ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ НАПРАВЛЕННОЙ ИНДУКЦИИ АПОПТОЗА И СОПРОВОДИТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛУЧЕВОГО ЛЕЧЕНИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ

Краткое описание

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ ХАРЬКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ ПОСЛЕДИПЛОМНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

На правах рукописи

ПУШКАРЬ Сергей Николаевич

УДК 616.24-006.6-031.14-036.8

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ НАПРАВЛЕННОЙ ИНДУКЦИИ АПОПТОЗА И СОПРОВОДИТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛУЧЕВОГО ЛЕЧЕНИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ
14.03.04 патологическая физиология

Диссертация
на соискание ученой степени
доктора медицинских наук

Научный консультант:
доктор медицинских наук, профессор Н.А. КЛИМЕНКО

Харьков 2008

Содержание
Перечень условных сокращений. 5
Введение. 6
Раздел 1 Обзор литературы.. 16
1.1. Физиологическая роль сфинголипидов и их участие в сигнальной трансдукции. 16
1.2. Ферменты метаболизма сфинголипидов мишень противоопухолевой терапии. 23
1.2.1. Роль стимуляции синтеза церамида в терапии рака. 25
1.2.2. Терапия, связанная с активацией гидролиза сфингомиелина. 26
1.2.3. Глюкюзилцерамидсинтаза мишень антираковой терапии. 28
1.2.4. Другие ферменты метаболизма сфинголипидов как мишень анти-раковой терапии. 31
1.3. Значение лучевой терапии в мультидисциплинарном лечении онкологических больных. 33
1.4. Роль нарушения метаболических механизмов регуляции в развитии и течении онкологического процесса. 37
1.4.1. Состояние ПОЛ и АО-системы у больных с онкопатологией. 37
1.4.2. Состояние липидного обмена у больных с онкопатологией. 47
1.4.3. Состояние системы гемостаза у больных с онкопатологией. 52
1.4.4. Выраженность эндогенной интоксикации у больных с онкопатологией. 58
Раздел 2 Объекты и методы исследований. 62
2.1. Экспериментальная часть работы.. 62
2.1.1. Построение экспериментальных исследований. 62
2.1.2. Методики определения сфинголипидов в сыворотке крови и тканях. 65
2.1.3. Методы морфологической оценки апоптоза и лучевого патоморфоза опухоли Герена на ультраструктурном уровне. 66
2.2. Клиническая часть работы.. 67
2.2.1. Общая клиническая характеристика больных местно-распространенным РГЖ... 67
2.2.2. Метод лучевой терапии с толерантными дозами таксотера и лучевой терапии в классическом режиме больным РГЖ IIБ-IIIБ стадии. 69
2.2.3. Метод сопроводительной терапии (характеристика препаратов, схема и дозы). 70
2.2.4. Методики морфофункциональной оценки лучевого патоморфоза (на гистологическом и ультраструктурном уровне). 73
2.2.5. Количественная оценка апоптозных клеток. 73
2.2.6. Ультразвуковой метод исследования РГЖ... 74
2.2.7. Методы определения показателей ПОЛ и АО-системы.. 74
2.2.8. Методы определения липидного профиля в сыворотке крови. 75
2.2.9. Методы определения гемостатического потенциала крови. 77
2.2.10. Методы определения эндогенной интоксикации. 80
2.3. Статистическая обработка полученных результатов исследования. 80
Раздел 3 Изучение механизма образования de novo и накопления индукторов апоптоза липидной природы в нативной опухоли и при направленном действии индукторов апоптоза (таксотер, этопозид, рентгеновское облучение). 82
3.1. Направленное действие индукторов апоптоза (таксотера и этопозида) на отдельные звенья обмена сфинголипидов в условиях экспериментального онкогенеза. 82
3.2. Влияние рентгеновского облучения и совместного действия облучения с радиомодификаторами таксотером и этопозидом на продукцию индукторов апоптоза липидной природы в ткани опухоли Герена и их содержание в сыворотке крови животных-опухоленосителей. 93
3.3. Ультраструктурная характеристика опухолевых клеток карциномы Герена после локального рентгеновского облучения опухоли без и с использованием таксотера. 103
3.4. Влияние лучевой терапии с индуктором апоптоза таксотером на содержание сфингомиелинов, церамидов, уровнь апоптоза, патоморфоз в опухолевых клетках больных РГЖ... 108
Раздел 4 Исследование показателей гомеостаза у больных РГЖ в зависимости от стадии онкологического процесса (ІІА-ІІІБ) и последствий лучевого лечения на фоне индукции апоптоза таксотером.. 131
4.1. Состояние показателей про- и антиоксидантной систем.. 131
4.2. Состояние липидного и липопротеинового спектров сыворотки крови. 138
4.3. Состояние системы гемостаза. 146
4.4. Выраженность эндогенной интоксикации. 155
Раздел 5 Исследование показателей гомеостаза у больных РГЖ после лучевой терапии с таксотером на фоне патогенетически обоснованной сопроводительной терапии. 164
5.1. Состояние показателей про- и антиоксидантной систем.. 164
5.2. Состояние липидного и липопротеинового спектров сыворотки крови. 171
5.3. Состояние системы гемостаза. 174
5.4. Выраженность эндогенной интоксикации. 177
Раздел 6 Анализ и обобщение результатов исследований. 185
Выводы.. 220
Практические рекомендации. 225
Список использованной литературы.. 226

Список литературы

ВЫВОДЫ
В диссертации представлено теоретическое обобщение и новое решение актуальной научной медицинской проблемы преодоления резистентности опухолевых клеток к радиотерапии и поиска новых подходов и способов, обеспечивающих селективное управление радиочувствительностью на основе индукции церамидного пути апоптоза. Получены новые данные, касающиеся механизмов синтеза и накопления церамидов в опухоли, раскрыты механизмы индукции церамидного пути апоптоза под воздействием радиомодификаторов таксотера и этопозида.
На этом основании разработан патогенетически обоснованный метод радиомодифицированной лучевой терапии с таксотером и этопозидом, способствующий существенной редукции опухоли посредством апоптоза. Патогенетически обоснован метод сопроводительной терапии препаратами растительного и животного происхождения для коррекции гомеостаза онкологических больных в процессе лучевой терапии с радиомодификатором таксотером.
1. Радиорезистентность опухолевых клеток аденокарциномы Герена во многом определяется низким содержанием проапоптозного липида церамида и снижением активности его синтеза (на 35%) на фоне двукратного увеличения синтеза апоптозонеактивного сфингомиелина по сравнению с необлученной опухолью.
2. Цитостатики таксотер и этопозид в условиях in vivo способствуют существенному (более чем трех- и пятикратному соответственно) увеличению в опухолевых клетках содержания церамида с сохранением количества сфингомиелина на уровне интактной опухоли при введении этопозида и умеренным повышением содержания сфингомиелина (на 40%) при введении таксотера и, следовательно, возрастанию соотношения церамид/сфингомиелин, что позволяет рассматривать таксотер и этопозид в роли фармакологических радиомодификаторов, активирующих механизмы церамидного пути апоптоза.
Радиомодифицирующий эффект таксотера и этопозида при локальном рентгеновском облучении (10,0 Гр) опухоли Герена выражается в еще большем (четырех- и шестикратном соответственно) увеличении массы церамида в опухолевых клетках.
3. Определение активности синтеза отдельных фракций сфинголипидов с помощью радиоактивного предшественника [14C]-пальмитиновой кислоты показало разные механизмы накопления церамида в опухолевых клетках при воздействии таксотера или этопозида. Накопление церамида (в 4 раза) при введении таксотера на фоне рентгеновского облучения опухоли осуществлялось за счет синтеза церамида de novo. При введении этопозида и рентгеновском облучении опухоли значительное возрастаниенизким уровнемгом ппеклетко оного происхождения для коррекции гомеостаза больных РГЖ в процессе лучевой терапии с рии массы церамида (в 6 раз) происходит не только за счет его синтеза de novo (до 183,2%), но и за счет повышения активности синтеза [14С]-сфингомиелина (до 192,85%) с последующим преобразованием его в церамид (о чем свидетельствует содержание сфингомиелина на уровне интактной опухоли), а активация синтеза [14С]-сфингозина (на 16%) является дополнительным фактором усиления проапоптозной активности лучевой терапии с таксотером. Незначительную активацию (на 24,2%) синтеза пропролиферативного липида глюкозилцерамида на фоне чрезмерного увеличения синтеза и накопления церамида при введении этопозида можно рассматривать как компенсаторный ответ на повышенную апоптозную гибель клеток.
4. Введение толерантных доз таксотера в схему классической неоадъювантной лучевой терапии больных РГЖ сопровождается значительным увеличением содержания церамида в опухолевой ткани и сыворотке крови (в 4,0 и 1,7 раза соответственно). Повышенный уровень церамидов коррелирует с трехкратным увеличением апоптоза опухолевых клеток и существенной редукцией опухоли (в среднем на 75-100%), что указывает на повышение таксотером радиочувствительности опухолевых клеток через механизм усиления апоптоза.
5. Показаны закономерности системного действия опухоли на ряд параметров гомеостаза, направленность и степень изменений которых тесно связаны со стадией развития опухолевого процесса в виде первоначального напряжения и роста ПОЛ (на ранних стадиях РГЖ), а затем угнетения и истощения процессов ПОЛ и АО-системы (на поздних стадиях РГЖ), прогрессирующего снижения уровня ОХ и ЛПНП и повышения содержания ЛПВП, ТГ, ЛПОНП, развития коагулопатий с дальнейшим нарастанием явлений гиперкоагуляции, паракоагуляции, появлением признаков начальных стадий ДВС-синдрома на фоне резкого угнетения фибринолиза. У больных на поздних стадиях РГЖ при первичном осмотре определяется нулевая степень эндогенной интоксикации по шкале ВОЗ и I-II степень по метаболическим показателям.
6. Лучевая терапия с индукцией апоптоза таксотером в неоадъювантном режиме больных РГЖ IIБ-IIIБ ст. позволила достичь высокого уровня «ответа опухоли на лечение»: полной (стопроцентной) регрессии в 10,5% случаев, в остальных случаях получены выраженные клинические проявления регрессии опухоли (в пределах 75-95%) на фоне 3-хкратного увеличения апоптозного индекса по сравнению с нативной опухолью и в 2,5 раза по сравнению с лучевой терапией без таксотера.
7. Высокий уровень регрессии опухолей и девитализации сохранившихся опухолевых клеток после лучевой терапии с таксотером подтверждается морфофункциональными признаками на гистологическом и ультраструктурном уровнях: низкими показателями митотического индекса в опухоли, большим количеством патологических митозов, большей активностью гистиоцитов в лимфатических узлах по сравнению с таковыми после лучевой терапии без таксотера; наличием клеток с темными пикнотическими ядрами, вакуолизацией цитоплазмы и наполнением ее многочисленными микрофиламентами, белковой жидкостью и кристаллами солей кальция.
8. Эффективный, но достаточно агрессивный курс неоадъювантной лучевой терапии с таксотером привносит дополнительные изменения гомеостаза, как в сторону ухудшения, так и в сторону проявлений компенсации, как признака устранения влияния фактора опухоли. Со стороны ПОЛ наблюдалась стабилизация и тенденция к снижению активности перекисных процессов не более чем на 10%, на фоне некоторого повышения активности таких АО-ферментов, как СОД и ГП. При этом сохранялся дефицит ферментного (на 30-50%) и витаминного (на 20-50%) звеньев АО-системы, что свидетельствует о нарастании истощения АО-потенциала к концу лучевой терапии с таксотером. Со стороны липидного статуса выявлено существенное восстановление в виде увеличения содержания ОХ, ЛПНП (на 16% и 50%), снижения уровня ТГ, ЛПОНП и ЛПВП. Гипохолестеринемию, гипертриглицеридемию, рост уровня ЛПВП можно рассматривать как неблагоприятный прогностический признак и показатель развития метастазов. В системе гемостаза установлено сохранение гиперкоагуляционной направленности изменений, но с признаками нормализации. Однако паракоагуляционные процессы (наличие растворимых фибрин-мономерных комплексов и продуктов деградации фибрина, на что указывают положительные этаноловый и протамин-сульфатный тесты) оставались на высоком уровне, что сохраняло угрозу развития ДВС-синдрома. Введение толерантной дозы таксотера в схему неоадъювантной лучевой терапии не приводило к увеличению эндотоксемии, которая не превышала II степени.
9. Позитивные сдвиги в изучаемых системах гомеостаза под влиянием лучевой терапии с таксотером свидетельствуют об эффективности предложенного метода антибластомной терапии, о значении влияния фактора опухоли на состояние метаболизма, а сохраняющиеся существенные расстройства последнего диктуют необходимость патогенетически обоснованной метаболической коррекции гомеостаза. Показано, что биокомплекс препаратов природного происхождения (Биполан и Каринат) в качестве сопроводительной терапии при высокоагрессивной лучевой терапии с таксотером во многом предотвращает развитие или коррегирует возникшие нарушения гомеостаза, обеспечивая положительный метаболический эффект.
10. Метод неоадъювантной лучевой терапии с таксотером на фоне сопроводительной терапии, разработанный на основании выявленных механизмов действия таксотера на индукцию апоптоза опухолевых клеток, а также на основании полученных закономерностей изменений ряда систем гомеостаза у больных РГЖ, позволяет достигнуть существенной регрессии опухоли с восстановлением показателей метаболизма, что создает возможность перевода первично неоперабельной опухоли в операбельное состояние и рекомендовать этот метод для повседневной практики онкодиспансеров, специализированных клиник и институтов.

Практические рекомендации
Полученные результаты изучения свойств и механизмов действия цитостатиков таксотера и эпотозида в условиях целостного организма, установление закономерностей изменения ряда показателей гомеостаза у больных РГЖ разной степени тяжести позволили:
1. Предложить внедрение в клиническую практику метода неоадъювантной лучевой терапии с индуктором апоптоза таксотером больным с первично неоперабельным РГЖ.
2. Предложить схему сопроводительной терапии препаратами животного и растительного происхождения (Биполаном и Каринатом) для метаболической коррекции гомеостаза у больных РГЖ в процессе лучевой терапии с таксотером.
3. Рекомендовать учитывать состояние ряда показателей гомеостаза (активность про- и антиоксидантных систем, характер изменений уровней маркеров эндогенной интоксикации, а также показателей спектра липопротеинов) для прогнозирования результатов и оценки эффективности проводимого антибластомного лечения.

Список использованной литературы
1. Parkin D.M., Bray F.I., Devesa S.S. Cancer burden in the years 2000. The global picture // Eur.J.Cancer. 2001. Vol.37, Suppl. p.4-66.
2. Cancer Incisence in five continents / Parkin D.M., Bray F.I. et al. // Lyon: AIRC, 2002.Vol. VIII. IARC Sci. Publ. №155. 781p.
3. Breast cancer genotic: what we know and what we need// Natanson K. et al. //Nat. Med. 2001. Vol.7. P.552-556.
4. Lichtenstein A. On evolutionary origin of cancer. // Cancer Cell. Int. 2005. 5(1):5
5. Doan T., Massarotti E. Rituximab. Drugs Today (Barc). 2005. Dec. 41(12): 785-97.
6. Мардынский Ю.С., Муравская Г.В. Основные направления развития современной лучевой терапии // Матер. III съезд онкологов и радиологов СНГ. Минск, 25-28 мая 2004 г. C. 55-58.
7. Голдобенко Г.В., Канаев С.В. Факторы прогноза и возможность индивидуализации лучевого лечения онкологических больных // Вопросы онкологии. 2000. Т. 46, №3. C. 361-365
8. Дарьялова С.Л. Основы лучевой терапии в онкологии // Рос. онколог. журн. 1999. №5. C.51-55
9. Голдобенко Г.В., Канаев С.В. Современные проблемы радиационной онкологии // Вопр. онкологии. 1997. Т.43, №5 C.481-492.
10. Павлов А.С., Даценко В.С., Виноградов Л.И. Первый опыт клинического применения предоперационной двухступенчатой СВЧ гипертермии в сочетании с однократным облучением при раке молочной железы // Мед. радиология. 1986. №5. C. 3-6.
11. Ярмоненко С.П. Радиомодификаторы и прогресс радиационной онкологии // Вопр. онкологии. 1995. Т. 41, №2. С. 93-94.
12. Цыб А.Ф. Ульяненко С.Е., Мардынский Ю.С. Нейтроны в лечении злокачественных новообразований. Обнинск.: БИСТ, 2003. 110с.
13. Даценко В.С. Эволюция методик предоперационной лучевой терапии при раке молочной железы // Вопр. онкологии. 1990. Т. 36, №12. С.1448-1454.
14. Изучение радиомодифицирующего эффекта 5-фторурацила при сочетанной лучевой терапии распространенных форм рака шейки матки /Иванкова В.С., Воробева Л.И., Галахин К.А. и др. // Матер. науч.практ. конф. «Роль лучев. терапии в гинекологической онкологии». Обнинск, 2002. С.82-84.
15. Frings S. Capecitabine a novel oral tumor activated fluoropyrimidine // Omcologie. 1998. Vol. 21. P.451-458.
16. Cisplatin, radiation and adjuvant hysterectomy for bulky stage ib cervical carcinoma /Keys H.M., Bundy B.N., Stehman F.B. et al. // New.Engl. J. Medic. 1999. Vol. 340, №15. P. 1154-1161.
17. Milas L., Milas M.M., Mason K.A. combination of taxanes with radiation: predinical studies. // Semin Radiat. Oncolog. 1999. 9(2 Suppl 1). P. 12-26.
18. Kolesnick R.N., Kronke M. Regulation of ceramide production and apoptosis // Annu Rev. Physiol. 1998. Vol. 60. P. 643-645.
19. Radin N.S. Тhe development of aggressive cancer a possible role for sphingolipids // Cancer Invest. 2002. Vol.20. P.779-786.
20. Liu Y.Y., Han T.Y., Giuliano A.E., Cabot M.C. Expression of glucosylceramide synthase, converting ceramide to glucosylceramide, confers adriamycin resistance in human breast cancer cells // J Biol Chem. 1999. Vol. 274, № 2. P. 1140-1146.
21. Liu Y.Y., Han T.Y., Giuliano A.E., Hansen N., Cabot M.C. Uncoupling ceramide glycosylation by transfection of glucosylceramide synthase antisense reverses adriamycin resistance // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275, №10. P.7138-7143.
22. Hannun I.A., Obeid L.M. Ceramide: an intracellular signal for apoptosis // Trends Biochem. Sci. 1995. Vol.20, №2 P.73-77.
23. Combination therapy wosh cisplatin and nifisipine induced apoptpsis in cisplatin-sensitive and cisplatin-resistant human glioblastoma cell /Kando S., Yin D., Morimura T. et al. // Brit J.Cancer. 1995. Vol.71, №2. P.282-289.
24. Барабой В.А., Зинченко В.А., Сорочинский Б.В. Радіосенсабілізуючий ефект таксолу на клітини злоякісних пухлин // Цитологія і генетика. 2001. №1. С.16-21.
25. Ionising radiatiom acts on cellular memebranes to generate ceramide and initiate apoptosis / Haimovitz-Fridman A., Kan C.C., Ehleter D. et al. // J. Ekp. Med. 1994. Vol.180. P. 525-534.
26. Савина Е.В., Слонимская Е.М., Кондакова И.В. Антиоксидантная система и перекисное окисление липидов у больных с предопухолевыми заболеваниями и раком молочной железы // Рос. онкол. журн.- 2001.- № 1.- С. 20-22.
27. МихалевичО.Д., ГорожанскаяЭ.Г. Некоторые особенности перекисного окисления липидов в неизмененных и опухолевых тканях онкологических больных и возможности его коррекции // Эксперим. онкология.- 1994.- Т. 16, № 4-6.- С. 393-398.
28. Metabolic response to radiation therapy in patints with cancer / Klinn S., Luu K., Sakurai G. et al. // Metabolism.- 1996.- Vol. 45, № 6.- P. 767-773.
29. Futerman A.H., Hannun Y.A. The complex life of simple sphingolipids // EMBO Rep. 2004.-Vol. 373. P. 777-782.
30. Perry, D.K., Hannun, Y.A. The role of ceramide in cell signaling // Biochim. Bioph. Acta 1998. Vol. 1436. P. 233-243.
31. Gulbins E., Li P.L. Physiological and pathophysiological aspects of ceramide // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 2006.- Vol. 290. P. R11-26.
32. Jiang X., Paultre F., Pearson T.A., Reed R.G., Francis C.K., Lin M., Berglund L., Tall A.R. Plasma sphingomyelin level as a risk factor for coronary artery disease // Arteriolscler. Thromb. Vasc. Biol. 2000. Vol. 20. P. 2614-2618.
33. Schissel S.L., Tweedie-Hardman J., Rapp J.H., Graham G., Williams K.J., Tabas I. Rabbit aorta and human atherosclerotic lesions hydrolize sphingomyelin of retained low-density lipoprotein. Proposed role for arterial-wall sphingomyelinase in subendothelial retention and aggregation of atherogenic lipoproteins // J. Clin. Invest. 1996. Vol. 98. P. 1455-1464.
34. Schmitz-Pfeiffer C. Protein kinase C and lipid-induced insulin resistance in skeletal muscle // Ann. Acad. N.Y. Sci. 2002. 967. P. 146157.
35. Ayasolla K., Khan M., Singh A.K., Singh J. Inflammatory mediator and β-amyloid (25-35)-induced ceramide generation and iNOS expression are inhibited by vitamin E // Free Radical Biology & Medicine. 2004. 37. P. 325338.
36. Peña L.A., Fuks Z., Kolesnick R. Stress-induced apoptosis and the sphingomyelin pathway // Biochem. Pharmacol. 1997. Vol. 53. P. 615-621.
37. Bose R., Verheij M., Haimovitz-Friedman A., Scotto K., Fuks Z., Kolesnick R. Ceramide synthase mediates daunorubicin-induced apoptotisis: an alternative mechanism for generating death signals // Cell. 1995. Vol. 82. P. 405-414.
38. Strum J.C., Small G.W., Pauig S.B., Daniel L.W. 1-beta-D-Arabinofuranosylcytosine stimulates ceramide and diglyceride formation in HL-60 cells // J. Biol. Chem. 1994. Vol. 269. P. 15493-15497.
39. Jarvis W.D., Grant S. The role of ceramide in the cellular response to cytotoxic agents // Curr. Opin. Oncol. 1998. Vol. 10. P. 552-559.
40. Malisan F., Testi R. Lipid signaling in CD95-mediated apoptosis // FEBS Lett. 1999. Vol. 452. P. 100-103.
41. Santana P., Peña L.A., Haimovitz-Friedman A., Martin S, Green D., McLoughlin M., Cordon-Cardo C., Schuchman E.H., Fuks Z., Kolesnick R. Acid sphingomyelinase-deficient human lymphoblasts and mice are defective in radiation-induced apoptosis // Cell. 1996. Vol. 86, № 2. P. 189-199.
42. Haimovitz-Friedman A. Radiation-induced signal transduction and stress response // Radiat. Res. 1998. Vol. 150 (5 Suppl). P. S102-S108.
43. Dbaibo G.S., Obeid L.M., Hannun Y.A. Tumor necrosis factor-alpha (TNF- alpha) signal transduction through ceramide. Dissociation of growth inhibitory effects of TNF-alpha from activation of nuclear factor-kappa B // J. Biol. Chem. 1993. Vol. 268. P. 17762-17766.
44. Kim M.Y., Linardic C., Obeid L., Hannun Y. Identification of sphingomyelin turnover as an effector mechanism for the action of tumor necrosis factor alpha and gamma-interferon. Specific role in cell differentiation. // J. Biol. Chem. 1991. Vol. 266. P. 484-489.
45. Basu S., Kolesnick R. Stress signals for apoptosis: ceramide and c-Jun kinase // Oncogene 1998. Vol. 17. P. 3277-3285.
46. Hannun Y.A. Functions of ceramide in coordinating cellular responses to stress // Science 1996. Vol. 274. P. 1855-1859.
47. Merrill A.H. Jr., Schmelz E.M., Wang E., Schroeder J.J., Dillehay D.L., Riley R.T. Role of dietery sphingolipids and inhibitors of sphingolipid metabolism in cancer and other diseases // J. Nutr. 1995. Vol. 125 (6 Suppl). P. 1677S-1682S.
48. Okazaki T., Bell R.M., Hannun Y.A. Sphingomyelin turnover induced by vitamin D3 in HL-60 cells. Role in cell differentiation // J. Biol. Chem. 1989. Vol. 264. P. 19076-19080.
49. Coroneos E., Wang Y., Panushka J.R., Templeton D.J., Kester M. Sphingolipid metabolites differentially regulate extracellular signal-regulated kinase and stress-activated protein kinase cascades // Biochem. J. 1996. Vol. 316(Pt 1). P. 13-17.
50. Sawai H., Okazaki T., Yamamoto H., Okano H., Takeda Y., Tashima M., Sawada H., Okuma M., Ishikura H., Umehara H. Requirement of AP-1 for ceramide-induced apoptosis in human leukemia HL-60 cells // J Biol Chem. - 1995. Vol. 270, № 45. P. 27326-27331.
51. Verheij M., Bose R., Lin X.H., Yao B., Jarvis W.D., Grant S., Birrer M.J., Szabo E., Zon L.I., Kyriakis J.M., Haimovitz-Friedman A., Fuks Z., Kolesnick R.N. Requirement for ceramide-initiated SAPK/JNK signalling in stress-induced apoptosis // Nature. - 1996. Vol. 380, № 6569. P. 75-79.
52. Kolesnick R., Golde D.W. The sphingomyelin pathway in tumor necrosis factor and interleukin-1 signaling // Cell 1994. Vol. 77. P. 325-328.
53. Cifone M.G., De Maria R., Roncaioli P., Rippo M.R., Azuma M., Lanier L.L., Santoni A., Testi R. Apoptotic signaling through CD95 (Fas/Apo-1) activates an acidic sphingomyelinase. // J Exp Med. - 1994. Vol. 80, № 4. P. 1547-1552.
54. Herr I., Wilhelm D., Bohler T., Angel P., Debatin K.M. Activation of CD95 (Fas/Apo-1) signaling by ceramide mediates cancer therapy-induced apoptosis // EMBO J. 1997. Vol. 16. P. 6200- 6208.
55. Weigmann K., Schutze S., Machleidt T., Witte D., Kronke M. Functional dichotomy of neutral and acidic sphingomyelinases in tumor necrosis factor signaling // Cell 1994. Vol. 78. P. 1005-1015.
56. Schwander R., Wiegmann K., Bernardo K., Kreder D., Kronke M. TNF receptor death domain-associated proteins TRADD and FADD signal actrivation of acidic sphingomyelinase // J. Biol. Chem. 1998. Vol. 273. P. 5916-5922.
57. Mizushima N., Koike R., Kohsaka H., Kushi Y., Handa S., Yagita H., Miyasaka N. Ceramide induces apoptosis via CPP32 activation // FEBS Lett. -1996. Vol. 395, № 2-3. P. 267-271.
58. Kroesen B.J., Pettus B., Luberto C., Busman M., Sietsma H., de Leij L., Hannun Y.A. Induction of apoptosis through B-cell receptor cross-linking occurs via de novo generated C16-ceramide and involves mitochondria // J Biol Chem. -2001. Vol. 276, № 17. P. 13606-13614.
59. Eto M., Bennouna J., Hunter O.C., Hershberger P.A., Kanto T., Johnson C.S., Lotze M.T., Amoscato A.A. C16 ceramide accumulates following androgen ablation in LNCaP prostate cancer cells // Prostate. - 2003. Vol. 57, № 1. P. 66-79.
60. Sallards M.C. Analysis of sphingomyelin, glucosylceramide, ceramide, sphingosine, sphingosine 1-phospate by tandem mass spectrometry // Methods Enzymol. 2000. Vol. 312. P. 32-45.
61. Perry D.K., Carton J., Shah A.K., Meredith F., Uhlinger D.J., Hannun Y.A. Serine palmitoyltransferase regulates de novo ceramide generation during etoposide-induced apoptosis // J. Biol. Chem. 2000. Vol. 275. P. 9078-9084.
62. Chalfant C.E., Rathman K., Pinkerman R.L., Wood R.E., Obeid L.M., Ogretmen B., Hannun Y.A. De novo ceramide regulates the alternative splicing of caspase 9 and Bcl-x in A549 lung adenocarcinoma cells. Dependence on protein phosphatase-1 // J Biol Chem. - 2002. Vol. 277, № 15. P. 12587-12595.
63. Wang H., Maurer B.J., Reynolds C.P., Cabot M.C. N-(4-hydroxyphenyl)retinamide elevates ceramide in neuroblastoma cell lines by coordinate activation of serine palmitoyltransferase and ceramide synthase // Cancer Res. - 2001. Vol. 61, № 13. P. 5102-5105.
64.Del Pulgar T. et al. De novo synthesized ceramide is involved in cannabinoid-induced apoptosis // Biohem. J. 2002. Vol. 363. P. 183-188.
65. Xia P. Et al. An oncogenic role of sphingosine kinase // Curr. Biol. 2002. Vol. 10. P. 1527-1530.
66. Cuvillier O., Pirianov G., Kleuser B., Vanek P.G., Coso O.A., Gutkind S., Spiegel S. Suppression of ceramide-mediated programmed cell death by sphingosine-1-phosphate // Nature. -1996. Vol. 381, № 6585. P. 800-803.
67. Fransen R. et al. Nitric oxide induces degradation of neutral ceramidase in rat renal mesangeal cells and counterregulated by protein kinase C // J. Biol. Chem. 2002. Vol. 277. P. 46184-46190.
68. Van Brocklyn J.R., Young N., Roof R. Sphingosine 1-phosphate stimulates motility and invasiveness of human glioblastoma multiforme cells // Cancer Lett. 2003. Vol. 199. P. 53-60.
69. Nava V.E., Hobson J.P., Murthy S., Milstien S., Spiegel S. Sphingosine kinase type 1 promotes estrogen-dependent tumorigenesis of breast cancer MCF-7 cells // Exp Cell Res. -2002. Vol. 281, № 1. P. 115-127.
70. Pettus B.J., Bielawski J., Porcelli A.M., Reames D.L., Johnson K.R., Morrow J., Chalfant C.E., Obeid L.M., Hannun Y.A. The sphingosine kinase 1/sphingosine-1-phosphate pathway mediates COX-2 induction and PGE2 production in response to TNF-alpha // FASEB J. - 2003. Vol. 17, № 11. P. 1411-1421.
71. Sietsma H., Veldman R. J., Kok J.W. The involvement of sphingolipids in multidrug resistance // J. Membrane Biol. 2001. Vol. 181. P. 153-162.
72. Kok J.W., Sietsma H. Sphingolipid metabolism enzymes as targets for anti-cancer therapy // Current Drug Targets. 2004. Vol. 5. P. 375-382.
73. Ogretmen B., Hannun Y.A. Biologically active sphingolipids in cancer pathogenesis and treatment // Nat. Rev. Cancer. 2004. Vol. 4. P. 604-616.
74. Modrak D.E., Golg D.V., Goldenberg D.M. Sphingolipid targets in cancer therapy // Mol. Cancer Ther. 2006. Vol. 5. P. 200-208.
75. Reynolds C.P., Maurer B.J., Kolesnick R.N. Ceramide synthesis and metabolism as a target for cancer therapy // Cancer Lett. 2004. Vol. 206. P. 169-180.
76. Tiirikainen M.I., Elonen E., Syrjälä M.T., Jansson S.E., Krusius T. Flow cytometric analysis of glutathione-S-transferase-pi in acute leukemia // Leukemia. - 1994. Vol. 8, № 6. P. 978-984.
77. Friche E., Danks M.K., Schmidt C.A., Beck W.T. Decreased DNA topoisomerase II in daunorubicin-resistant Ehrlich ascites tumor cells // Cancer Res. 1991. Vol. 51, №16. P. 4213-4218.
78. Topcu Z. DNA topoisomerases as targets for anticancer drugs // J Clin Pharm Ther. 2001. Vol. 26, № 6. P. 405-416.
79. Yusuf R.Z., Duan Z., Lamendola D.E., Penson R.T., Seiden M.V. Paclitaxel resistance: molecular mechanisms and pharmacologic manipulation // Curr Cancer Drug Targets. 2003. Vol.3, №1. P. 1-19.
80. Los M., Burek C.J.,