Влияние CpG динуклеотидов на кинетику экспрессии трансгенов плазмидными векторами Брутер Александра Владимировна

brief description

Брутер,АлександраВладимировна.ВлияниеCpGдинуклеотидовнакинетикуэкспрессиитрансгеновплазмиднымивекторами: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.03 /БрутерАлександраВладимировна; [Место защиты: Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта Российской академии наук]. - Москва, 2019. - 115 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
рукописиБрутерАлександраВладимировнаВлияниеCpG-динуклеотидовнакинетикуэкспрессиитрансгенаплазмиднымивекторами03.01.03. Молекулярная биология Диссертация

стр. 2
экспресии конструкций, кодирующих люциферазу, в МСК ................54 3 3.2.5ВлияниеединичныхCpG-динуклеотидовнакинетикуэкспрессии......................59 3.2.6ВлияниеRG108 накинетикуэкспрессиитрансгенов.............................................60 3.2.7ВлияниеДМСО накинетикуэкспрессиитрансгенов.............................................62 3.2.8Влияниесодержания...

стр. 54
протяжении трех недель. Нашей задачей было: а) сравнить способность к поддержаниюэкспрессиитрансгенавекторасо сниженным содержаниемCpG-динуклеотидови обычноговектора, б) оценитьвлияниенакинетикуэкспрессиитрансгенаCpG-динуклеотидов, локализованных ввектореи втрансгене. Для этого четыре

Оглавление диссертациикандидат наук Брутер Александра Владимировна
Оглавление
Список использованных сокращений
Введение
Актуальность темы
Цели и задачи исследования
Научная новизна, теоретическое и практическое значение работы
Методология и методы исследования
Положения, выносимые на защиту
Вклад автора
Апробация работы
Структура работы
Благодарности
1. Обзор литературы
1.1 Разработка плазмидных векторов
1.1.1 Плазмидные векторы in vitro
1.1.2 Плазмидные векторы in vivo
1.2. Элементы, влияющие на эффективность плазмидных векторов
1.2.1 CG-островки и CpG-динуклеотиды
1.2.1.1 Основные механизмы метилирования CpG
1.2.1.2 Основные механизмы деметилирования CpG
1.2.1.3 Общие сведения о CG-островках
1.2.1.4 Механизмы гипометилирования CG-островков
1.2.1.5 Дифференциальное метилирование CG островков
1.2.1.6 Метилирование CG-островков и транскрипция
1.2.2 S/MAR элементы
1.3. Заключение
2. Материалы и методы
2.1. Получение, наработка и выделение плазмид
2.2. Культивирование клеток
2.3. Электропорация мезенхимальных стволовых клеток
2.4. Определение концентрации плазмиды в клетках после электропорации с помощью ПЦР в реальном времени
2.5. Измерение люциферазной активности светлячковой (Firefly) люциферазы и секретируемой (Lucia) люциферазы
2.6. Анализ экспрессии ß-галактозидазы и eGFP
2.7. Лабораторные животные
2.8. Введение плазмид в задние конечности и в печень мышей
2.9. Забор крови и измерение mSEAP
2.10. Статистический анализ
3. Результаты
3.1. Создание генетических конструкций
3.2 Тестирование конструкций in vitro
3.2.1 Выбор между вектором pMBR1 и pMBR2
3.2.2 Влияние содержания CpG-динуклеотидов в векторе и трансгене на начальный уровень экспрессии трансгена
3.2.3 Измерение количества плазмиды в клетках после электропорации
3.2.4 Кинетика экспресии конструкций, кодирующих люциферазу, в МСК
3.2.5 Влияние единичных CpG-динуклеотидов на кинетику экспрессии
3.2.6 Влияние RG108 на кинетику экспрессии трансгенов
3.2.7 Влияние ДМСО на кинетику экспрессии трансгенов
3.2.8 Влияние содержания CpG-динуклеотидов в векторе на экспрессию Р-галактозидазы и EGFP
3.3. Тестирование конструкций in vivo
3.3.1 Введение конструкций в скелетные мышцы
3.3.2 Введение конструкций в печень
4. Обсуждение результатов
4.1 Обсуждение результатов, полученных в системе in vitro
4.2 Обсуждение результатов, полученных в системе in vivo
5. Заключение
6. Выводы