Прокопенко Ігор Вікторович. Чутливість нормальних та малігнізованих лімфоцитів до світлового випромінювання видимої ділянки спектру

brief description

Прокопенко Ігор Вікторович. Чутливість нормальних та малігнізованих лімфоцитів до світлового випромінювання видимої ділянки спектру: дис... канд. біол. наук: 14.01.07 / НАН України; Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є.Кавецького. - К., 2005

Прокопенко І.В. Чутливість нормальних та малігнізованих лімфоцитів до світлового випромінювання видимої ділянки спектра. Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 14.01.07 онкологія. Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України, Київ, 2005.
Дисертацію присвячено вивченню дії оптичного випромінювання видимої області спектра на нормальні та злоякісні лімфоцити людини.
В роботі показано, що лімфоцити, ізольовані із периферичної крові здорових донорів, проявляють високу специфічну (спектрально-залежну) чутливість до видимого, зокрема червоного, світла, як когерентного, так і некогерентного. Встановлено, що ця чутливість зумовлена індивідуальною сполукою, яка знаходиться на поверхневій мембрані клітин. Розроблені методи виділення фоточутливої сполуки, та здійснена її очистка до гомогенного стану. Сукупність проведених фізико-хімічних, біохімічних та імунологічних досліджень дозволила встановити, що виділена фоточутлива сполука є хромопротеїдом, апопротеїнова частина якого має альбуміноподібну природу. Дані диференційно-абсорбційної та флуоресцентної спектроскопії вказують на тетрапірольну структуру хромофорної компоненти дослідженого білка.
Показано, що злоякісні лімфоцити, отримані з лімфоконцентрату периферичної крові хворих на хронічний В-клітинний лімфолейкоз, і малігнізовані клітини ліній Raji та Namalwa також здатні реагувати на світлове випромінення, проте реакція лімфоцитів від лейкозних хворих має протилежний напрям у порівнянні з лімфоцитами здорових донорів. Фоточутливий білок, виділений із злоякісних лімфоцитів, за комплексом фізико-хімічних, біохімічних та імунохімічних характеристик є близьким до білка нормальних лімфоцитів, хоча отримані результати свідчать про певні відмінності в їх апопротеїновій частині.

Було досліджено природу явища фоточутливості лімфоїдних клітин, виділено і очищено білковий препарат, який опосередковує світлову чутливість, та отримано дані відносно структури апопротеїнової та хромофорної частин ізольованого хромопротеїду.

Показано, що лімфоцити периферичної крові здорових донорів виявляють спектрально- залежну чутливість до видимого світла як когерентного, так і некогерентного, яка може бути тестована за зміною експресії антигенів CD2 та CD19.
Розроблені методичні підходи до виділення із лімфоцитів донорської крові та очищення до електрофоретичної гомогенності фоточутливого молекулярного агента, що опосередковує цю фоточутливість.
Встановлена білкова природа отриманого препарата, з’ясована його молекулярна маса (67 кДа), визначені його альбуміноподібні властивості.
Методом ізоелектричного фокусування показано, що виділений білок існує у двох ізоформах з рІ 4,7 та рІ 4,9.
Проведені спектроскопічні дослідження свідчать про тетрапірольну структуру хромофорної частини фоточутливого білкового комплексу.
Показана наявність досліджуваного фоточутливого білка в лімфоцитах із крові хворих на хронічний В- клітинний лімфолейкоз.
Світлове опромінення злоякісних лімфоцитів, отриманих із крові хворих на В- клітинний лейкоз, приводить до пригнічення їх активності за умов, в яких відбувається активізація лімфоцитів здорових донорів.
Малігнізовані клітини лінії Namalwa реагують на світлове опромінення подібно лімфоцитам, виділеним із крові хворих на лейкоз, тоді як клітини лінії Raji відповідають подібно нормальним лімфоцитам.
На підставі одержаних спектроскопічних даних зроблено припущення про відмінності в структурі апопротеїнового компоненту дослідженого хромопротеїду злоякісних лімфоцитів у порівнянні з нормальними.