УСАНОВА ЕЛЕНА АЛЕКСЕЕВНА Прогностическое значение изменения секреции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами крови при остром деструктивном панкреатите.

Краткое содержание

Материалы и методы исследования Характеристика групп пациентов. В исследование были включены 58 до¬норов (28,6±1,3 лет) и 28 пациентов с ОДП (50,7±3,3 лет). Забор крови осуществ¬лялся на основании информированного согласия у доноров однократно, а у боль¬ных на 1-е, 3- е, 7- е, 14- е сутки стационарного лечения. Пациентам проводилась консервативная терапия ОДП, согласующаяся с приказом №320 от 13.04.2011 Де¬партамента Здравоохранения г. Москвы. Клиническое обследование пациентов с ОДП велось на кафедре экспериментальной и клинической хирургии МБФ ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова МЗ РФ в ГКБ №55 г. Москвы (зав. кафедрой
7

проф. Шуркалин Б.К.). В зависимости от клинико-морфологической формы ОДП все обследованные пациенты были разделены на две группы: 1 группа - пациенты с асептическим течением ОДП (n=15) и 2 группа - пациенты с инфицированным те-чением ОДП (n=13).
Выделение полиморфно-ядерных лейкоцитов крови осуществляли по ме-тоду Воуm А. (Бейум А., 1980) из гепаринизированной крови (50 Ед/мл). Подсчет ПМЛ производился по общепринятой методике в камере Горяева под световым микроскопом. Для определения жизнеспособности клеток использовали метод суправитальной окраски мазков трипановым синим.
Определение суммарной секреции АФК ПМЛ производили с помощью метода стимулированной сульфатом бария люминол-зависимой хемилюминесцен-ции (Л-ХЛ) ПМЛ крови и суспензии выделенных ПМЛ. Измерение Л-ХЛ прово¬дили на биохемилюминесцентном анализаторе БЛМ 3606М - 01, сигнал от которо¬го поступал на персональный компьютер и анализировался с помощью программы BLM- Obrab (СКТБ «Наука» КНЦ СО РАН, Россия). Для этого к образцам крови или суспензии выделенных ПМЛ, содержащим 1×106 клеток в пробе (конечный объем пробы составлял 0,7 мл и доводился раствором Хенкса (рН=7,45), добавля¬ли активатор свечения – люминол (его используют для регистрации интенсивности ХЛ, отражающую суммарную выработку практически всех АФК (Владимиров Ю.А. и соавт., 1987) в количестве 0,15 мл (рабочая концентрация раствора 2×10-3 М, Sigma, США). Регистрировали спонтанный уровень Л-ХЛ, затем добавляли стимулятор свечения – сульфат бария, в количестве 0,15 мл (рабочая концентрация раствора 2 мг/мл) и измеряли уровень стимулированной Л-ХЛ. Регистрация ХЛ проводилась в режиме постоянного перемешивания и температуре 37ºС. С помо¬щью компьютерной программы BLM- Obrab определяли следующие параметры ХЛ: интенсивность спонтанной ХЛ - Iспонт; интенсивность максимальной ХЛ -Iмах; время достижения максимальной вспышки ХЛ - Тмах; интенсивность стиму¬лированной ХЛ: Iстим = Iмах – Iспонт; площадь под кривой Л-ХЛ - Sхл, отра¬жающей светосумму ХЛ и прямо пропорциональной общей фагоцитарной актив¬ности ПМЛ крови (рисунок 1).