Стабилизация бактериальной формиатдегидрогеназы гидрофобизацией белковой глобулы методом направленного мутагенеза Рожкова, Александра Михайловна

brief description

Рожкова, Александра Михайловна.
Стабилизация бактериальной формиатдегидрогеназы гидрофобизацией белковой глобулы методом направленного мутагенеза : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.15. - Москва, 1999. - 126 с.
Оглавление диссертациикандидат химических наук Рожкова, Александра Михайловна
I. ВВЕДЕНИЕ.
II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
ГЛАВА 1. ОСНОВНЫЕ СВОЙСТВА, СТРУКТУРА И МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ЫАЕ)+-ЗАВИСИМОЙ ФОРМИАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ.
1.1 Физико-химические свойства КАЕ)+-зависимых формиатдегидрогеназ из различных источников.
1.2 Сравнение аминокислотных последовательностей КА1)+-зависимых формиатдегидрогеназ.
1.3 Третичная структура КАГ)+-зависимой формиатдегидрогеназы из Pseudomonas sp. 101.
1.4 Практическое применение КАЕ)+-зависимой формиатдегидрогеназы.
1.5 Механизмы инактивации ФДГ при различных температурах.
ГЛАВА 2. СТАБИЛИЗАЦИЯ БЕЛКОВ МЕТОДАМИ БЕЛКОВОЙ ИНЖЕНЕРИИ.
2.1 Различные подходы к увеличению стабильности белков.
2.2 Анализ подходов к повышению стабильности белков с использованием методов белковой инженерии.
2.3 Повышение гидрофобности белковой глобулы.
2.4 Создание стабильных белков введением нескольких мутаций.
III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3.1 Материалы.
3.2 Методы исследования.
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
ГЛАВА 4. ГИДРОФОБИЗАЦИЯ а-СПИРАЛЕЙ.
4.1 Направленный мутагенез остатков Serl31, Serl60, Serl68, Serl84 и Ser228.
4.2 Двойные замены Serl31/160Ala и Serl84/228Ala.
4.3 Точечные замены Tyr62Phe и Tyrl65Phe.
4.4 Точечные замены Serl47Ala, Ser 147Val, Serl47Thr.
ГЛАВА 5. ВЫТЕСНЕНИЕ МОЛЕКУЛ ВОДЫ ИЗ ОБЛАСТЕЙ ГИДРОФОБНЫХ КОНТАКТОВ.
5.1 Точечная замена Ala294Val.
5.2 Замена Alai72Val.
5.3 Двойная замена Alai72/294Val.
ГЛАВА 6. ПОЛУЧЕНИЕ И СВОЙСТВА МНОГОТОЧЕЧНЫХ МУТАНТОВ.
6.1 Кинетические свойства мутантов ФДГ: Т4, Т5, Т6 и Ala294Val.
6.2 Исследование термоинактивации нативной ФДГ и мутантов Т4, Т5, Т6, Ala294Val в диапазоне температур Т = 60-70°С.
6.3 Количественный анализ степени аддитивности мутантов.
6.4 Температурная зависимость активности нативной ФДГ и ее мутантов Т4, Т5, Т6 и Ala294Val в диапазоне температур Т=25-45°С.
6.5 Применение стабилизирующих мутаций для очистки формиатдегидрогеназы.
V. ВЫВОДЫ.