Місце й значення полімеразно-ланцюгової реакції у визначенні резистентності збудника туберкульозу до фармакологічних засобів

Краткое описание

МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я УКРАЇНИ
ОДЕСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ

На правах рукопису

АНТОНЕНКО
Катерина Олексіївна

УДК 616-002.5-079.4:577.21:615.015.8

Місце й значення полімеразно-ланцюгової реакції у визначенні резистентності збудника туберкульозу до фармакологічних засобів

14.03.05 фармакологія

ДИСЕРТАЦІЯ
на здобуття наукового ступеня
кандидата біологічних наук

Науковий керівник:
Кресюн Валентин Йосипович,
доктор медичних наук, професор
з.д.н.т. України, чл.-кор. АМН України

Одеса

2009

ЗМІСТ

Перелік умовних позначень, символів, одиниць, скорочень і термінів....4
ВСТУП.........5
РОЗДІЛ 1. ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ...........10
1.1. Сучасний стан розповсюдженості туберкульозу на України і в
світі, сучасні методи фармакотерапії..................................10
1.2. Рівень та способи визначення медикаментозної резистентності
збудника туберкульозу..........................................................17
1.2.1 Поширеність медикаментозної резистентності....................17
1.2.2 Молекулярні механізми розвитку резистентності...............22
1.2.3 Методи діагностики медикаментозної резистентності........24
1.3. Розповсюдженість та значення родини Beijing в епідемії
туберкульозу.......................................................................................27
1.4 Сучасні молекулярно-генетичні можливості типірування
мікобактерій туберкульозу................................................................29
РОЗДІЛ 2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ.......34
2.1. Характеристика ретроспективних і проспективних методів
дослідження........................................................34
2.2. Бактеріологічні методи..........37
2.3. Молекулярно-генетичні методи, використані для вивчення
медикаментозної резистентності мікобактерій туберкульозу...38
2.4. Ідентифікації збудника туберкульозу за допомогою MIRU-VNTR
типірування.....44
РОЗДІЛ 3. РІВЕНЬ МЕДИКАМЕНТОЗНОЇ РЕЗИСТЕНТНОСТІ ЗБУДНИКА ТУБЕРКУЛЬОЗУ ДО ПРОТИТУБЕРКУЛЬОЗНИХ ПРЕПАРАТІВ В ОДЕСЬКОМУ РЕГІОНІ У 2006 р. .....47
3.1. Дані про медикаментозну резистентність, отримані
культуральним методом............47
3.2. Визначення медикаментозної резистентності мікобактерії
туберкульозу методом мультіплексної алель-специфічної ПЛР...65
3.2.1. Визначення мутацій гена katG ................................................65
3.2.2. Визначення мутацій гена rpoB.................................................67
3.2.3. Визначення мутацій гена embB................................................70
3.3. Вивчення можливого впливу факторів ризику на виникнення
мутацій в генах katG, rpoB, embB у збудника туберкульозу..........73
3.4. Співставлення поширеності мутацій в генах rpoB, katG, embB
збудника туберкульозу і особливосей перебігу туберкульозного
процесу................................................................................................80
3.5. Співставлення поширеності мутацій в генах rpoB, katG, embB
збудника туберкульозу і належності до родини Beijing................96
РОЗДІЛ 4. РЕЗУЛЬТАТИ ГЕНОТИПУВАННЯ ЗБУДНИКА ТУБЕРКУЛЬОЗУ В ОДЕСЬКОМУ РЕГІОНІ У 2006 р.........102
4.1. Профілі збудника туберкульозу, отримані за допомогою VNTR-генотипування .102
4.2. Поширеність медикаментозної резистентності серед ізолятів
збудника туберкульозу з різним профілем...................................116
4.3. Профілі ізолятів збудника туберкульозу і епідеміологія
туберкульозного процесу................................................................126
РОЗДІЛ 5. АНАЛІЗ ТА УЗАГАЛЬНЕННЯ ОТРИМАНИХ РЕЗУЛЬТАТІВ ..129
5.1. Аналіз рівня медикаментозної резистентності та мутацій генів rpoB, katG, embB та порівняння з даними попередніх досліджень........................................................................................129
5.2. Аналіз даних генотипування збудника туберкульозу та порівняння з даними попередніх досліджень........................................................................................138
ВИСНОВКИ....144
СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ...................146

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ ПОЗНАЧЕНЬ, СИМВОЛІВ, ОДИНИЦЬ,
СКОРОЧЕНЬ І ТЕРМІНІВ

ВДТБ вперше діагностований туберкульоз
ВІЛ вірус імунодефіциту людини
ВООЗ всесвітня організація охорони здоров’я
МАС-ПЛР мультиплексна алель-специфічна ПЛР
МБТ мікобактерія туберкульозу
ООКПТЛ - Одеська обласна клінічна протитуберкульозна лікарня
П Н пара нуклеотидів
ПЛР полімеразно-ланцюгова реакція
ПТП протитуберкульозні препарати
РТБ рецидивуючий туберкульоз
ТБ - туберкульоз
ХТБ хронічний туберкульоз
DOTS (Directly Observed Treatment Short course) - безпосереднє контрольоване лікування короткими курсами.
ETR (Exact Tandem Repeats) точні тандемні повтори
MIRU (Mycobacterium Interspersed Repetitive Units) вставлені одиниці, що повторюються, мікобактерій
VNTR (Variable Number Tandem Repeats) варіативна кількість тандемних повторів

ВСТУП

Актуальність теми. Протягом останніх 50 років арсенал протитуберкульозних препаратів, на жаль, істотно не змінився [1]. Водночас в Україні спостерігається швидкий ріст поширеності туберкульозної інфекції, однією з причин якого є високий рівень медикаментозної резистентності збудника туберкульозу [2]. У світі частота мультирезистентного туберкульозу збільшилась з 29,0 до 39,0 %, туберкульозу із розширеною резистентністю — з 5,0 до 7,0 %, що є однією з головних причин зниження ефективності фармакотерапії хворих на туберкульоз [3]. Головними методами визначення медикаментозної резистентності мікобактерій туберкульозу є метод абсолютних концентрацій і метод пропорцій [4]. Однак результати дослідження медикаментозної резистентності культуральним методом не завжди є об’єктивними і за часом займають 2-2,5 міс після взяття матеріалу. Отже, цей метод визначення медикаментозної резистентності не забезпечує хворому швидкого і коректного лікування [5]. Тому інші методи, зокрема молекулярно-генетичні методи визначення резистентності, є досить привабливими. Протягом останніх двадцяти років дослідження різних ділянок ДНК збудника туберкульозу виявило мутації, що викликають резистентність до основних протитуберкульозних препаратів [6, 7]. В літературі описана методика визначення мутантних послідовностей в генах rpoB, katG і embB, виникнення яких спричиняє медикаментозну резистентність до рифампіцину, ізоніазиду та етамбутолу відповідно [8-10]. Головними перевагами молекулярно-генетичних методів є їхня висока чутливість і швидкість отримання результатів, проте молекулярні методи майже не застосовуються на Україні [11-13].
Для моніторингу процесу поширення туберкульозної інфекції в розвинутих країнах впроваджено метод генотипування збудника туберкульозу [14, 15]. Застосування генотипування є визначальним у клініко-епідеміологічних дослідженнях, коли виникає необхідність вирішити питання медикаментозної резистентності, тобто визначити або це є результатом неефективного лікування (набута резистентність), або це результат інфікування новим штамом мікобактерії туберкульозу. Однак недоліком існуючих методів генотипування є необхідність високотехнологічного обладнання, дорогих реактивів тощо [16-18]. Тому в Україні були проведені лише кілька робіт з генотипування M.tuberculosis [19]. Таким чином, дана робота присвячена дослідженню стану медикаментозної резистентності на прикладі Одеського регіону та вивченню інформативності молекулярних методів визначення медикаментозної резистентності і генотипування медикаментозно-резистентних штамів збудника туберкульозу з метою підвищення ефективності фармакотерапії хворих на туберкульоз.
Зв'язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертаційна робота є фрагментом комплексної науково-дослідної роботи кафедр загальної і клінічної фармакології та кафедри клінічної імунології, генетики і медичної біології Одеського державного медичного університету (ОДМУ), затвердженої МОЗ України «Імуногенетичні, епідеміологічні, фармакогенетичні та клініко-мікробіологічні аспекти взаємовідносин у системі «паразит-хозяїн» при туберкульозній інфекції в умовах зростання захворюваності на туберкульоз» (№ держреєстрації 0104U010501). Дисертант є співвиконавцем зазначеної теми.
Мета і задачі дослідження. Метою роботи є визначення рівня медикаментозної резистентності до протитуберкульозних препаратів і вдосконалення методів її детекції та генотипування медикаментозно резистентних штамів мікобактерій туберкульозу за допомогою полімеразно-ланцюгової реакції.
Задачі дослідження:
1. Визначити рівень первинної і набутої резистентності мікобактерій до протитуберкульозних препаратів І і ІІ рядів в Одеському регіоні.
2. З’ясувати рівень мутацій в генах rpoB, katG і embB, що відповідають за резистентність мікобактерій туберкульозу до рифампіцину, ізоніазиду і етамбутолу, та можливість їх визначення за допомогою мультиплексної алель-специфічної полімеразно-ланцюгової реакції.
3. Проаналізувати можливу кореляцію між мутаціями в генах rpoB, katG і embB, що відповідають за медикаментозну резистентність мікобактерій туберкульозу, з епідеміологічними факторами, клінічним перебІм захворювання і успішністю фармакотерапії.
4. Вивчити дискретну здатність детекції локусів MIRU10-MIRU26-MIRU31-MIRU39-MIRU40-ETR A для генотипування резистентних форм збудника туберкульозу.
5. Виявити за даними локусів MIRU10-MIRU26-MIRU31-MIRU39-MIRU40-ETR A найбільш поширені кластери, групи і родини штамів збудника туберкульозу родини Beijing і групи non-Beijing, що характеризуються високим рівнем резистентності до ізоніазиду і рифампіцину.
Об'єкт дослідження медикаментозна резистентність збудника туберкульозу до протитуберкульозних препаратів І і ІІ рядів.
Предмет дослідження параметри і шляхи визначення медикаментозної резистентності до протитуберкульозних препаратів за допомогою полімеразно-ланцюгової реакції.
Методи дослідження фармакогенетичні, молекулярно-біологічні, мікробіологічні, статистичні.
Наукова новизна отриманих результатів. Вперше в Україні за допомогою мультиплексної алель-специфічної полімеразно-ланцюгової реакції проведено детекцію мутацій в генах rpoB, katG і embB, що обумовлюють резистентність мікобактерій туберкульозу до рифампіцину, ізоніазиду та етамбутолу відповідно. Встановлено що, найбільша специфічність спостерігалась при визначенні мутації в гені rpoB, а найбільша чутливість при визначенні мутації в гені katG.
Вперше проведено дослідження зв’язку між мутаціями в генах rpoB, katG і embB, що обумовлюють медикаментозну резистентність мікобактерій туберкульозу, з епідеміологічними (вживання наркотичних речовин, перебування в місцях позбавлення волі, попередній контакт з хворими на туберкульоз) та клінічними особливостями перебігу туберкульозного процесу (форма туберкульозу, стан хворого на момент виписки зі стаціонару).
Вперше вивчено дискретну здатність визначення 6-ти локусів (MIRU10-MIRU26-MIRU31-MIRU39-MIRU40-ETR A) для генотипування збудника туберкульозу. Вперше за даними 6-ти локусів (MIRU10-MIRU26-MIRU31-MIRU39-MIRU40-ETR A) наведено і проаналізовано найбільш поширені кластери збудника туберкульозу, в тому числі і кластери, що характеризувались високим рівнем медикаментозної резистентності.
Практична значимість роботи. Наведені дані щодо рівня резистентності збудника туберкульозу до протитуберкульозних препаратів в Одеському регіоні у 2006 році і динаміки медикаментозної резистентності допомагають у підборі найбільш ефективної фармакотерапії хворих на туберкульоз. Отримані дані щодо ефективності використання полімеразно-ланцюгової реакції у визначенні резистентності мікобактерій туберкульозу до антимікробних засобів в Україні дозволяють розширити спектр застосування лікарських препаратів при хіміотерапії хворих на туберкульоз. Запропоновано удосконалення реакційної суміші для виявлення мутації в гені katG, що покращує якість результатів визначення резистентності збудника туберкульозу до ізоніазиду і знайшло відображення у отриманому патенті України № 29211 від 10.01.2008р.
Результати роботи впроваджено у наукову роботу відділу патофізіології Інституту фармакології та токсикології АМН України, навчальний процес кафедр фармакології та клінічної фармакології Вінницького національного медичного університету ім. М. І. Пирогова, Луганського державного медичного університету, Дніпропетровської державної медичної академії, кафедр загальної та клінічної фармакології, фтизіатрії, клінічної імунології, генетики і медичної біології Одеського державного медичного університету
Особистий внесок здобувача. Здобувач самостійно вивчив і узагальнив сучасний стан проблеми за даними інформаційних джерел, сформулював мету і задачі дослідження, здійснив планування.* Самостійно освоїв методи експе- риментальних досліджень і виконав запланований обсяг експериментів. Зробив узагальнення і провів аналіз отриманих результатів, опублікував і апробував
* Автор висловлює глибоку вдячність за консультативну допомогу науковому працівнику В.В.Ніколаєвському (National Mycobacterium Reference Unit, London, UK)
основні дані, написав і оформив дисертаційну роботу.
Апробація результатів дисертації. Основні положення дисертаційної роботи були апробовані на науково-практичних конференціях молодих вчених з міжнародною участю „Вчені майбутнього” (Одеса, 2005, 2006); ХII міжнародній науково-практичній конференції «Спортивна медицина, лікувальна фізкультура та валеологія 2006» (Одеса, 2006); науковій конференції з міжнародною участю Національній фармакології - 35 років” (Кишинів, Молдова, 2006); ІІ міжнародній науково-практичній конференції „Розвиток наукових досліджень’2006” (Полтава, 2006); конференції, приуроченій до Дня Науки „Сучасні проблеми епідеміології, мікробіології та гігієни” (Львів, 2007); ІІІ з’їзді фармакологів Росії «Фармакология — практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007); республіканській науково-практичній конференції „Лікування та реабілітація у загальній практиці-сімейній медицині” (Одеса, 2007), науково-практичній конференції з міжнародною участю «Акту­альні проблеми фармакології» (Вінниця, 2007), 38-ій Всесвітній конференції з захворювань легень (Кейптаун, Південна Африка, 2007); науково-практичній конференції з міжнародною участю «Молодь медицині майбутнього» (Одеса, 2008).
Публікації. За темою дисертації опубліковано 17 наукових праць, з яких 5 статей в наукових журналах, рекомендованих ВАК України, 1 патент України, 11 тез у міжнародних та вітчизняних виданнях.
Структура та обсяг дисертації. Дисертація викладена на 167 сторінках комп’ютерного тексту, складається зі вступу, огляду літератури, матеріалів і методів дослідження, 2 розділів власних досліджень, аналізу та узагальнення результатів, висновків, списку використаної літератури. Робота ілюстрована 44 таблицями і 32 рисунками. Бібліографічний покажчик включає 182 джерела, з них 61 кирилицею.

Список литературы

ВИСНОВКИ

У дисертації наведено нове вирішення актуальної проблеми фармакології підвищення ефективності фармакотерапії хворих на туберкульозу, яке полягає в обґрунтуванні застосування полімеразно-ланцюгової реакції для відстеження поширеності медикаментозно резистентних штамів збудника туберкульозу. Обґрунтовано та впроваджено експрес-метод визначення мутацій в генотипі збудника туберкульозу як маркер медикаментозної резистентності та прогностичний критерій ефективності лікування туберкульозу.
1. В Одеському регіоні в 2006 р. найнижчий рівень первинної резистентності до протитуберкульозних препаратів І ряду був у піразинаміду - 22,2 %, а найвищим у стрептоміцину і рифампіцину 59,3 і 61,1 % відповідно; мультирезистентність виявлялась у 22,2 %. Найнижчий рівень вторинної резистентності до препаратів І ряду був зареєстрована також для піразинаміду - 42,9 %, а найвищий - у рифампіцину 80,6 %; мультирезистентність складала 64,1 %. Рівень первинної резистентності до протитуберкульозних препаратів ІІ ряду був найвищим у пефлоксацину, етіонаміду і амікацину і перебував у діапазоні 66,7-76,5 %. Найнижчими показники первинної резистентності були до канаміцину, ПАСК, ломефлоксацину, левофлоксацину і офлоксацину від 0 до 9,8 %, що підтверджує резервну роль цих фармакологічних препаратів.
2. Метод мультиплексної алель-специфічної ПЛР, що застосовувався, виявив найбільшу специфічність при визначенні мутації в гені rpoB, що досягала майже 93,8 %, і найбільшу чутливість при визначенні мутації в гені katG, що дорівнювала 87,5 %. Одержані результати підтверджують можливість застосування цих методів для експрес-діагностики медикаментозної резистентності збудника туберкульозу до ізоніазиду і рифампіцину. Поширеність мутацій в гені katG, rpoB, і embB, що асоціюються з резистентністю M.tuberculosis до ізоніазиду, рифампіцину та етамбутолу, в Одеському регіоні складала 54,2, 44,9 і 15,0 % відповідно.
3. Мутації в генах katG і rpoB, що обумовлюють резистентність збудника туберкульозу до ізоніазиду і рифампіцину, спостерігались частіше у хворих, які раніше перебували в місцях позбавлення волі, або раніше вже отримували протитуберкульозну терапію, що свідчить про значне поширення медикаментозно резистентних штамів в пеніцитарних закладах та розвиток резистентності під час протитуберкульозної терапії. Наявність цих мутацій асоціювалась з меншою ефективністю протитуберкульозної хіміотерапії, що клінічно проявлялось у гальмуванні процесів розсмоктування і рубцювання осередків у легенях, збереженні бактеріовиділення. Обґрунтовано доцільність та доведено важливість визначення мутацій в генах katG і rpoB, як прогностичного критерію успішності лікування туберкульозу.
4. Генотипування збудника туберкульозу з 6-ма локусами виявило високу дискретну здатність цього методу. Було виявлено штами родини Beijing, а також штами з груп LAM, URAL, що відрізнялись високим рівнем медикаментозної резистентності. Були проведено генотипування штамів збудника туберкульозу з дуже високим рівнем резистентності до ізоніазиду і рифампіцину, носії яких мали попередній туберкульозний контакт, тобто ці ізоляти мали особливе значне у поширенні медикаментозно резистентних штамів збудника туберкульозу серед населення Одеського регіону.
5. За результатами визначення локусів MIRU10-MIRU26-MIRU31-MIRU39-MIRU40-ETR A серед ізолятів родини Beijing і групи non-Beijing були виявлені такі кластери, що мали високий рівень мутацій генів katG і rpoB, які обумовлювали резистентність до ізоніазиду та рифампіцину відповідно. Зокрема, обидві мутації були присутні у кластерів 375344, 385334, 712234.
6. Отримані результати підтвердили актуальність постійного моніторингу рівня медикаментозної резистентності збудника туберкульозу, що дозволить покращити ефективність застосування протитуберкульозних препаратів .

список ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ

1. 125 years after Robert Koch's discovery of the tubercle bacillus: the new XDR-TB threat. Is "science" enough to tackle the epidemic? / G. B. Migliori, R. Loddenkemper, F. Blasi [et al.] // Eur. Respir. J. — 2007. — № 29. — P. 423427.
2. Москаленко В. Ф. Поширеність туберкульозу та сучасні шляхи боротьби з ним в Україні і світі / В. Ф. Москаленко, Т. С. Грузєва // Науковий вісник Національного медичного університету ім. О.О.Богомольця. 2006. - № 1. С. 57-65.
3. Туберкульоз із розширеною резистентністю до протитуберкульозних препаратів: ситуація в Україні / В. М. Петренко, С. О. Черенько, Н. А. Литвиненко [та ін.] // Актуальні питання фтизіатрії. 2007. - № 3. С. 35-39.
4. Наказ МОЗ України № 45 від 06.02.2002 «Про затвердження Інструкції з бактеріологічної діагностики туберкульозної інфекції»: зб. нормат. док. з охорони здоров’я. / складена Ю. І. Фещенко, О. А. Журило, М. Т. Клименко [та ін.] // Київ, 2002. №2. С. 63-111. (Нормативні директивні правові документи).
5. Ngoc Lan N. T. Rapid culture methods and their impact on TB control / N. T. Ngoc Lan // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 16.
6. Drug resistance profile of M.tuberucolosis strains isolated in cetral Russia / I. Shemyakin, A. Nizova, N. Maiskaya [et al.] The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 173.
7. Huong N. Experience and results of routine MDR surveillance in Vietnam / N. Huong, B. Duong, N. Sy // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 35.
8. Detection of Isoniazid-Resistant Mycobacterium tuberculosis Strains by a Multiplex Allele-Specific PCR Assay Targeting katG Codon 315 Variation / I. Mokrousov, T. Otten, M. Filipenko [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. 2002. - Vol. 40, № 7. - Р. 25092512.
9. Detection of Ethambutol-Resistant Mycobacterium tuberculosis Strains by Multiplex Allele-Specific PCR Assay Targeting embB306 Mutations / I. Mokrousov, O. Narvskaya, E. Limeschenko [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. 2002. - Vol. 40, № 5. - P. 16171720. (15)
10. Allele-Specific rpoB PCR Assays for Detection of Rifampin-Resistant Mycobacterium tuberculosis in Sputum Smears / I. Mokrousov, T. Otten, B. Vyshnevskiy [et al.] // Antimicrobial agents and chemotherapy. 2003. - Vol. 47, № 7. - P. 22312235.
11. Kozłowska I. Evaluation of humoral immune response against mycobacterial antigens in bronchoalveolar lavage fluid from patients with pulmonary tuberculosis confirmed by genetic and culture methods / I. Kozłowska, M. Filewska, A. Roży // Pneumonol. Alergol. Pol. 2007. Vol. 75, № 4. P. 355-362.
12. The clinical impact of nucleic acid amplification tests on the diagnosis and management of tuberculosis in a British Teaching Hospital / M. Taegtmeyer, N. J. Beeching, J. Scott [et al.] // Thorax. 2007. - Dec 5 [Epub ahead of print]
13. Hillemann D. Possibilities and limits of molecular assays / D. Hillemann, E. Richter, S. Rusch-Gerdes // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 45.
14. Cavuşoğlu C. Genotyping of rifampin-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates by mycobacterial interspersed repetitive unit-variable number tandem repeat (MIRU-VNTR) analysis / C. Cavuşoğlu, E. Karataş, I. Söyler // Mikrobiyol. Bul. 2007. Vol. 41, № 3. Р. 385-393.
15. Evaluation of the new advanced 15-loci MIRU-VNTR genotyping tool in Mycobacterium tuberculosis molecular epidemiology studies [Електронний документ] / N. Alonso-Rodríguez, M. Martínez-Lirola, M. Herránz [et al.] // BMC Microbiol. 2008. Режим доступу: http://www.biomedcentral.com/1471-2180/8/34
16. Молекулярно-генетические механизмы туберкулезной инфекции / [Ю. И. Бажора, В. И. Кресюн, Ю. И. Фещенко и др.] Одесса: Одесский государственный медуниверситет, 2005. 259 с.
17. Targeted hybridization of IS6110 fingerprints identifies the W-Beijing Mycobacterium tuberculosis strains among clinical isolates / N. Kurepina, E. Likhoshvay, E. Shashkina [et al.] // J. Clin. Microbiol. 2005. Vol. 43, № 5. Р. 2148-2154.
18. Optimized molecular resolution of cross-contamination alerts in clinical mycobacteriology laboratories [Електронний документ] / A. Martín, M. Herranz, M. M. Lirola [et al.] // BMC Microbiol. 2008. Режим доступу: http://www.biomedcentral.com/1471-2180/8/30.
19. Molecular epidemiology and prevalence of mutations conferring rifampicin and isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis strains from the southern Ukraine / V. V. Nikolayevskyy, T. J. Brown, Y. I. Bazhora [et al.] // Clin. Microbiol. Infect. 2007. Vol. 13, № 2. P. 129-138.
20. Від ефективного контролю за туберкульозом залежить національна безпека [Електронний ресурс] // Прес-реліз МОЗ України від 24.03.2005 Режим доступу до прес-релізу: http://www.moz.gov.ua/ua/main/press/?docID=3027.
21. Епідеміологічна ситуація з туберкульозу в Україні за 2004 рік (доповідь на засіданні Вченій раді Інституту фтизіатрії і пульмонології ім. Ф. Г. Яновського АМН України 27 вересня 2005 року) [Електронний ресурс] / Н. О. Лаптєва // Інституту фтизіатрії і пульмонології ім. Ф. Г. Яновського АМН України. Режим доступу до доповіді: http://www.ifp.kiev.ua/doc/staff/tubukr2004.pdf.
22. Показники здоров’я населення та діяльності закладів охорони здоров’я Одеської області за 2003-2004 роки Одеса, 2005. 227 с.
23. Evolution of the epidemiological characteristics of tuberculosis in Navarra (1994-2003) / J. Castilla, M. Urtiaga, J. Hueto [et al.] // An Sist Sanit Navar. 2005. Vol. 28, № 2. Р. 237-245.
24. Стан здоров’я дітей та підлітків в Україні та надання їм медичної допомоги за 2004 рік. К.: МОЗ України, ЦМС, КМАПО ім. П.Л. Шупика, 2005. 199 с.
25. Мельник В. П. Інфікування студентів м. Києва мікобактеріями туберкульозу / В. П. Мельник, Г. Я. Солонинка, О. В. Панасюк // Український пульмонологічний журнал. 2005. - № 3. С. 11-15.
26. Фещенко Ю. І. Медичні аспекти боротьби з туберкульозом / Ю. І. Фещенко, В. М. Мельник // Актуальні питання фтизіатрії. 2005. - № 2. С. 5-8.
27. Концепція контролювання та поліпшення ситуації з туберкульозу медичних працівників за сучасної епідемії туберкульозу / Ю. І. Фещенко, В. М. Мельник, Н. О. Лаптєва [та ін.] // Актуальні питання фтизіатрії. 2005. - № 4. С. 5-8.
28. Tuberculosis and HIV infection: detection, follow-up, treatment: Moscow data / No authors listed // Probl. Tuberk. Bolezn. Legk. 2007. № 10. P. 31-36.
29. Говор О. В. Заболеваемость туберкулезом в Приморском крае / О. В. Говор // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии 2004. - № 4. С. 65-67.
30. Петрухина М. И. Эпидемиологический надзор за туберкулезом в современных условиях / М. И. Петрухина, Е. В. Русакова, Г. В. Ющенко // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии 2003. - № 5. С. 93-96.
31. Singh S. High rate of extensively drug-resistant tuberculosis in Indian AIDS patients / S. Singh, M. M. Sankar, K. // AIDS 2007. Vol. 21, № 17. P. 2345-2347.
32. Tuberculosis and HIV infection-main diagnostic and therapeutic problems / M. M. Dabrowska, J. Pogorzelska, A. Parfieniuk [et al.] // Pol. Merkur. Lekarski. 2007. Vol. 135. P. 212-214.
33. Фещенко Ю. І. Стан і проблеми протитуберкульозної допомоги населенню України та шляхи її поліпшення / Ю. І. Фещенко, В. М. Мельник // Український пульмонологічний журнал. 2004. - № 2. С. 6-11.
34. Panickar J. R. Treatment failure in tuberculosis / J. R. Panickar, W. Hoskyns // Eur. Respir. J. — 2007. — № 29. — P. 561564.
35. Обзор событий в ВОЗ за год / ВОЗ, Женева. 2004. 25 с.
36. Challenges of MDR-TB control in Archangelsk Russian Federation penitentiary system / A. Mariandyshev, N. Nizovtseva, V. Panasik [et al.] // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 5.
37. Results of a DOTS-Plus project in Orel Oblast, Russian Federation, November 2002-December 2006 / B. Y. Kazenny, T. M. Khorosheva, E. V. Kiryanova [et al.] // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 174
38. WHO-TB control pilot projects in the Russian Federation (USAID funded): achievements and challenges / A. Korobitsyn, I. Danilova, L. Rybka [et al.] // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 206.
39. Bhutani M. A population-based study of relapsed tuberculosis and post-treatment follow-up / M. Bhutani, J. Bretton, R. Long // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 58.
40. Наказ МОЗ України № 384 від 09.06.2006 р. "Про затвердження протоколу надання медичної допомоги хворим на туберкульоз"» // Київ, 2006. 87 с. - (Нормативні директивні правові документи).
41. Дискусійні питання DOTS-стратегії [Електронний ресурс] / В. М. Петренко // Інститут фтизіатрії і пульмонології ім. Ф.Г.Яновського - Режим доступу до документа: http://www.ifp.kiev.ua/doc/staff/discussion_DOTS.htm.
42. Протокол по впровадженню ДОТС-стратегії в Україні [Електронний ресурс] / В. М. Петренко // Інститут фтизіатрії і пульмонології ім. Ф.Г.Яновського - 49 c. - Режим доступу до документа: http://www.ifp.kiev.ua/doc/staff/protokolDOTS.pdf
43. Туберкульоз в Україні / Аналітично-статистичний довідник за 1996 — 2006 роки: МОЗ України, Центр медичної статистики МОЗ України // Київ, 2007. 60 с.
44. Информационный бюллетень ко Всемирному дню борьбы с туберкулезом в 2008 году Україні [Електронний ресурс] // Інститут фтизіатрії і пульмонології ім. Ф.Г.Яновського Київ, 2008. Режим доступу до документа: http://www.ifp.kiev.ua/doc/news/daytub2006.htm
45. Gamazina K. Strategies for advancing evidence-based TB control practices in a post-Soviet country / K. Gamazina, A. Tsarenko, T. Ivanenko // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 205.
46. Выявление микобактерий туберкулёза различными методами / Е. М. Скрягина, О. М. Залуцкая, А. Рот [и др.] // Пробл. туберкулёза. 2001. №3. С. 56-58.
47. Extensively drug-resistant tuberculosis (XDR-TB): recommendations for prevention and control / Weekly epidemiological record. — 2006. — Vol. 81, № 45. — P. 430432.
48. Стандарти діагностики і лікування туберкульозу: Метод. рекомендації / Академія медичних наук України, МОЗ України, Державний департамент України з питань виконання покарань, Інститут фтизіатрії і пульмонології ім. Ф.Г. Яновського АМН України. К., 2004. 63 с.
49. Современные методы лечения химиорезистентного туберкулеза (научна доповідь на нараді в МОЗ України 08.11.2004) [Електронний ресурс] - Петренко В. М., Черенько С. А. // Інститут фтизіатрії і пульмонології ім. Ф.Г. Яновського АМН України. Режиму доступу до доповіді: http://www.ifp.kiev.ua/doc/staff/staff.htm.
50. Okada M. Novel vaccines against M. tuberculosis / M. Okada // Kekkaku 2006. Vol. 81, № 12. P. 745-751.
51. Tomioka H. Development of antituberculous drugs: current status and future prospects / H. Tomioka, K. Namba // Kekkaku 2006. Vol. 81, № 12. P. 753-774.
52. Самойлова А. Г. Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза актуальная проблема фтизиатрии (обзор литературы) / А. Г. Самойлова, А. О. Марьяндышев // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2005. - № 7. С. 3-9.
53. Tuberculosis MDR-TB & XDR-TB the 2008 report / World Health Organization. Geneva, 2008. 2 p.
54. Drug resistance in Mycobacterium tuberculosis strains isolated from sputum samples from symptomatic outpatients: Complexo de Manguinhos, Rio de Janeiro, Brazil / J. M. Mendes, M. C. Lourenço, R. M. Ferreira [et al.] // J. Bras. Pneumol. 2007. Vol. 33, № 5. Р. 579-582.
55. Анализ факторов риска возникновения лекарственной устойчивости у больных туберкулёзом гражданского и пенитенциарного секторов в Самарской области России / Я.М. Балабанова, М. Ради, К. Грэм [и др.] // Проблемы туберкулёза и болезни лёгких. 2005. №5. С. 25-31.
56. Фещенко Ю. І. Стан і проблеми протитуберкульозної допомоги населенню України та шляхи її поліпшення / Ю. І. Фещенко, В. М. Мельник // Укр. пульмонолог. журнал. 2004. № 2. С. 6-11.
57. WHO. Emergence of Mycobacterium tuberculosis with Extensive Resistance to Second-Line Drugs. Worldwide, 2000 — 2004 / A. Wright, G. Bai, L. Barrera [et al.] // Weekly. — 2006. — Vol. 55, № 11. — P. 301305.
58. Extensively drug-resistant (XDR) tuberculosis in Japan / S. Mitarai, H. Yamada, K. Otomo [et al.] // The International Journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 61.
59. Multidrug resistant tuberculosis in Lisbon / R. Macedo, J. Perdigão, I. Brum [et al.] // Rev. Port. Pneumol. 2007. - Vol. 13, № 6 (Suppl). P. 20-21.
60. Anti-tuberculosis drug resistance in the world / Fourth Global Report The WHO/IUATLD Global Project on Anti-tuberculosis Drug Resistance Surveillance 2002-2007. Geneva, 2007. - 112 p.
61. Increasing outpatient fluoroquinolone exposure before tuberculosis diagnosis and impact on culture-negative disease / P. D. Gaba, C. Haley, M. R. Griffin [et al.] // Arch. Intern. Med. 2007. Vol. 167, № 21. P. 2317-2322.
62. Ginsburg A. S. Fluoroquinolone resistance in patients with newly diagnosed tuberculosis / A. S. Ginsburg, N. Hooper, N. Parrish [et al.] // Clin. Infect Dis. 2003. Vol. 37, № 11. P. 1448-1452.
63. Trends in fluoroquinolone resistance of Mycobacterium tuberculosis complex in a Taiwanese medical centre: 1995-2003 / T. S. Huang, C. M. Kunin, L. S. Shin-Jung [et al.] // J. Antimicrob. Chemother. 2005. Vol. 56, № 6. Р. 1058-1062.
64. Wang J. Y. Empirical treatment with a fluoroquinolone delays the treatment for tuberculosis and is associated with a poor prognosis in endemic areas / J. Y. Wang, P. R. Hsueh, I. S. Jan [et al.] // Thorax 2006. Vol. 61, № 10. P. 903-908.
65. Characteristics and treatment outcomes of INH-resistant or RFP-resistant tuberculosis / W. Saito, N. Nagayama, M. Miyamoto [et al.] // Kekkaku 2003. Vol. 78, № 10. Р. 611-617.
66. Holtz T. Challenges of XDR-TB management in high-burden HIV settings / T. Holtz, J. P. Cegielski // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 26.
67. Association between multidrug-resistant tuberculosis and HIV infection in Donetsk Oblast, Ukraine / S. M. Lyepshina, Y. V. Yann, I. V. Dubrovina [et al.] // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 108.
68. Ткач О. А. Чутливість мікобактерій туберкульозу до сучасних антимікобактеріальних препаратів у хворих на деструктивний туберкульоз легень / О. А. Ткач // Укр. пульмонол. журн. — 2004. — № 4. — С. 4246.
69. Информационный бюллетень ко Всемирному дню борьбы с туберкулёзом в 2006 году [Електронний ресурс] / Інститут фтизіатрії і пульмонології ім. Ф.Г. Яновського АМН України. Режим доступу до документа: http://www.ifp.kiev.ua/doc/news/daytub2006.htm.
70. Епідеміологія, діагностика та лікування хіміорезистентного туберкульозу органів дихання / Ю. І. Фещенко, В. М. Петренко, С. О. Черенько [та ін.] // Укр. пульмонол. журнал. 2002. №4. С. 5-12.
71. Extreme drug-resistance (XDR) tuberculosis in Vladimir and Orel Oblasts, Russia / T. R. Somova, L. V. Tsaplina, G. V. Volchenkov [et al.] // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 215.
72. Erokhin V. Monitoring of Mycobacerium tuberculosis multidrug resistance in some regions of the Russian Federation / V. Erokhin, V. Golyshevskaya, E. // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 171.
73. Development of extreme drug resistance in multidrug-resistant tuberculosis patients / C. Hewison, V. Sizaire, S. Kalon [et al.] // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 223.
74. Sture I. S. Treatment outcome among patients with extensively drug-resistant tuberculosis, Latvia, 2000-2004 / I. S. Sture // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 128.
75. Ретроспективне дослідження первинної медикаментозної резистентності M. tuberculosis у вперше виявлених хворих на туберкульоз легень по м. Києву за 20022003 рр. / О. А. Журило, А. І. Барбова, М. Т. Клименко [та ін.] // Актуальні питання фтизіатрії. 2004. - № 3. С. 8-10.
76. Медикаментозна резистентність мікобактерій туберкульозу в Одеській області України та фактори ризику розповсюдження резистентності туберкульозу: дані проспективного дворічного дослідження / О. К. Асмолов, В. В. Ніколаєвський, В. Й. Кресюн [та ін.] // Укр. пульмонол. журн. — 2005. — № 2. — С. 3943.
77. Мутация Ser315Thr гена katG основная причина устойчивости к изониазиду у изолятов Mycobacterium tuberculosis, распространенных в Новосибирской и Кемеровской областях / Е. Н. Воронина, М. А. Вихрова, Е. А. Храпов [и др.] // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология 2004. - № 3. С. 8-11.
78. Mutations responsible for Mycobacterium tuberculosis drug resistance in Morocco / I. Chaoui, R. Sabouni, A. Jordaan [et al.] // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 265.
79. Prevalence of katG Ser315 substitution and rpoB mutations in isoniazid-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates from Brazil / C. C. Höfling, E. M. Pavan, C. M. Giampaglia [et al.] // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. 2005. Vol. 9, № 1. P. 87-93.
80. Almaz Aldashev A. The mutations are predominant in multidrug-resistance Mycobacterium tuberculosis strategy / A. Almaz Aldashev, K. Jumab // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 161.
81. Zakerbostanabad S. Mutations in codons 526-531 of rpo B are associated with high-level resistance to rifampicine in MTB in Belarus / S. Zakerbostanabad, A. Bahrmand, L. P. Titov // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 166.
82. Isakova Zh. T. Analysis of mutations of multidrug-resistant M. tuberculosis strains in patients with tuberculosis in the Kyrghyz Republic / Zh. T. Isakova, Z. K. Goncharova, E. U. Iusupova [et al.] // Probl. Tuberk. Bolezn. Legk. 2007. - № 4. P. 17-21.
83. Jiao W. W. Molecular characteristics of rifampin and isoniazid resistant Mycobacterium tuberculosis strains from Beijing, China / W. W. Jiao, I. Mokrousov, G. Z. Sun // Chin Med J (Engl). 2007. Vol. 120, № 9. P. 814-819.
84. Drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis to fluoroquinolones: first experience with a quality control panel in the Nordic-Baltic collaboration / I. S. Johansen, A. R. Larsen, P. Sandven [et al.] // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. 2003. Vol. 7, № 9. Р. 899-902.
85. Modern laboratory diagnosis of tuberculosis / F. A. Drobniewski, M. Caws, A. Gibson [et al.] // Lancet Infect. Dis. 2003. Vol. 3, № 3. P. 141-147.
86. Katoch V.M. Newer diagnostic techniques for tuberculosis / V.M. Katoch // Indian. J. Med. Res. 2004. - № 120. P. 418-428.
87. Krunner A. Liquid culture techniques for DST: gold standard for first- and second-line drugs? / A. Krunner // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 44.
88. Comparative evaluation of the BACTEC MGIT 960 system in the Gambia / J. K. Otu, M. Antonio, R. A. Adegbola [et al.] // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 70-71.
89. Albert H. Phage-based assays for detecting rifampin-resistant / H. Albert // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 44.
90. Palomino J. C. Nitrate reductase and colorimetric indicator assays / J. C. Palomino // The International journal of tuberculosis and lung diseases. 2007. Vol. 11, № 11 (suppl. 1). P. 44.
91. Использование полимеразно-цепной реакции для диагностики туберкулеза у детей с патологией бронхолегочной системы / Л. В. Клочкова, О. И. Король, И. А. Путинцева [и др.] // Проблемы туберкулеза и болезней легких 2004. - № 6. С. 49-51.
92. European Database Health for All, European World Health Organization Bureau [Електронний ресурс] // Copenhagen, Denmark, 2003. - Режиму доступу до бази даних: