РОЗРОБКА ПРОТИПУХЛИННИХ АУТОВАКЦИН НА ОСНОВІ БІЛОКВМІСНИХ МЕТАБОЛІТІВ B.subtilis В-7025 ТА ЇХ ВПЛИВ НА ОКРЕМІ РЕАКЦІЇ ПРОТИПУХЛИННОГО ІМУНІТЕТУ (експериментальні дослідження)

Краткое описание

НАЦІОНАЛЬНА АКАДЕМІЯ НАУК УКРАЇНИ
ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ ПАТОЛОГІЇ, ОНКОЛОГІЇ І РАДІОБІОЛОГІЇ ІМ. Р.Є.КАВЕЦЬКОГО
На правах рукопису
ДІДЕНКО ГЕННАДІЙ ВАСИЛЬОВИЧ

УДК: 616-006-085:615.371:612.017.1:57.084

РОЗРОБКА ПРОТИПУХЛИННИХ АУТОВАКЦИН НА ОСНОВІ БІЛОКВМІСНИХ МЕТАБОЛІТІВ B.subtilis В-7025 ТА ЇХ ВПЛИВ НА ОКРЕМІ РЕАКЦІЇ ПРОТИПУХЛИННОГО ІМУНІТЕТУ
(експериментальні дослідження)

14.01.07 онкологія
Дисертація на здобуття наукового ступеня
кандидата біологічних наук
Науковий керівник
доктор медичних наук,
Потебня Григорій Платонович

Київ 2008

ЗМІСТ

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ.........5

ВСТУП..........7

РОЗДІЛ 1. ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ........12

1.1. СУЧАСНІ УЯВЛЕННЯ ПРО ПРОТИПУХЛИННИЙ ІМУНІТЕТ.....12

1.1.1. Основні імунологічні механізми протипухлинного захисту організму.12

1.1.2. Механізми «вислизання» пухлини з-під нагляду імунної системи....18

1.2. ПРОТИПУХЛИННІ ВАКЦИНИ, ЯК ЗАСОБИ ІМУНОТЕРАПІЇ.23

1.2.1. Принципи створення протипухлинних вакцин та вибір компонентів для їх конструювання ...23

1.2.2. Можливі шляхи модифікації пухлинних компонентів з метою підвищення їх імуногенності .......25

1.2.3. Використання ад'ювантів при створенні протипухлинних вакцин..27

1.3. ВИКОРИСТАННЯ МІКРООРГАНІЗМІВ ТА ПРОДУКТІВ ЇХ СИНТЕЗУ В ІМУНОТЕРАПІЇ ПРИ ПУХЛИННОМУ РОСТІ.....35
1.3.1. Ймовірні механізми імунної відповіді на продукти мікробного синтезу.....35
1.3.2. Протипухлинні вакцини на основі продуктів метаболізму В.subtilis В-7025...........39
РОЗДІЛ 2. МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ....45
2.1. Експериментальні тварини..45
2.2. Експериментальні модельні системи пухлинного росту...46
2.3. Штами мікроорганізмів......47
2.4. Виділення та очистка цитотоксичних білоквмісних метаболітів фільтрату культуральної рідини B.subtilis В-7025....48
2.5 Технологія приготування протипухлинних вакцин.51
2.6. Схема експериментів......52
2.7. Імунологічні дослідження..53

2.8. Статистична обробка результатів...60

РОЗДІЛ 3. ВИДІЛЕННЯ, ОЧИЩЕННЯ ТА ХАРАКТЕРИСТИКА ОКРЕМИХ ЦИТОТОКСИЧНИХ КОМПОНЕНІТВ B.subtilis В-7025 І ОБГРУНТУВАННЯ ЇХ ВИКОРИСТАННЯ ПРИ ВИГОТОВЛЕННІ ПРОТИПУХЛИННИХ ВАКЦИН....61

3.1. Підбір оптимального методу для фракціонування фільтрату культуральної рідини B.subtilis В-7025 та відбору компонентів, які проявляють цитотоксичну активність..61

3.2. Морфологічні і біохімічні особливості дії цитотоксичних фільтрату культуральної рідини B.subtilis В-7025 фракцій на пухлинні клітини ....70

3.3. Визначення придатності цитотоксичних компонентів фільтрату культуральної рідини B.subtilis В-7025 для виготовлення протипухлинних вакцин в експерименті in vivo..76

3.4. Дослідження протипухлинної дії окремих складових ПВ, виготовленої з використанням компоненту (70 кДа)...80

РОЗДІЛ 4. ІМУНОБІОЛОГІЧНІ ВЛАСТИВОСТІ ЦИТОТОКСИЧНИХ КОМПОНЕНТІВ ФІЛЬТРАТУ КУЛЬТУРАЛЬНОЇ РІДИНИ B.subtilis B-7025 ТА ПРОТИПУХЛИННИХ ВАКЦИН, ВИГОТОВЛЕНИХ З ЇХ ВИКОРИСТАННЯМ..90

4.1. Вплив виділених цитотоксичних компонентів фільтрату культуральної рідини B.subtilis В-7025 та виготовлених з їх використанням протипухлинних вакцин на окремі імунологічні показники інтактнх тварин..........90

4.2. Протипухлинна активність компонентів (18,5 кДа) і (70 кДа) та їх вплив на окремі імунологічні реакції у тварин з пухлиною.96

РОЗДІЛ 5. ПОРІВНЯЛЬНА ОЦІНКА ПРОТИПУХЛИННОЇ ДІЇ ВАКЦИН, ВИГОТОВЛЕНИХ З ВИКОРИСТАННЯМ ЦИТОТОКСИЧНИХ КОМПОНЕНТІВ ФІЛЬТРАТУ КУЛЬТУРАЛЬНОЇ РІДИНИ B.subtilis B-7025 ТА ДОСЛІДЖЕННЯ МОЖЛИВИХ ІМУНОЛОГІЧНИХ МЕХАНІЗМІВ ЇХ ЕФЕКТИВНОСТІ....106

5.1 Дослідження ефектів вакцинотерапії на мишах С3Н з перещепленою солідною формою раку Ерліха...106

5.2 Дослідження ефектів вакцинотерапії на мишах лінії DBA з перещепленим лімфолейкозом L 1210.113

5.3. Дослідження ефектів вакцинотерапії на мишах лінії C57Bl/6 з перещепленою карциномою легені Льюїс117

5.4 Дослідження ефектів вакцинотерапії на мишах лінії Вalb/c з перещепленою саркомою 37.................................126

5.5. Порівняльна характеристика впливу вакцинації на показники імунної системи.136

АНАЛІЗ і УЗАГАЛЬНЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ДОСЛІДЖЕННЯ....144

ВИСНОВКИ.....156

СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ...158

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ
Аг антиген
Ат- антитіло
АЗЦ Лц антитілозалежна цитотоксичність лімфоцитів
АЗЦ Мф антитілозалежна цитотоксичність макрофагів
АЗЦ «Мф+Лц» - антитілозалежна кооперативна цитотоксичність макрофагів та лімфоцитів
АЗЦ антитілозалежна цитотоксична активність
АПК антигенпрезентуючі клітини
ГРП гальмування росту пухлини
ДК дендритні клітини
ЕТС ембріональна теляча сироватка
ЗТЖ збільшення тривалості життя
ІЛ інтерлейкін
ІМ індекс модуляції
ІП індекс потенціювання
ІФА імуноферментний аналіз
ІФН інтерферон
КЛЛ карцинома легені Льюїс
Лц - лімфоцит
Мф макрофаги
ММ молекулярна маса
НСТ-тест тест відновлення нітросинього тетразолію
ОО оптичні одиниці
ПААГ поліакриламідний гель
ПВ протипухлинна вакцина
ПК пухлинні клітини
ПКК природні кілерні клітини
п/ш підшкірно
СТЖ середня тривалість життя
СК сироватка крові
Тх Т-лімфоцити-хелпери
ФБР фосфатний буферний розчин
ФНП фактор некрозу пухлин
ФКР фільтрат культуральної рідини
ЦІ цитотоксичний індекс
ЦІК циркулюючі імунні комплекси
ЦТЛ цитолітична активність лімфоцитів
ЦТА- цитотоксична активність
ЦТА «Мф+Лц» - кооперативна цитотоксична активність макрофагів та лімфоцитів
S37 саркома 37

ВСТУП.
Актуальність проблеми. На сьогодні питання профілактики та лікування хворих на злоякісні новоутворення залишаються актуальними, що обумовлено як високою захворюваністю, так і недостатньою ефективністю терапії. В останні роки зростає інтерес дослідників до методів біотерапії, зокрема імунотерапії хворих онкологічного профілю [1-8]. Остання має декілька напрямків, серед яких чільне місце посідають використання цитокінів, моноклональних антитіл та специфічних протипухлинних вакцин. Одним із перспективних підходів є застосування протипухлинних вакцин, виготовлених на основі пухлиноасоційованих антигенів (ПАА), дія яких ґрунтується на формуванні специфічних реакцій протипухлинного імунітету [9-15]. Слід зауважити, що більшість ПАА мають низьку імуногенність, що зумовлює необхідність пошуку різноманітних шляхів підвищення ефективності протипухлинних вакцин. Одним із них є посилення імунної відповіді на ПАА за рахунок їх модифікації продуктами мікробного синтезу [16-20]. Ефективними в даному напрямку виявились, зокрема, продукти метаболізму мікроорганізмуB. subtilis В-7025 [21], який є продуктом селекції штамуB. mesentericus АБ-56 [22]. Використання вакцин, виготовлених з аутологічних пухлинних клітин та фільтрату культуральної рідини (ФКР) B. subtilis В-7025 дозволило збільшити виживаність хворих на рак шлунка, легені, молочної залози, ободової та прямої кишки [23-26]. Водночас питання впливу окремих складових ФКР B. subtilis В-7025 на імуногенність ПАА, а також на динаміку неспецифічних і специфічних протипухлинних реакцій організму залишалось відкритим. Тому актуальним і перспективним напрямком подальшого дослідження стало виділення і характеристика компонентів мікробного синтезуB. subtilis В-7025, які проявляють цитотоксичну дію на пухлинні клітини і мають імунотропну активність, з метою вдосконалення і стандартизації технології конструювання протипухлинних вакцин.

Зв’язок роботи з науковими програмами, планами і темами. Робота виконана у відділі імуномодуляції Інституту експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України у відповідності з напрямком науково-дослідних робіт Інституту за темами: «Дослідити механізми лікувально-профілактичної дії протипухлинної вакцини та модифікаторів активності ферментів для підвищення протипухлинної резистентності організму» (19982000 рр., державний реєстраційний номер 0198U001091), «Розробити нові підходи для підвищення ефективності протипухлинних вакцин» (20012003 рр., державний реєстраційний номер 0101U00784), «Фундаментальне обґрунтування нових підходів по удосконаленню протипухлинних аутовакцин, виготовлених за допомогою компонентівB. subtilis B-7025» (20042006 рр., державний реєстраційний номер 0104U000590).
Мета дослідження. Виділити з фільтрату культуральної рідини Bacillus subtilis В-7025 окремі компоненти мікробного синтезу, які проявляють цитотоксичну дію на пухлинні клітини та мають імунотропні властивості, сконструювати за їх допомогою вакцини та дослідити їх протипухлинну ефективність.
Задачі дослідження.
1. Підібрати оптимальний метод поділу ФКР В. subtilis B-7025 на окремі фракції та оцінити цитотоксичну дію одержаних компонентів на пухлинні клітини.
2. Відібрати компоненти ФКР з високою цитотоксичною активністю та дослідити їх імунотропні та протипухлинні властивості.
3. Cконструювати, використовуючи виділені білоквмісні складові ФКР В.subtilis B-7025, протипухлинні вакцини, дослідити їх ефективність та вплив на окремі реакції протипухлинного імунітету на різних моделях пухлинного росту.
4. Провести порівняльну оцінку імунологічних ефектів, викликаних вакцинами, виготовленими із застосуванням білоквмісних метаболітівВ. subtilis В-7025, на різних експериментальних моделях пухлинного росту.
Об`єкт дослідження: окремі компоненти ФКР 10-добового росту мікроорганізмуВ. subtilis B-7025 та протипухлинні вакцини, виготовлені з їх використанням.
Предмет дослідженн: імунотропні властивості цитотоксичних компонентів ФКР В. subtilis B-7025, протипухлинна активність та механізми дії вакцин, сконструйованих на їх основі.
Методи дослідження. Біохімічні виділення, очистка та електрофоретична характеристика компонентів ФКР В. subtilis B-7025; цитологічні дослідження структурних змін в пухлинних клітинах, викликаних дією цитотоксичних компонентів; імунологічні визначення функціональної активності основних клітинних ефекторів специфічного та неспецифічного протипухлинного захисту (макрофаги, лімфоцити, їх кооперативна взаємодія) та аналіз гуморальної ланки імунної відповіді (рівні IgG-антитіл і середньомолекулярних циркулюючих імунних комплексів в сироватці крові, цитотоксична активність сироватки); методи експериментальної онкології визначення ефективності розроблених вакцин на моделях пухлинного росту; методи статистичної обробки та аналізу результатів дослідження оцінка достовірності одержаних даних за допомогою t-критерія Ст’юдента, визначення коефіцієнта кореляції Спірмена.
Наукова новизна отриманих результатів. Вперше з ФКР B. subtilis В-7025 було виділено два цитотоксичні компоненти, збагачені протеїном з мол. масою 18,5 кДа та 70 кДа. Встановлено, що цитотоксична дія обох компонентів проявляється за рахунок некротизуючого впливу на пухлинні клітини. Водночас показано, що компонент з мол. масою 18,5 кДа реалізує цитотоксичну активність за рахунок протеолітичної дії на пухлинні клітини, а цитотоксична дія компоненту з мол. масою 70 кДа проявляється, скоріш за все, за рахунок його зв’язування з мембраною пухлинної клітини і «злущування» протеїнів з її поверхні. Встановлено імуноад’ювантні властивості компонента з мол. масою 70 кДа, які обумовлюють стимуляцію реакцій гуморального імунітету у інтактних тварин та у тварин з модельним пухлинним процесом. Вакцини, сконструйовані на основі компонентів з мол. масою 18,5 кДа та мол. масою 70 кДа і пухлинних клітин, вірогідно збільшують виживаність імунізованих тварин з перещепленими модельними пухлинами різного гістогенезу. Вперше показано, що реалізація протипухлинної дії випробовуваних вакцин відбувається за рахунок активації антитілозалежної цитотоксичної дії клітин макрофагального та лімфоцитарного ряду на термінальних стадіях пухлинного процесу та відміни блокуючої дії аутологічної сироватки на прояв активністі ефекторними клітинами. На основі кореляційного аналізу встановлено, що динаміка імунологічних ефектів, викликаних застосуванням вакцин, відрізняється при дослідженні антитілозалежної цитотоксичності лімфоцитів та цитотоксичної активності макрофагів, що, ймовірно, і зумовлює різницю їх протипухлинної дії.
Практичне значення. Вперше отримано дві оригінальні вакцини, які були сконструйовані з використанням очищених продуктів метаболізму мікроорганізмуВ.subtilis B-7025 та пухлинних клітин. Дані вакцини виявились ефективними в експериментах in vivo при лікуванні тварин з перещепленими модельними пухлинами. Використання охарактеризованих нами цитотоксичних компонентів ФКР, дозволить стандартизувати технологію виготовлення вакцин, суттєво зменшить антигенне навантаження цих вакцин на організм та забезпечить більшу специфічність при формуванні імунної відповіді, порівняно з вакцинами на ФКР. Отримані методом електрофорезу дані про зміни в пептидному профілі виготовлених вакцин можуть бути використані при розробці технології приготування вакцин. Дані щодо динаміки змін в імунній системі тварин з пухлинним процесом, які відбуваються під впливом вакцинації, можуть бути використані при розробці схем імунотерапії і її моніторингу при клінічному застосуванні таких вакцин.
Особистий внесок здобувача. Здобувачем особисто була сформульована мета роботи, поставлені основні завдання та підібрані методи дослідження, які необхідні для виконання поставлених задач. Зібрана та проаналізована сучасна наукова література за темою дисертації; відпрацьована методика відбору та аналізу цитотоксичних речовин мікробного походження; самостійно сплановані та проведені експериментально-онкологічні і імунологічні дослідження. Зроблено аналіз отриманих даних. Особисто проведено узагальнення результатів дослідження та сформульовано основні наукові положення та висновки дисертації.
Апробація результатів дисертації. Результати дисертаційної роботи були представлені на: II з’їзді онкологів країн СНД «Онкология 2000» (Київ, 2000); IV Республіканській науково-практичній конференції молодих онкологів України «Сучасні проблеми експериментальної та клінічної онкології» (Київ, 2001); VІІ міжнародній конференції молодих онкологів «Сучасні проблеми експериментальної і клінічної онкології» (Київ, 2006); ХІ з`їзді онкологів України (Судак, 2006); IV з’їзді онкологів і радіобіологів СНД (Баку, 2006); IV міжнародному з’їзді «International conference of young researchers» (Кишинів, 2006); VII онкологічній конференції «VII young oncologists conference with international participation» (Київ, 2007).
Публікації. За результатами дисертації опубліковано 14 наукових робіт, в тому числі 7 статей у провідних фахових журналах, рекомендованих ВАК України та 7 тез доповідей, представлених на вітчизняних і міжнародних наукових з’їздах і конференціях.
Структура та обсяг дисертації. Дисертаційна робота, обсягом 187 сторінок, складається з вступу, огляду літератури, 5 розділів власних досліджень, аналізу та узагальнення результатів дослідження, висновків, списку літератури, який включає 281 першоджерела, в тому числі 230 зарубіжних. Робота ілюстрована 81 рисунком та 32 таблицями.

Список литературы

ВИСНОВКИ
Робота присвячена проблемі імунотерапії злоякісних новоутворень, а саме пошуку активних цитотоксичних компонентів ФКР B. subtilis В-7025, конструюванню з їх використанням протипухлинних вакцин та порівняльному вивченню впливу даних вакцин на імунні реакції тварин з модельним пухлинним процесом.
1. Вперше з фільтрату культуральної рідиниB. subtilis В-7025 виділено та охарактеризовано дві активні білоквмісні фракції, які проявляють цитотоксичну дію на пухлинні клітини компонент (18,5 кДа) та компонент (70 кДа).
2. Показано, що компонент (18,5 кДа) реалізує цитотоксичну активність за рахунок протеолітичної дії, а компонент (70 кДа) за рахунок зв’язування з мембраною пухлинних клітин та «злущування» з її поверхні білків. Обидва компоненти викликають некротичну загибель пухлинних клітин.
3. Встановлено, що отримані компоненти мають імуномодулюючі властивості при імунізації інтактних тварин та тварин з модельним пухлинним процесом. Крім того, компонент (70 кДа) має виражені імуноад’ювантні властивості, що проявляється у активації антитілопродукуючої функції організму.
4. Вакцини, сконструйовані на основі пухлинних клітин та цитотоксичних компонентів ФКР (18,5 кДа та 70 кДа), виявились ефективними у експериментах in vivo на моделях епітеліальних та сполучнотканинних злоякісних пухлин; їх використання подовжувало середню тривалість життя тварин від 23,8% до 75,0%.
5. Протипухлинна дія розроблених вакцин проявляється за рахунок суттєвого підвищення (р<0,05) антитілозалежних реакцій, опосередкованих клітинами лімфоцитарного та макрофагального ряду, та пов’язана з відміною ефекту блокуючої дії аутологічної сироватки на пізніх етапах пухлинного росту.
6.На основі кореляційного аналізу було встановлено, що динаміка імунологічних ефектів, викликаних застосуванням вакцин, в більшості випадків була однотипною: ЦТА Лц (ρ=0,62); АЗЦ Мф (ρ=0,8); кооперативна ЦТА «Мф+Лц» (ρ=0,64); кооперативна АЗЦ «Мф+Лц» (ρ=0,66). Але за динамікою впливу на реакції АЗЦ Лц (ρ=0,21 та ЦТА Мф (ρ=0,31) досліджені ПВ суттєво відрізнялися, що, скоріш за все, і зумовило різницю їх протипухлинної дії.

СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ
1. Противоопухолевые вакцины: перспективы применения в клинической онкологи / Г.П. Потебня, Г.С. Лисовенко, З.Д. Савцова [и др.] // Онкология. 2004. Т. 6, № 3. C. 167174.
2. Протипухлинна аутовакцина на основі глікопептидів пухлинних клітин / В.О. Шляховенко, В.С. Мосієнко, В.В. Козак [та ін.] // Онкологія. 2004. Т. 6, № 3. С. 180184.
3. Märten A. Immunotherapy of pancreatic carcinoma // A. Märten / Rev. Recent. Clin. Trials. 2008 V. 3, № 2. Р. 121-125.
4. Dearden C.E. Role of antibody therapy in lymphoid malignancies // C.E. Dearden / Br. Med. Bull. 2007. № 83. Р. 275-290.
5. Evaluation of the antitumoral effect mediated by IL-12 and HSV-tk genes when delivered by a novel lipid-based system / H. Faneca, A.S. Cabrita, S. Simões [еt al.] // Biochim. Biophys. Acta. 2007. V. 1768, № 5. Р. 1093-1102.
6. Van de Velde A.L. Immunotherapy of hematological malignancies using dendritic cells / A.L. Van de Velde, Z.N. Berneman, V.F. Van Tendeloo // Bull. Cancer. 2008. V. 95, № 3. Р. 320-326.
7. Cheever M.A. Twelve immunotherapy drugs that could cure cancers / M.A. Cheever // Immunol. Rev. 2008. № 222. Р. 357-368.
8. Schmitz F. Protective cancer immunotherapy: what can the innate immune system contribute? / F. Schmitz, A. Heit // Expert. Opin. Biol. Ther. 2008. V. 8, № 1. Р.31-43.
9. Phillips N.C. Tumor-associated antigens as immunotherapy targets / N.C. Phillips, P.P. Major, Н.С. Sikorska // Cancer Detect. Prev. 1988. V. 12, № 1 (6). Р. 451-459.
10. Costimulatory molecules as adjuvants for immunotherapy / J.W. Hodge, J.W. Greiner, K.Y. Tsang [et al.] / Front. Biosci. 2006. № 11 Р. 788-803.
11. Antigen-specific immunotherapy of cervical and ovarian cancer / C.F. Hung T.C. Wu, A. Monie [et al.] // Immunol. Rev. 2008. №222. Р. 43-69.
12. Malyankar U.M. Tumor-associated antigens and biomarkers in cancer and immunetherapy / U.M. Malyankar // Rev. Immunol. 2007. V. 26, № 3-4. Р. 223-247.
13. Acres B. Discovery and development of therapeutic cancer vaccines / B Acres, J.M. Limacher, J. Bonnefoy // Curr Opin Drug Discov Devel. 2007. V. 10, № 2. Р.185-192.
14. Combining tumor-targeted superantigens with interferon-alpha results in synergistic anti-tumor effects / A. Sundstedt , M. Celander, G. Hedlund // Int. Immunopharmacol. 2008. V. 8, № 3. Р. 442-452.
15. In vivo vaccination with tumor cell lysate plus CpG oligodeoxynucleotides eradicates murine glioblastoma / A. Wu, S. Oh, S. Gharagozlou [et al.] // Immunother. 2007. V. 30, № 8. Р. 789-797.
16. Intratumor CpG-oligodeoxynucleotide injection induces protective antitumor T cell immunity / A.S. Lonsdorf, H. Kuekrek, B.V. Stern [et al.] // J. Immunol. 2003. V. 171, № 8. Р. 3941-3946.
17. Immunomodulators of microbial origin enhance cytotoxicity of human mononuclear leukocytes and reduce metastatic progression of Lewis lung carcinoma in mice / N.K. Akhmatova, I.B. Semenova, F.V. Donenko [et al.] // Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 2006. № 6. Р. 35-40.
18. Vaccination with a recombinant Saccharomyces cerevisiae expressing a tumor antigen breaks immune tolerance and elicits therapeutic antitumor responses / E.K. Wansley, M. Chakraborty, K.W. Hance [et al.] // Clin. Cancer Res. 2008. V. 14, № 13 Р. 4316-4325.
19. Phase I trial of the prostate-specific membrane antigen-directed immunoconjugate MLN2704 in patients with progressive metastatic castration-resistant prostate cancer / M.D. Galsky, M. Eisenberger, S. Moore-Cooper [et al.] // J. Clin. Oncol. 2008. V. 26, № 13. Р. 2147-2154.
20. Cancer immunotherapy based on recombinant Salmonella enterica serovar Typhimurium aroA strains secreting prostate-specific antigen and cholera toxin subunit B / J. Fensterle, B. Bergmann, C.L. Yone [et al.] // Cancer Gene Ther. 2008. V. 15, № 2. Р. 85-93.
21. Потебня Г.П. Розробка та підвищення ефективності протипухлинних аутовакцин, виготовлених на основі продуктів синтезу B. subtilis: дис. доктора мед. наук: 01.14.07 «Онкология» / Потебня Григорій Платонович Київ. 2003. 419 с.
22. Затула Д.Г. Опыт изучения активности фильтрата из культуры микроорганизма АБ-56 in vitro / Д.Г. Затула, М.К. Топчий // В кн.: Материалы науч. конф. Киевского н.-и. ин-та эпидемиол. и микробиологии. К., 1961. № 3. С. 362-364.
23. Зайчук В.В. Ефективність застосування протипухлинної аутовакцини в лікуванні хворих з різною морфологічною структурою раку молочної залози / В.В. Зайчук, І.Б. Щепотін, В.Є. Чешук [та ін.] // Онкология: Прил. к журн. "Эксперим. онкология". 2006. Т. 8, № 1. С. 70-73.
24. Скляр С.Ю. Шляхи підвищення ефективності комплексного лікування хворих на рак молочної залози: автореф. дис. на здобуття наукового ступеня докт. мед. наук: спец. номер специальности 01.14.07 «Онкология» / С.Ю. Скляр К., 2006. 20 с.
25. Противоопухолевая аутовакцина в лечении больных распространенным колоректальным раком / Е.А. Колесник, Г.П. Потебня, В.А. Кикоть [и др.] // Онкология. 1999. № 2. Р. 104-109.
26. Экспериментальное исследование эффективности комбинированного использования противоопухолевой вакцины и интерферона / Г.П. Потебня, Ю.И. Кудрявец, Г.С. Лисовенко [и др.] // Экспер. Онкология. 2007. V. 29, № 2. C.102-105.
27. Гриневич Ю.А. Основы клинической иммунологии опухоли / Ю.А. Гриневич, Л.Я. Каменец. К.: Здоров’я, 1986. - 158 с.
28. Van Pel A. Protection against a nonimmunogenic mouse leukemia by an immunogenic variant obtained by mutagenesis / A. Van Pel, T. Boon // Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1982. № 79. Р. 4718-4722.
29. Tuning tumor-specific T-cell activation: a matter of costimulation / H. Abken, A. Hombach, C. Heuser [et al.] // Trends Immunol. 2002. № 23. Р. 240-245.
30. Потебня П.Г. Противоопухолевые аутовакцины: перспективы применения / П.Г. Потебня, Г.С. Лисовенко, С.І. Ялкут // Doctor. 2002. № 2. С. 52-58.
31. Radaev S. Structure and function of natural killer cell surface receptors / S. Radaev, P.D. Sun // Annu Rev. Biophys. Biomol. Struct . 2003. № 32. Р. 93-114.
32. Necrotic death but not irradiation abolishes costimulation of T-cell effector functions and survival by CD80-expressing tumor cells / L. Stärck, C. Scholz, T. Blankenstein [et al.] // Int. J. Cancer. 2005. V. 116, № 1. Р. 78-86.
33. Apoptosis induced by the lymphocyte effector molecule perforin / P. Bolitho, I. Voskoboinik, J.A. Trapani [et al.] // Curr. Opin. Immunol. 2007. V. 19, № 3. Р. 339-47.
34. Wheeler C.J. Dendritic cell vaccines and immunity in glioma patients / C.J. Wheeler, K.L. Black // Front Biosci. 2005. V. 1, № 10. Р. 2861-2881.
35. Enhanced CD4+ T-cell response in DR4-transgenic mice to a hybrid peptide linking the Ii-Key segment of the invariant chain to the melanoma gp100(48-58) MHC class II epitope / N.L. Kallinteris, S. Wu, X. Lu [et al.] // J. Immunother. 2005. V. 28, №4. Р. 352-358.
36. Antibody association with HER-2/neu-targeted vaccine enhances CD8 T cell responses in mice through Fc-mediated activation of DCs. / P.S. Kim, T.D. Armstrong, H. Song [et al.] // J. Clin. Invest. 2008. V. 118, №5. Р. 1700-1711.
37. Dendritic cell vaccines / P.J. Mosca, H.K. Lyerly, T.M. Clay [et al.] // Front. Biosci. 2007. V. 1, № 12. Р. 4050-4060.
38. The immunological synapse / S.K. Bromley, W.R. Burack, K.G. Johnson [et al.] // Annu Rev. Immunol. 2001. № 19. Р. 375-396.
39. Type I NKT cells protect (and type II NKT cells suppress) the host's innate antitumor immune response to a B-cell lymphoma / G.J. Renukaradhya, M.A. Khan, M. Vieira [et al.] // Blood. 2008. V. 111, № 12. Р. 5637-5645.
40. Plasmacytoid dendritic cells prime IL-10-producing T regulatory cells by inducible costimulator ligand / T. Ito, M. Yang, Y.H. Wang [et al.] // J. Exp. Med. 2007. V. 204, № 1. Р. 105-115.
41. Immunoregulatory T cells in cancer immunotherapy / M.A. Morse, T.M. Clay, P. Mosca [et al.] // Expert. Opin. Biol. Ther. 2002. № 2. Р.827-834.
42. SEREX analysis of gastric cancer antigens / Y. Obata, Т. Takahashi, J. Sakamoto [et al.] // Cancer Chemother. Pharmacol. 2000. № 46, suppl. S. P. 37-42.
43. Tumor-infiltrating В lymphocytes as a poten­tial source of identifying tumor antigen in human lung cancer / M. Yasuda, M. Takenoyama, Y. Obata [et al.] // Cancer Res. 2002. V. 62, № 6. P. 1751-1756.
44. Analysis of the antibody repertoire of astrocyto­ma patients against antigens expressed by gliomas / R. Schmits, В. Cochlovius, G. Treitz [et al.] // Int. J. Cancer. 2002. V. 98, № 1. P. 73-77.
45. Characterisation of tumour-associated antigens in colon cancer / A. Line, Z. Slucka, A. Stengrevics [et al.] // Cancer Immunol. Immunother. 2002. V. 51, № 10. P. 574-582.
46. The role of B-cells for in vivo T-cell responses to a Friend virus-induced leukemia / K.R. Schultz, J.P. Klarnet, R.S. Gieni [et al.] // Science. 1990. V. 249, № 4971. P. 921-923.
47. Synergy between an antibody and CD8+ cells in eliminating an established tumor / L.V. Vasovic, R. Dyall, R.A. Clynes [et al.] // Eur. J. Immunol. 1997. V. 27, № 2. P. 374-382.
48. Cell surface recycling of internalized antigen permits dendritic cell priming of B cells / A. Bergtold, D.D. Desai, A. Gavhane, [et al.] // Immunity. 2005. V. 23, № 5. Р. 503-514.
49. Murine Fc receptors for IgG are redundant in facilitating presentation of immune complex derived antigen to CD8+ T cells in vivo / J.M. de Jong, D.H. Schuurhuis, A. Ioan-Facsinay [et al.] // Mol. Immunol. 2006. V. 43, № 13. Р. 2045-2050.
50. Fas ligand breaks tolerance to self-antigens and induces tumor immunity mediated by antibodies / A.K. Simon, A. Gallimore, E. Jones [et al.] // Cancer Cell. 2002. V. 2, № 4. P. 315-322.
51. A subclass of tumor-inhibitory monoclonal an­tibodies to ErbB-2/HER2 blocks crosstalk with growth factor receptors / L.N. Klapper, N. Vaisman, E. Hurwitz [et al.] // Oncogene. 1997. V. 14, № 17. P. 2099-2109.
52. Nimmerjahn F. Analyzing antibody-Fc-receptor interactions / F. Nimmerjahn, J.V. Ravetch // Methods Mol. Biol. 2008. № 415. Р.151-162.
53. Tumors as elusive targets of T cell based active immunotherapy / F.M. Marincola, E. Wang, M.Herlyn [et al.] // Trends Immunol. 2003. V. 24, № 6. Р. 335-342.
54. Seliger B. Strategies of tumor immune evasion / B. Seliger // BioDrugs. 2005. V. 19, № 6. Р. 347-354.
55. Restifo NP. Not so Fas: re-evaluating the mechanisms of immune privilege and tumor escape. Nat Med 2000 V. 6, № 5. Р. 493-495.
56. Cutting edge: the tumor counterat-tack hypothesis revisited: colon cancer cells do not induce T cell apoptosis via the Fas (CD95, APO-1) pathway / N. Favre-Felix, A. Fromentin, A. Hammann, [et al.] // J. Immunol. 2000. V. 164, № 10. Р. 5023-5027.
57. Progression in melanoma is associated with decreased expression of death receptors for tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand / L. Zhuang, C.S. Lee, R.A. Scolyer [et al.] // Hum. Pathol. 2006. V. 37, № 10. Р. 1286-1294.
58. Correlation between tumor regression and T cell responses in melanoma patients vaccinated with a MAGE antigen / C. Lonchay, P. van der Bruggen, T. Connerotte [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci USA. 2004. № 101, suppl 2. Р. 14631-14638.
59. Fas ligand expression in metastatic renal cell carcinoma during interleukin-2 based immunotherapy: no in vivo effect of Fas ligand tumor counterattack / F. Donskov, H. von der Maase, М. Marcussen [et al.] // Clin. Cancer Res. 2004. V. 10, № 23. P. 7911-7916.
60. Upregulation of FasL by LPA on ovarian cancer cell surface leads to apoptosis of activated lymphocytes / X. Meng, L. Graves, T.V. Do [et al.] // Gynecol. Oncol. 2004. V. 95, № 3. P. 488-495.
61. The selection of tumor variants with altered expression of classical and non-classical MHC class I molecules: implications for tumor immune escape / I. Algarra, A. Garcia-Lora, T. Cabrera [et al.] // Cancer Immunol. Immunother. 2004. V. 53, № 10. Р. 904-9