«БИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ АПОПТОЗА ПРИ ЛИМФОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ» : БІОХІМІЧНІ МАРКЕРИ АПОПТОЗУ ПРИ ЛІМФОПРОЛІФЕРАТИВНИХ ЗАХВОРЮВАННЯХ

Краткое описание

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ
ЛУГАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ
УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

ХОЛИНА ЕЛЕНА АНАТОЛЬЕВНА

УДК: 577.23/.29:616-006.44
«БИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ АПОПТОЗА ПРИ ЛИМФОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ»

14.01.32 медицинская биохимия
Диссертация на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук

Научный руководитель:
доктор медицинских наук,
профессор КОМАРЕВЦЕВА Ирина Александровна

Луганск 2008

СОДЕРЖАНИЕ

Стр.

Список используемых сокращений

4

Введение

5

Глава 1
1.1.
1.2.
1.3.

1.3.1.
1.3.2.

1.3.3.
1.4.
1.5.

1.6.
1.6.1.
1.6.2.

Обзор литературы
Типы клеточной гибели
Биохимические особенности апоптоза
Генетический контроль и молекулярные механизмы апоптоза
Митохондриальный путь
Рецепторно-опосредованный путь реализации апоптоза
Генетическая регуляция апоптоза
Биохимические особенности онкогенеза
Апоптоз в онкогенезе лимфопролиферативных заболеваний
Цитокины
Цитокины при лимфопролиферативных заболеваниях
Заключение по литературному обзору

11
11
12
15

15
16

18
20
22

29
30
34

Глава 2
2.1.

2.2. 2.3.

2.4.
2.5.
2.6.
2.7.
2.8.
2.9.

2.10.

Материалы и методы исследования
Клиническая характеристика больных лимфопролиферативными заболеваниями
Выделение мононуклеаров из крови больных
Количественное определение
ДНК-фрагментации в лимфоцитах
Морфологическая детекция апоптоза
Оценка пролиферативной активности лимфоцитов
Определение уровня адениловых нуклеотидов
Определение активности общей лактатдегидрогеназы
Определение уровня цитокинов
Определение времени релаксации протонов воды по данным ЯМР-релаксометрии
Статистическая обработка результатов

36

36
37

38
40
41
42
43
43

43
45

Глава 3
3.1.
3.1.1. 3.1.2. 3.1.3.

Результаты проведенных исследований
Уровень апоптоза и клеточной пролиферации
при лимфопролиферативных заболеваниях
Уровень ДНК-фрагментации у больных лимфомами
Активность клеточной пролиферации при лимфомах
Морфологическая детекция апоптоза

46

46
46
49
52

3.2.
3.2.1.
3.2.2.

Энергетический обмен в процессе онкогенеза при лимфопролиферативных заболеваниях
Особенности энергетического обмена
в лимфоцитах больных лимфомами
Уровень лактатдегидрогеназы у больных лимфомами

60

60
65

3.3.
3.3.1.
3.3.2.

Закономерности экспрессии маркерных цитокинов у больных лимфомами
Экспрессия IL-10 у больных лимфомами
Уровень sCD30 при ЛПЗ

70
70
74

3.4.

ЯМР-релаксометрия сыворотки больных лимфомами

78

Глава 4

АНАЛИЗ и обсуждение полученных
результатов

88

Выводы

104

Список литературы

106

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

IL

интерлейкины

sCD

растворимые кластеры дифференцировки

АДФ

аденозиндифосфорная кислота

АИ
АК

апоптотический индекс
апоптотическая клетка

АМФ

аденозинмонофосфорная кислота

АТФ

аденозинтрифосфорная кислота

ИФ

индекс фосфорилирования

Кср.

коэффициент сравнения

ЛГМ

лимфогранулематоз

ЛДГ

лактатдегидрогеназа

ЛПЗ

лимфопролиферативные заболевания

ЛС

лимфосаркома

МНК

мононуклеарные клетки

НХЛ ТКД

неходжкинские лимфомы
термодинамический контроль дыхания

ХЛ

ходжкинские лимфомы

ЭЗ

энергетический заряд

ЭП

энергетический потенциал

ЯМР

ядерный магнитный резонанс

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. Лимфопролиферативные заболевания (ЛПЗ) важная проблема современной онкогематологии. По данным литературы, ЛПЗ это гетерогенное понятие, поскольку в эту нозологическую группу включены заболевания с опухолевой трансформацией лимфоидных клеток на разных стадиях их дифференцировки. Их делят на лейкозы и лимфомы [1]. Характерным отличием ЛПЗ от других онкологических заболеваний является непосредственное вовлечение в опухолевый процесс клеток иммунной системы, что влечет за собой нарушение функциональных свойств иммунокомпетентных клеток [2].
Злокачественная трансформация сопровождается прибавлением клеточной массы, которое опережает клеточную гибель либо за счет активации процессов пролиферации, либо вследствие угнетения процессов апоптоза, а чаще всего за счет сочетанного нарушения этих процессов [3]. Блокирование процесса апоптоза, связанное с постоянным действием промоторов опухолевого роста, приводит к фенотипическим изменениям трансформированных клеток, которые приобретают повышенную способность к пролиферации и утрачивают способность к дифференцировке. Благодаря этим свойствам они имеют преимущества перед клетками нормальных тканей при росте и выживании в одинаковых условиях [4,5].
Апоптоз как активный механизм клеточного самоубийства позволяет поддерживать необходимое количественное равновесие разных клеточных популяций и защищать организм от накопления аномальных клеток [6]. Как правило, в системе крови апоптоз клеток координируется набором регуляторных сигналов и представляет собой программное ограничение клеточной массы на всех уровнях: от клеток-предшественников до зрелых клеток периферической крови [7,8]. Существует несколько принципиально различных путей реализации апоптоза [9]. Один из них инициируется под действием физиологических сигналов (экспрессия специальных киллерных цитокинов, изменением гормонального статуса), другой под действием нефизиологических различные внутриклеточные повреждения или неблагоприятные условия (нехватка факторов роста, повреждения ДНК, гипоксия) [10,11]. Ряд авторов [12,13] отмечают, что наиболее ранними биохимическими нарушениями апоптоза является активация энергетического метаболизма и специфических ферментных каскадов. При отсутствии достаточного энергообеспечения процессы клеточной смерти пойдут по некротическому пути [14]. Нарушения нормального течения запрограммированной гибели клеток, в процессах поддержания клеточного гомеостаза, может быть причиной злокачественного перерождения.
Опухолевые лимфоциты являются продуцентами цитокинов. Большое количество работ в области онкогематологии посвящено изучению роли цитокинов и рассматривает их как важнейшие факторы межклеточного и межсистемного взаимодействия, с помощью которых клетки обмениваются информацией [15]. Кроме того, цитокины и их рецепторы принимают участие в процессах регуляции пролиферации, дифференцировки клеток, а также в механизмах реализации апоптоза и некроза [16]. Обнаружено повышение уровня цитокинов при различных патологиях и в том числе при ЛПЗ [17,18]. Механизмы продукции, регуляции экспрессии и пути вовлечения во взаимодействие рецептор-лиганд широко исследуются. Особенно интересно изучение феномена экспрессии цитокинов при лимфомах, как маркеров трансформированных лимфоцитов. Широко рассмотрены в литературе закономерности увеличения количества цитокинов: IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, TNF-α, TNF-R1, TNF-R2, sCD8 [19,20,21] и практически отсутствуют работы, посвященные определению уровня IL-10, sCD30 при злокачественных лимфомах. Обсуждается вероятный механизм влияния этих цитокинов на патогенез при ЛПЗ: IL-10 ингибирует апоптоз опухолевых клеток, а sCD30 участвует в передачи сигнала апоптоза на клетки мишени [22,23,24].
Вышеизложенные проблемные вопросы во многом определили основную направленность наших исследований, т. к. идентификация новых маркеров апоптоза должна привести к более глубокому пониманию механизмов инициации и прогрессирования ЛПЗ, совершенствованию дифференциальной диагностики и созданию принципиально новых направлений терапии.

Связь работы с научными программами. Данная работа выполнена в рамках госбюджетной темы МЗО Украины: «Механизмы апоптоза в культурах клеток и репарационные процессы в тканях» (№ государственной регистрации 0107U001159).

Цель работы. Изучить биохимические условия реализации апоптоза и клеточной пролиферации по данным энергетического обмена, содержанию маркерных цитокинов IL-10, sCD30 и времени релаксации протонов воды в процессе опухолевой трансформации лимфоцитов при лимфопролиферативных заболеваниях.

Задачи исследования:
1. Изучить уровень апоптотических процессов по ДНК-фрагментации в сравнении с морфологической детекцией используя ядерный краситель Хехст в лимфоцитах больных ЛПЗ.
2. Изучить уровень клеточной пролиферации лимфоцитов по МТТ-тесту у больных ЛПЗ.
3. Определить состояние энергетического обмена в лимфоцитах больных по уровню адениловых нуклеотидов и количеству общей лактатдегидрогеназы в сыворотке больных ЛПЗ.
4. Исследовать содержание цитокинов IL-10 и sCD30 в сыворотке крови и плазме больных лимфомами.
5. Изучить релаксационные показатели сыворотки крови у больных лимфомами по данным ядерно-магнитно-резонансной релаксометрии.
Объект исследования состояние апоптотического процесса в лимфоцитах,
сыворотке и плазме больных ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами.
Предмет исследования энергетический обмен и цитокиновый статус в условиях реализации апоптоза и клеточной пролиферации у больных ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами.

Методы исследования.
Биохимические методы:
− определение уровня ДНК-фрагментации;
− определение уровня активности митохондриальных дегидрогеназ по МТТ-тесту для оценки клеточной пролиферации;
− определение уровня адениловых нуклеотидов;
− определение уровня общей лактатдегидрогеназы;
Люминесцентный метод для морфологической детекции апоптоза.
Иммуноферментный анализ для определения уровня цитокинов.
Ядерно-магнитно-резонансная релаксометрия для определения времени релаксации протонов воды.
Статистические методы: параметрический критерий Стьюдента и корреляционный анализ.

Научная новизна полученных результатов. В результате проведенного комплексного исследова­ния с использованием современных методов впервые установлено, что ЛПЗ протекают на фоне значительного угнетения апоптоза и преобладания клеточной пролиферации. Выявлено, что минимальная апоптотическая активность лимфоцитов наблюда­ется на более поздних стадиях опухолевой трансформации у больных неходжкинскими лимфомами.
Изучение уровней адениловых нуклеотидов и лактатдегидрогеназы впервые позволило охарактеризовать состояние энергетического обмена в лимфоцитах, вовлеченных в онкопроцесс и объяснить причины ухода лимфоидных клеток от программированной клеточной гибели.
Впервые изучение уровней IL-10 и sCD30 в сыворотке и плазме больных ЛПЗ позволяет сделать вывод о том, что опухолевый процесс протекает в условиях значительной экспрессии данных цитокинов и зависит от стадии заболеваний. Наиболее высокие концентрации выявлены на терминальных стадиях больных неходжкинскими лимфомами.
Впервые установлено сверхэкспрессия цитокинов протекает на фоне ингибирования апоптоза и активации пролиферации лимфоцитов, что указывает на вовлечение в патогенез ЛПЗ этих цитокинов.
Впервые выявлено удлинение показателей времени протонной релаксации, которое зависит от стадии лимфом.

Практическая значимость работы. Выявленные показатели уровня фрагментации ДНК в лимфоцитах больных лимфопролиферативными заболеваниями могут выступать дополнительным критерием дифференциальной диагностики.
Изучение уровней IL-10 и sCD30 позволяет проводить дифференциальную диагностику между ходжкинскими и неходжкинскими лимфомами, а также другими неопухолевыми заболеваниями.
Уровень IL-10 и sCD30 значительно увеличивается при ЛПЗ, что указывает на важную роль этих цитокинов в опухолевой трансформации и является перспективным для дальнейшего исследования в целях патогенетической терапии опухолей.
Увеличение времени протонной релаксации у больных лимфопролиферативными заболеваниями позволяет сформулировать предварительное заключение о возможном применении метода ЯМР-релаксометрии для диагностики лимфом, либо выделения групп «повышенного риска».

Личный вклад соискателя. В процессе выполнения диссертации автор лично сформулировала цель и задачи исследования, самостоятельно осуществила информационный поиск, анализ литературных данных, экспериментальную часть диссертации, анализ и интерпретацию полученных результатов, сделала выводы. Диссертант провела статистическую обработку, подготовила к публикации материалы диссертационной работы и сформулировала предложения по практическому применению результатов исследований. Опубликованы самостоятельные, а также напечатаны в соавторстве статьи по данным работы.

Апробация результатов диссертации. Материалы результатов диссертации были доложены и апробированы на:
1) ІХ-ом Конгрессе СФУЛТ (г. Луганск, 2002 г.);
2) VIII-ом съезде Украинского биохимического общества (г. Киев, 2002 г.);
3) межкафедральном заседании работников кафедры медицинской химии и научно-исследовательского центра Луганского государственного медицинского университета.

Публикации. По результатам данной работы опубликовано 8 научных работ, в том числе 6 статей, 2 из них без соавторов, и 2 в тезисных докладах. Публикации основного содержания диссертационной работы напечатаны в научных изданиях утвержденных ВАК Украины.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, раздела результатов собственных исследований, анализа и обсуждения полученных результатов исследования, выводов и списка использованной литературы (256 источников, из них 104 на русском и украинском языках и 152 на английском языке).
Работа изложена на 131 странице (основная часть составляет 105 станиц), содержит 11 таблиц, 16 рисунков.

Список литературы

ВЫВОДЫ
1. У больных лимфопролиферативными заболеваниями выявлено снижение количества фрагментированной ДНК, нарастающее по мере прогрессирования опухолевого процесса с увеличением стадии. Максимальный уровень определен у пациентов ходжкинскими лимфомами при II стадии (2,9%), минимальный в группе больных неходжкинскими лимфомами IV стадией (0,2%), а у некоторых пациентов (2,7%) фрагментированная ДНК не определялась.
2. Уровень клеточной пролиферации у больных злокачественными лимфомами достоверно нарастал от II к IV стадии, достигая максимальных показателей в группе пациентов неходжкинскими лимфомами.
3. С увеличением стадии лимфопролиферативных заболеваний прослеживается снижение уровней АТФ и АДФ на фоне резкого повышения количества АМФ, соответственно снижением скорости митохондриального дыхания. Максимальные изменения всех показателей энергетического обмена наблюдали при IV стадии у больных неходжкинскими лимфомами.
4. При лимфомах выявлено достоверное повышение концентрации общей лактатдегидрогеназы в пределах границ нормы у больных ходжкинскими лимфомами, а в группе пациентов с неходжкинскими лимфомами III и IV стадиями зафиксировано значительное превышение данного показателя против допустимых величин.
5. Установлено, что развитие лимфопролифератиных заболеваний происходит на фоне повышения продукции интерлейкина-10 и растворимого CD30, прогрессирование заболеваний сопровождается дальнейшим увеличением уровней цитокинов в сочетании с нарастанием активности клеточной пролиферации в условиях уменьшения популяции апоптотических клеток.
6. Обнаружено, что повышение уровней интерлейкина-10 и растворимого CD30 при неходжкинских лимфомах достоверно превышает количественное увеличение этих цитокинов при ходжкинских лимфомах, что может быть использовано для дополнительной дифференциальной диагностики данных лимфопролиферативных заболеваний.
7. Выявлено удлинение времени протонной релаксации Т1 и Т2 в сыворотке крови больных злокачественными лимфомами, причем существует зависимость от тяжести патологического процесса, что обусловлено проявлением «системного эффекта», характерного для онкологических болезней.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1. Воробьев А.И. Руководство по гематологии. М.: Ньюдиамед, 2003. Т. 2 С. 69-82.
2. Волкова М.А. Хронический лимфолейкоз / М.А. Волкова; Клиническая онкогематология. М.: Медицина, 2001. С. 376-392.
3. Антонов В.Г., Козлов В.К. Патогенез онкологических заболеваний: иммунные и биохимические феномены и механизмы // Цитокины и воспаление. 2004. Т. 3, № 1. С. 8-19.
4. Garrett M.D., Mittnacht S. Oncogenes and cell proliferation: The genetics and biology of cancer revealing avenues for therapy // Current Opinion in Genetics and Development. 2005. Vol. 15. P. 1-4.
5. Иванов С. Д., Акимов А. А., Акимов М. А., Гершанович М. Л. Молекулярно-клеточные механизмы устойчивости опухоли к цитостатикам и возможные пути преодоления этой химиорезистентности // Успехи современной биологии. 2001. Т. 121, №2. С. 198-210.
6. Фильченков А.А., Стойка Р.С. Апоптоз и рак. Т.: Укрмедкнига, 2005. 145 c.
7. Hanahan D., Weinberg R.A. The hallmarks of cancer // Cell. 2000. Vol. 100. P. 57-70.
8. Копнин Б.П. Неопластическая клетка: основные свойства и механизмы их возникновения // Практическая онкология. 2002. Т. 3, № 4. С. 5-33.
9. Green D.R. Apoptotic pathways: paper wraps stone blunts scissors // Cell. 2000. Vol. 102. P. 1-4.
10. Daugas E., Susin S.A., Zamzami N. et al. Mitochondrio-nuclear translocation of AIF in apoptosis and necrosis // FASEB J. 2000. Vol. 14. P. 729-739.
11. Cregan S.P., Fortin A., MacLaurin J.G. et al. Apoptosis-inducing factor is involved in the regulation of caspase-independent neuronal cell death // J. Cell Biol. 2002. Vol. 158, № 3. P. 507-517.
12. Hengartner M.O. The biochemistry of apoptosis // Nature. 2000. Vol. 407. P. 770-776.
13. Владимирская Е. Б. Апоптоз и его роль в регуляции клеточного равновесия // Клиническая лабораторная диагностика. 2002. №11. С. 25-32.
14. Казначеев К. С. Механизмы развития цитокининдуцированного апоптоза // Гематология и трансфузиология. 1999. Т. 44, №1. С. 40-43.
15. Heldin C. H. Signal transduction: multiple pathways, multiple options for therapy // Stem Cells. 2001. Vol. 9. P. 295-303.
16. Zhou X. Y. Promoting effects of serum-free murine bone marrow endothelial cell conditioned medium on the growth of bone marrow endothelial cells // Expert. Opin. Biol. Th. 2005. Vol. 57, № 2. P. 199-204.
17. Телетаева Г.М. Цитокины и противоопухолевый иммунитет // Практическая онкология. 2007. Т. 8, №4. С. 211-218.
18. Бережная Н.М., Чехун В.Ф. Система интерлейкинов и рак. Киев: ДИА, 2000. 224 с.
19. Yamada Y., Kamihira S. Pathological roles of interleukin-15 in adult T-cell leukemia // Leuk Lymphoma. 1999. Vol. 35, № 1-2. P. 37-45.
20. Casasnovas R., Mounier N., Brice P., Divine M., Morschhauser F.,
Gabarre J., Blay J., Voillat L., Lederlin P., Stamatoullas A., Bienvenu J., Guiguet M., Intrator L., Grandjean M., Brière J., Ferme C., Salles G. Plasma Cytokine and Soluble Receptor Signature Predicts Outcome of Patients With Classical Hodgkin’s Lymphoma: A Study From the Groupe d’Etude des Lymphomes de l’Adulte // J. Clin. Oncol. 2007. Vol. 25, № 13. P. 1732-1740.
21. Бережная Н.М. Цитокиновая регуляция при патологии: стремительное развитие и неизбежные вопросы // Цитокины и воспаление. 2007. Т. 6, № 2. С. 26-34.
22. Boulland M.L., Meignin V., Leroy-Viard K., Copie-Bergman C., Briere J., Touitou R., Kanavaros P., Gaulard P. Human interleukin-10 expression in T-natural killer-cell lymphomas: association with anaplastic large cell lymphomas and nasal natural killer-cell lymphomas // Am. J. Pathol. 1998. Vol. 153, № 4. P. 1229-1237.
23. Кадагидзе З.Г. Цитокины // Практическая онкология. 2003. Т. 4, № 3. С. 131-139.
24. Gause A., Jung W., Schmils R., Tschiersch A., Scholz R., Pohl C., Hasenclever D., Diehl V., Ptreunclschuh M. Soluble CDS, CD25 and CD30 antigens as prognostic markers in patients with untreated Hodgkin's lymphoma // Ann. Oncol. 1992. Vol. 3. P. 49-52.
25. Trump B.F., Arstila A.U. Cell membranes and disease processes / Pathobiology and cell membranes // Acad. press. 1975. Vol. 1. P. 1-52.
26. Ярилин А. А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме // Патол. физиол. и эксперим. терапия. 1998. №2. С. 38-48.
27. Хансон К.П. Апоптоз: современное состояние проблемы // Известия АН. Серия биологическая. 1998. № 2. С. 134-141.
28. Rathmell J.C., Thompson C.B. The central effectors of cell death in the immune system // Annu. Rev. Immunol. 1999. Vol. 17. P. 781-828.
29. Рыжов С.В., Новиков В.В. Молекулярные механизмы апоптотических процессов // Российский биотерапевтический журнал. − 2002. − Т. 1, №3. − С. 27-33.
30. Budd R.C. Death receptors couple to both cell proliferation and apoptosis // J. Clin. Invest. 2002. Vol .109, № 4. P. 437-442.
31. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза (обзор) // Биохимия. 2000. Т. 65. С. 5-33.
32. Ashkenazi A., Dixit V.M. Death receptors: signaling and modulation // Science. 1998. Vol. 281. P. 1305-1308.
33. Волянский Ю. Л., Кологова Т. Ю., Васильев Н. В. Молекулярные механизмы программированной клеточной гибели // Успехи современной биологии. 1994. Т. 114, № 6. С. 679-692.
34. Погорелов В. М., Козинец Г. И. Морфология апоптоза при нормальном и патологическом гемопоэзе // Гематология и трансфузиология. 1995. Т. 40, № 5. С. 17-24.
35. Умайский С. Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы // Молекулярная биология. 1996. Т. 30, № 3. С. 487-493.
36. Hibner U., Coutinho A. Signal antonymy: a mechanism for apoptosis induction // Cell Death. Differ. 1994. Vol. 1. P. 33-37.
37. Leist M., Nicotera P. The shape of cell death // Biochem. Bioph. Res. Commun. 1997. Vol. 236, №1. P. 1-9.
38. Wyllie A. H., Kerr J. F. R., Currie A. R. Cell death: The significance of apoptosis // Int. Rev. Cytol. 1980. Vol. 68. P. 251-306.
39. Waterhouse N., Green D. Mitochondria and apoptosis // J. Clinical. Immunol. 1999. Vol. 19. P. 378-386.
40. Goldstein P. Controlling cell death // Cell. 1997. Vol. 275, № 5303. P. 1081-1082.
41. Барышников А. Ю. Программированная клеточная смерть (апоптоз) / М. А. Волкова; Клиническая онкогематология. М.: Медицина, 2001. С. 36-42.
42. Thornberry N., Lazebnik Y. Caspases: enemies within // Science. 1998. Vol. 281. P. 312-316.
43. Chang H.Y., Yang X. Proteases for cell suicide: functions and regulation of caspases // Microbiol. Rev. 2000. Vol. 64, № 4. P. 821-846.
44. Alnemri E.S., Livingston D.J., Nicholson D.W., Salvesen G., Thornberry N.A., Wong W.W., Yuan J. Human ICE/CED - 3 protease nomenclature // Cell. 1996. Vol. 87. P. 171.
45. Johnson D.E. Noncaspase proteases in apoptosis // Leukemia. 2000. Vol. 14. P. 1695-1703.
46. Мазурик В. К. Успехи в изучении механизмов регуляции клеточного цикла, репарации ДНК и апоптоза при участии белка и гена р53 первый шаг на пути к предсказываемой революции в лабораторной медицине X X I века // Лабораторная медицина. 2001 . № 4. C. 33-43.
47. Зенков Н. К., Меньшиков Е. Б., Вольский Н. Н., Козлов В. А. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз // Успехи современной биологии. 1999. № 5. С. 440-450.
48. Stoian I., Oros A., Moldoveanu E. Apoptosis and free radicals // Biochem. Mol. Med. 1996. Vol. 59, № 2. P. 93-97.
49. Meyn R. E., Stephens L. C., Ang К. К. et al. Heterogeneity in the development of apoptosis in irradiated murine tumors of different histologies // Intern. J. Radiat. Biol. 1993. Vol. 64, № 5. P. 583-591.
50. Лихтенштейн А. В., Шапот В. С. Опухолевый рост: ткани, клетки, молекулы // Патол. физиол. 1998. №3. С. 25-44.
51. Wyllie A. H. Apoptosis (the Frank Rose Memorial lecture) // Brit. J. Cancer. 1993. Vol. 67. P. 205-208.
52. Владимирская Е. Б. Механизмы апоптоза клеток крови // Лабораторная медицина. 2001. Т. 121, № 4. С. 47-54.
53. Cohen J. J. Apoptosis // Immunol. Today. 1993. Vol. 14. P. 126-130.
54. Hengartner M.O. The biochemistry of apoptosis // Nature. 2000. Vol. 407. P. 770-776.
55. Dive C. Avoidance of apoptosis as a mechanism of drug resistance // J. Intern. Med. Suppl. 1997. Vol. 740. P. 139-45.
56. Зотин А. И. Митохондриальная теория канцерогенеза // Известия Академии Наук СССР. Серия биологическая. 1991. № 6. С. 805-815.
57. Kluck R.M., BossyWetzel E., Green D.R., Niemeyer D.D. The release of cytochrome C from mitochondria: a primary site for bcl-2 regulation of apoptosis // Science. 1997. Vol. 275. P. 1132-1136.
58. Janicke R.U., Sprengart M.L., Wati M.R., Porter A.G. Caspase-3 is required for DNA fragmentation and morphological changes associated with apoptosis // J. Biol. Chem. 1998. Vol. 273, № 16. P. 9357-9360.
59. Schuler M., Green D.R. Mechanisms of p53 dependent apoptosis // Biochem. Soc. 2001. Vol. 29. P. 684-688.
60. Piacentini M, Piredda L., Starace D.T., Annicchiarico-Petruzzelli M., Mattei M.,Oliverio S., Farrace M.G., Melino G. Differential growth of N- and S-type human neuroblastoma cells xenografted into scid mice, correlation with apoptosis // J. Pathol. 1996. Vol. 180. P. 415-422.
61. Walczak H., Krammer P.H. The CD95 (Apo1/Fas) and the TRAIL
(Apo-1) Apoptosis Systems // Exp. Cell Res. 2000. Vol. 256. P. 58-66.
62. Papoff G., Hausler P., Eramo A. et al. Identification and characterization of a ligand-independent oligomerization domain in the extracellular region of the CD95 death receptor // J. Biol. Chem. 1999. Vol. 274, № 53. P. 3824-38250.
63. Новиков В.В. Растворимые дифференцировочные агенты // Материалы Европейской школы онкологов. М.: Медицина, 1999. С. 10-14.
64. Nagata S., Golstein P. The Fas death factor // Science. 1995. Vol. 267. P. 1449-1456.
65. Nagata S. Apoptosis by death factor // Cell. 1997. Vol. 88. P. 355-365.
66. Hsu H., Xiong J., Goeddel D. The TNF receptor 1-associated protein TRADD signals cell death and NF-kappa B activation // Cell. 1995. Vol. 81. 495-504.
67. Liaudet L., Soriano F., Szabo C. Biology of nitric oxide signaling // Crit. Care Med. 2000. Vol. 28. P. 37-52.
68. Bauer G. Reactive oxygen and nitrogen species: Efficient, selective, and interactive signals during intercellular induction of apoptosis // Anticancer Res. 2000. Vol. 20. P. 4115-4139.
69. Nicholson D.W., Thornberry N.A. Caspases: Killer proteases // Trends Biochem. Sci. 1997. Vol. 22. P. 299-306.
70. Новик А. А., Белохвостов А. С. Молекулярно-генетический подход к диагностике злокачественных лимфом // Вопр. онкологии. 1998. Т. 44, № 3. С. 274-279.
71. Чумаков П.М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью // Биохимия. Т.65, №1. С. 34-47.
72. Catz S.D., Johnson J.L. Transcription al regulation of bcl-2 by nuclear factor kappa B and its significance in prostate cancer // Oncogene. 2001. V. 20 P. 7342-7347.
73. Райхлин Н.Т., Райхлин А.Н. Регуляция и проявление апоптоза в физиологических условиях и в опухолях // Вопросы онкологии. 2002. Т. 48, № 2. С. 159-171.
74. Глухова Е.И., Лукашина М.И., Богатырев В.Н., Барышников А.Ю. Экспрессия белков, кодирующих апоптоз, и индекс ДНК опухолевых клеток рака молочной железы // Российский биотерапевтический журнал. 2000. Т. 1, № 3. С. 15-21.
75. Green D.R., Reed J.C. Mitochondria and apoptosis // Science. 1998. Vol. 281. P. 1309-1312.
76. Носов Д.А. Механизмы регуляции внутриклеточной передачи сигнала и апоптоза: успехи и неудачи целенаправленной терапии // Материалы VIII Российского онкологического конгресса. М.: Медицина, 2004. С. 376-392.
77. Stambolic V., Suzuki A., de la Pompa J. E., Brothers G. M., Mirtsos C., Sasaki Т., Ruland J., Penninger J. M., Siderovski D. P., Mak T.W. Negative Regulation of PKB Act Dependent Cell survival the tumor suppressor PTEN // Cell. 1998. Vol. 95, № 1. P. 29-39.
78. Зайко Н.Н. Патологическая физиология / Н.Н. Зайко. М.: Элиста. 1994. С. 216-238.
79. Адо А.Д., Новицкий В.В. Патологическая физиология / А.Д. Адо, В.В. Новицкий. Томск: Изд-во ун-та. 1994. С. 253-264.
80. Warburg O., Gawehn K., Geissler A., Schroder W., Gewitz H., Volker W. Bioenergetics of cancer cells // Arch. Biochem. Biophys. 1958. Vol. 78, №2. Р. 573-586.
81. Райхлин Н.Т. Окислительно-восстановительные ферменты в опухолях. М.: Медицина, 1967. 215 c.
82. Кулиш С.М. Особенности морфологического исследования лимфом в соответствии с положениями классификации ВОЗ // Новости медицины и фармации. 2007. №12. С. 218.
83. Чехун В.Ф. Современные молекулярно-биологические аспекты В-клеточных неходжкинских лимфом // Здоров’я України. 2008. Т. 2, № 1. С. 40-41.
84. Сивкович С.А. Методы лечения больных неходжкинскими злокачественными лимфомами // Здоров’я України. 2008. Т. 2, № 1. С. 48-49.
85. Новик А.А. Принципы классификации и диагностики лимфоидных опухолей. Диагностика и лечение лимфом // Материалы Российско-Голландской конференции. СПб., 2001. С. 73-91.
86. Litam P., Swan F., Cabanillas F. et al. Prognostic value of serum P-2-microglobulin in low-grade lymphoma // Ann. Intern. Med. 1991. Vol. 114. P. 855-860.
87. Мазуров В.И., Кривопалов Ю.А. Классификация лимфом. Морфология, иммунофенотип, молекулярная генетика неходжкинских лимфом // Практическая онкология. 2004. Т. 5, № 3. С. 169-175.
88. Горячева С. Р., Ковалева Л. Г., Капланская И. Б. Прогностическая значимость маркеров клеточной пролиферации при неходжкинских лимфомах // Мат. научно-практ. конф. «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии». СПб., 2002. С. 106-107.
89. Fisher D. Apoptosis in cancer therapy: crossing the threshold // Cancer Res. 1994. Vol. 78, № 4. P. 539-542.
90. Carson D. A., Ribeiro J. M. Apoptosis and disease // Lancet. 1993. Vol. 341, № 8855. P. 125-1254.
91. Leoncini L., Del Vecchio M. Т., Megha T. et al. Correlations between apoptotic and proliferative indices in malignant non-Hodgkin’s lymphomas // Amer. J. Pathol. 1993. Vol. 142. P. 755-763.
92. Osterman В., Cavallin-Stahl E., Hagberg H. et al. High-grade non-Hodgkin's lymphoma stage I. A retrospective study of treatment, outcome and prognostic factors in 213 patients // Acta Oncol. 1996. Vol. 35. P. 171-177.
93. Осипова Е. Ю. Клеточные модели для оценки уровня и характера апоптоза клеток крови человека: Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 2003. 25 с.
94. Погорелов В. М., Козинец Г. И. Морфология апоптоза при нормальном и патологическом гемопоэзе. // Гематология и трансфузиология. 1995. Т. 40. № 5. С. 17-24.
95. Поддубная И. В. Неходжкинские лимфомы / М. А. Волкова; Клиническая онкогематология. М.: Ньюдиамед, 2001. С. 336-375.
96. Новиков В. С. Программируемая клеточная гибель. М.: Наука, 1996. 276 с.
97. Zhu L., Skoultchi A. I. Coordinating cell proliferation and differentiation // Curr. Opin. Genet. Dev. 2001. № 11. P. 91-97.
98. Greenbatt M. S. et al. Deletions and insertions in the p53 tumor suppressor gene in human cancer // Cancer Res. 1996. Vol. 56. P. 2130-2136.
99. Carmeliet P., Jain R.K. Angiogenesis in cancer and other diseases // Nature. 2000. Vol. 407. P. 171-178.
100. Greenberg В., Richter S., Feltes M., Gross E., Holton-Smith D., Pryor В., Ross-Russell D. Cancer screening in primary care: strategies for your office а program of the Connecticut Division of the American Cancer Society // Conn. Med. 1996. Vol. 60, № 12. P. 709-716.
101. Белоусова А. К. Загадки гена опухолевого супрессора р53 // Эксперим. онкол. 1996. Т. 18, № 4. С. 197-208.
102. Ставровская А. А. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток // Биохимия. 2000. Т. 65, № 1. С. 112-126.
103. Владимирская Е. Б., Астрелина Т. А., Осипова Е. Ю., Соболева Т. П. Критерии оценки чувствительности опухолевых клеток к химиопрепаратам ex vivo // Клиническая лабораторная диагностика. 2000. № 9. C. 35-38.
104. Reed J. C. Bcl-2 family proteins: regulators of apoptosis and chemoresistance in hematologic malignancies // Semin. Hematol. 1997. Vol. 34, № 4. P. 9-19.
105. Adams J. М., Согу S. The Bcl-2 protein family: arbiters of cell survival // Science. 1998. Vol. 281, № 5381. P.1322-1326.
106. Гершанович М. Л., Филов В. А., Акимов А. А., Акимов М. А. Причины устойчивости опухоли к цитостатикам и фармакологические возможности ее преодоления / Введение в фармакотерапию злокачественных опухолей. СПб.: Сотис, 1999. 84 с.
107. Goldscheider J. Early stages of lymphocyte development // Curr. Top. Develop. 1980. Vol. 14. Part 11, № 4. P. 33-57.
108. Mikami Т., Yanagisawa N., Baba H. et al. Association of Bcl-2 protein expression with gallbladder carcinoma differentiation and its relation to apoplosis // Cancer. 1999. Vol. 85. P. 318-325.
109. Калищук С. А. Прогностическая значимость накопления онкопротеина р53 у больных злокачественными лимфомами: Автореф. дис. канд. мед. наук. СПб., 2003. 22 с.
110. Hsu В., Marin M. С., Brishax S. et al. Expression of bcl-2 gene confers multidrug resistance to chemotherapy-induced cell death // Cancer Bull. 1994. Vol. 46, № 2. P. 125-129.
111. Herr L, Wilhelm D., Bohler Т., Angel P., Debatin К. М. JNK/SAPK Activity is not sufficient for anticancer therapy-induced apoptosis involving CD95-L, Trail and TNF-α // Int. J. Cancer. 1999. Vol. 80, № 3. P. 417-424.
112. Villunger A., Egle A., Kos M., Hartmann B. L. Geley S., Kofler R., Greil R. Drug-induced Apoptosis is associated with enhanced Fas (Apo-1/CD95) ligand expression but occurs independently of Fas signaling in human T-acute lymphatic leukemia cells // Cancer Res. 1997. Vol. 57, № 16. P. 3331-3334.
113. Абелев Г.И. Механизмы дифференцировки и опухолевый рост // Биохимия. 2000. Т. 65, № 1. С. 112-126.
114. Кушлинский Н.Е., Бритвин Т.А., Полякова Г.А. и соав. Сравнительное исследование уровней растворимого Fas-антигена в сыворотке крови больных опухолями и опухолеподобными поражениями надпочечников // Бюлл. эксперим. биол. мед. 2002. Т. 134. С. 171-174.
115. Фильченков А.А. Цитокины суперсемейства ЭФР и онкогенез // Эксперим. онкология. 1998. Т.20, № 2. С.83-108.
116. Кудрявец Ю.И., Фильченков А.А., Абраменко И.В. и соав. Динамика апоптотических событий, индуцированных фактором некроза опухолей в лейкозных клетках U-937 // Эксперим. онкология. 1996. Т. 18. С. 356-365.
117.