РОЗПОВСЮДЖЕННЯ СЕРЕД ВЕЛИКОЇ РОГАТОЇ ХУДОБИ І СВИНЕЙ ШИГОТОКСИНПРОДУКУЮЧИХ ЕШЕРИХІЙ ТА ВИВЧЕННЯ ЇХ БІОЛОГІЧНИХ ВЛАСТИВОСТЕЙ

Краткое содержание

Робота виконувалась протягом 1999-2001 років у лабораторії ветеринарно-санітарної експертизи Інституту ветеринарної медицини УААН, лабораторії генетики Інституту свинарства  (м. Полтава), лабораторії бактеріології Інституту ветеринарії (м.Пулави, Польща), відділі проблем інтерферону Інституту мікробіології й вірусології ім. Заболотного  НАН України, тваринницьких господарствах різної форми власності Київської, Вінницької, Чернігівської, Кіровоградської та Миколаївської областей.

Для проведення наукових досліджень були використані референтні та епізоотичні штами E.coli.

При вивченні поширення шиготоксинпродукуючих ешерихій, в кожному обстежуваному господарстві формували групи з 8-15-ти довільно відібраних тварин. Від кожної тварини відбирали фекалії, які досліджували в ПЛР з праймерами для визначення stx-генів і в культурі клітин. Спочатку з фекалій тварин одного господарства готували і досліджували збірну пробу. При отриманні позитивного результату, кожний зразок досліджували окремо. Кожну позитивну в ПЛР-аналізі пробу висівали на сердовище Ендо для виділення окремих колоній E.coli. Кожну колонію після визначення видової належності досліджували методом аналізу цитотоксичності в культурі  клітин Vero. Шиготоксинпродукуючі колонії відбирали і вивчали тип шиготоксинпродукування, ентерогемолітичні властивості,  синтез інтиміну, цукролітичні властивості, серогрупову належність, експресію фімбріальних адгезинів, синтез термолабільного і термостабільного ентеротоксинів, стійкість до антибактеріальних препаратів.

Серогрупову належність виділених культур E.coli встановлювали в реакції аглютинації з типоспецифічними аглютинуючими О-сироватками для ідентифікації ентеропатогенних типів кишкової палички Армавірської біофабрики. Наявність фімбріальних адгезинів К99, F41, Att25, 987P, K88ac, K88ab, K88ad визначали в РА з набором сироваток ешерихіозних антиадгезивних аглютинуючих (ІЕКВМ).

        Визначення шиготоксинпродукування виділеними штамами ешерихій  в культурі клітин Vero здійснювали за  методом Konovalchuk L (1976). Культуру клітин Vero отримували в Біо-тест-лабораторії у вигляді суспензії на ростовому поживному середовищі.

Для визначення наявності stx- та еае-генів застосовували полімеразну ланцюгову реакцію. Використовували праймери MK1/MK2 (stx), LP30/ LP31 (Stx-1) і LP43/ LP 44 (Stx-2), SK1/SK2 (еае), синтезовані “DNA-Gdansk”, Польща.

Оцінку експресії EHEC-гемолізину проводили за методом А. Lehmacher et al. (1994). 

Здатність продукувати термолабільний ентеротоксин виділеними штамами E.coli визначали в Бікен-тесті. Визначення термостабільного ентеротоксину проводили на мишенятах-сисунах за методом Романенкової із співавторами (1986).

Методом дифузії в агар було вивчено чутливість виділених штамів STEC до слідуючих антибіотиків і хіміотерапевтичних препаратів: пеніцилін, стрептоміцин, тетрациклін, левоміцетин, еритроміцин, мономіцин, канаміцин, поліміксин, флумексин,  гентаміцин, цефазолін, енрофлоксацин 5%, тромексин.