоферрин и иммуноглобулины - мажорные защитные белки молока
1.6. Лактоферрин 16 1.6.1. Биологические функции лактоферрина
1.7. Антитела 22 1.7.1. Биологические функции антител молока
1.8. Каталитические антитела
1.8.1. Природные абзимы при аутоиммунных патологиях
1.8.2. Природные абзимы с протеазной активностью
1.8.3. Природные абзимы, катализирующие гидролиз нуклеиновых кислот
1.8.4. Исследования структуры активного центра ДНК-гидролизующих антител
1.8.5. Природные абзимы молока человека
1.8.6. Роль природных абзимов в организме
1.8.7. Возможные причины генерации природных абзимов
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ
2.2. МЕТОДЫ
2.2.1. Выделение иммуноглобулинов из человеческого молока
2.2.2. "Кислотный шок" препаратов антител
2.2.3. Получение фрагментов АТ
2.2.3.1. Получение и очистка Р(аЬ)г-фрагмента ^О
2.2.3.2. Получение и очистка РаЬ-фрагмента 1«(}
2.2.3.3. Получение и очистка РаЬ-фрагмента з^А
2.2.3.4. Разделение субъединиц антител на ДНК-целлюлозе
2.2.4. Выделение ЛФ из молока
2.2.5. Получение Ре3+-ЛФ
2.2.6. Ограниченный протеолиз ЛФ трипсином
2.2.7. Ограниченный протеолиз ЛФ бромцианом
2.2.8. Анализ сродства АТ и ЛФ к ДНК с помощью аффинной хроматографии белков 47 на ДНК-целлюлозе
2.2.9. Электрофоретический анализ белков
2.2.10. Электрофоретический анализ белков методом двумерного электрофореза в 48 ПААГ
2.2.11. Получение и очистка 5'-[ Р]-меченых олигонуклеотидов
2.2.12. Получение производных олигонуклеотидов
2.2.12.1. Получение 2',3'-диальдегидного производного олигонуклеотидов
2.2.12.2. Получение 4-диметиламинопиридиниевого производного олигонуклеотидов
2.2.13. Модификация АТ и ЛФ химически активными производными 50 олигонуклеотидов
2.2.13.1. Модификация белков 2',3'-диальдегидным производным олигонуклеотидов
2.2.13.2. Модификация белков 4-диметиламинопиридиниевым производным 50 олигонуклеотидов
2.2.14. Методы определения нуклеазной активности антител и лактоферрина
2.2.14.1. Определение активности АТ и ЛФ в реакции гидролиза ДНК фага X и ДНК 51 плазмид рВ11-322, рВЯ-327 и риС
2.2.14.2. Определение активности АТ и ЛФ в реакции гидролиза олигонуклеотидов
2.2.14.3. Гидролиз сСМР
2.2.14.4. Гидролиз т уНго транскриптов тРНК препаратами антител
2.2.15. Определение кинетических параметров реакции гидролиза
2.2.16. Тестирование ДНК- и РНК-гидролизующей активности белков гп нйи
2.2.17. Спектрофлуориметрическое определение сродства ЛФ к ДНК
2.2.18. Определение сродства ОМ к ЛФ методом ретардации в ПААГ
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Выделение иммуноглобулинов из молока
3.1.1. Гель-фильтрация AT в условиях "кислотного шока"
3.1.2. Взаимодействие антител молока с ДНК-целлюлозой
3.2. Проверка эффективности схемы выделения НК-гидролизующих абзимов
3.3. Взаимодействие абзимов с аффинными сорбентами
3.4. Локализация НК-связывающего/НК-гидролизующего центра антител
3.4.1. Каталитическая активность Fab-фрагментов IgG и slgA
3.4.2. Аффинная модификация антител с помощью реакционноспособных аналогов 77 олигонуклеотидов
3.4.3. Каталитическая функция легкой цепи антител
3.4.4. Анализ ДНК- и РНК-гидролизующей активности антител in situ
3.4.5. Определение типа легких цепей ДНК- и РНК-гидролизующих абзимов молока
3.5. Субстратная специфичность реакции гидролиза ДНК и РНК с помощью абзимов
3.6. ДНК-гидролизующая активность абзимов
3.6.1. Зависимость ДНК-гидролизующей активности AT от рН
3.6.2. Зависимость активности абзимов от ионов двухвалентных металлов
3.7. РНК-гидролизующая активность абзимов
3.8. Кинетические характеристики реакции гидролиза олигонуклеотидов с помощью 95 абзимов
3.9. Нуклеазы молока неиммуноглобулиновой природы
3.10. Выделение лактоферрина 103 3.10.1. Аффинная хроматография ЛФ на Blue Sepharose
3.11. Взаимодействие ЛФ с ДНК-целлюлозой
3.12. "Кислотный шок" ЛФ
3.13. Тестирование активности ЛФ in situ
3.14. ДНК-гидролизующая активность ЛФ
3.15. Локазизация ДНК- и РНК-связывающих центров ЛФ
3.16. Определение сродства ЛФ к олигонуклеотидам
3.17. Взаимодействие ON-связывающих центров ЛФ с некоторыми полианионами
3.18. Кинетические характеристики реакции гидролиза олигонуклеотидов с помощью 122 ЛФ
3.19. Активация ДНК-гидролизующей функции ЛФ под действием низкомолекулярных лигандов