ОПРАЦЮВАННЯ СКЛАДУ, ТЕХНОЛОГІЇ ТА ДОСЛІДЖЕННЯ ВАГІНАЛЬНИХ СУПОЗИТОРІЇВ ПРОТИВІРУСНОЇ ДІЇ З ПРОТЕФЛАЗІДОМ

Краткое описание

МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ’Я УКРАЇНИ
ЛЬВІВСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМЕНІ ДАНИЛА ГАЛИЦЬКОГО

На правах рукопису

ЗЕЙДО ФІРАС МАЗЕН

УДК 615. 281.8:615.322:615.454].014.2:615.074/.076

ОПРАЦЮВАННЯ СКЛАДУ, ТЕХНОЛОГІЇ ТА ДОСЛІДЖЕННЯ ВАГІНАЛЬНИХ СУПОЗИТОРІЇВ ПРОТИВІРУСНОЇ ДІЇ
З ПРОТЕФЛАЗІДОМ

15.00.01 технологія ліків та організація фармацевтичної справи

ДИСЕРТАЦІЯ
на здобуття наукового ступеня
кандидата фармацевтичних наук

Науковий керівник:
доктор фарм. наук, професор
Калинюк Тимофій Григорович

ЛЬВІВ 2008

З М І С Т

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ ..

4

ВСТУП

5

РОЗДІЛ 1. СУЧАСНИЙ СТАН ЛІКУВАННЯ ВІРУСНИХ
ЗАХВОРЮВАНЬ . ..

11

1.1. Вірусні інфекції та противірусні лікарські засоби .
1.2. Аналіз асортименту препаратів противірусної дії .

11
16

1.3. Протефлазід ефективний противірусний препарат ..

24

1.3. 1. Хіміко-біологічні властивості Протефлазіду..

25

1.3.2. Застосування Протефлазіду у лікувальній практиці.

26

1.4. Імунофармакологічні дослідження лікарських препаратів на культурах клітин
1.5. Біофармацевтична оцінка супозиторіїв..
ВИСНОВКИ ..

31
35
41

РОЗДІЛ 2. ОБ’ЄКТИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ ..

43

2.1. Об’єкти дослідження .

43

2.2. Методи дослідження .

45

2.2.1. Фармако-технологічні методи дослідження супозиторіїв ...

45

2.2.2. Мікробіологічні та біофармацевтичні дослідження

45

2.2.3. Імунологічні дослідження ..

49

2.2.4.Дослідження місцевоподразнюючої дії супозиторіїв .

56

2.2.5. Методи аналізу отриманих результатів

56

РОЗДІЛ 3. РОЗРОБКА СКЛАДУ, ТЕХНОЛОГІЇ ТА ДОСЛІДЖЕННЯ ВАГІНАЛЬНИХ СУПОЗИТОРІЇВ З ПРОТЕФЛАЗІДОМ ....

57

3.1. Теоретичне та експериментальне обгрунтування складу супозиторіїв .

57

3.2. Вивчення впливу супозиторних основ на вивільнення флавоноїдів із супозиторіїв з Протефлазідом..
3.3. Розробка технології супозиторіїв з Протефлазідом ..
3.4. Контроль якості супозиторіїв з Протефлазідом ..
3.5.Дослідження стабільності супозиторіїв з Протефлазідом ..
ВИСНОВКИ .

63
69
80
89
93

РОЗДІЛ 4. ФАРМАКОЛОГІЧНІ ДОСЛІДЖЕННЯ .
4.1. Імунофармакологічні дослідження Протефлазіду ..

94
94

4.1.1. Рецепторна характеристика лімфоцитів після бласттрансформації з Протефлазідом та екстрактом елеутерокока .

94

4.1.2. Білковий спектр сироватки крові донорів і культуральної рідини після бласттрансформації .

99

4.1.3. Імуноглобуліни сироватки крові і культуральної рідини після бласттрансформації .

106

4.1.4. Інтерферон і інтерлейкін (IL-1b) сироватки крові донорів і культуральної рідини після бласттрансформації ..

109

4.2. Дослідження протигерпетичної активності супозиторіїв з Протефлазідом

114

4.3. Дослідження місцевоподразнюючої дії супозиторіїв з Протефлазідом

115

ВИСНОВКИ ...

118

ЗАГАЛЬНІ ВИСНОВКИ ..

119

СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ ..
ДОДАТКИ ..

121
139

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ
АНД - аналітична нормативна документація
БТЛ - реакція бласттрансформації лімфоцитів
ВІЛ - вірус імунодефіциту людини
ВПГ - вірус простого герпесу
ДНК - дезоксирибонуклеїнова кислота
ДФ - Державна Фармакопея
ЛЗ - лікарський засіб
ЛР - лікарська речовина
ЛФ лікарська форма
ЛПЗ лікувально-профілактичний заклад
ПЕО - поліетиленоксиди
ФГА - фітогемаглютинін
ФІТЦ - флюоресцеїн ізотіоціанат
СД (CD) - кластер диференціації лімфоцитів
СЗ - стандартний зразок
IFN - інтерферон
IL-1в - інтерлейкін - 1в

В С Т У П

Актуальність теми. На даний час спостерігається широке розповсюдження вірусів, причому значно збільшується захворюваність герпетичною інфекцією. Герпетична інфекція є однією з найбільш розповсюджених форм вірусних хвороб на планеті [10,36,171]. Для даних вірусів характерна персистенція їх в клітинах господаря та інтеграція в геном клітини. Вони мають здатність викликати гостру, персистентну або латентну форму вірусної інфекції. У паравертебральних сенсорних гангліях віруси можуть зберігатись у латентній формі протягом тривалого часу і при несприятливих для організму періодах можуть дисемінувати (гематогенно аба периневральним шляхом) в органи-мішені (органи урогенітальної системи та інші) [37,146]. Проблема лікування вірусних захворювань і створення ефективних лікарських засобів є однією із актуальних у сучасній медицині та фармації.
Вітчизняною промисловістю випускається противірусний препарат Протефлазід, який дозволений до медичного застосування від 31.01.2002 р. наказом МОЗ України за № 30. В аптечну мережу Протефлазід надходить у вигляді крапель. Проте використання Протефлазіду тільки у вигляді крапель не завжди ефективно вирішує проблему лікування вірусних захворювань, тому актуальним є опрацювання складів і технології нових ефективних засобів з Протефлазідом.
Перспективною лікарською формою для місцевого застосування є супозиторії, які займають значне місце в номенклатурі сучасних лікарських форм [3,143,167]. Перспективність цієї лікарської форми стає більш очевидною, якщо враховувати, що деякі лікарські речовини, прийняті всередину, інактивуються травними соками, травмують шлунково-кишковий тракт і печінку. У ряді випадків лікарські речовини, введені у вигляді супозиторіїв, надходять у кров швидше, ніж при підшкірному введенні, і проявляють терапевтичний ефект у менших дозах, причому супозиторії можуть мати не тільки місцеву, а й резорбтивну дію.
На фармацевтичному ринку України асортимент супозиторіїв з противірусною дією обмежений, тому опрацювання вітчизняного противірусного засобу у формі супозиторіїв є доцільним і актуальним..
Важливою проблемою імунофармакології є дослідження препаратів з імунотропною дією для вияснення спрямованості їх коригуючого ефекту, а також для розуміння виникаючих факторів міжклітинної кооперації під дією досліджуваних лікарських засобів [12]. Найбільш інформативним із доступних функціональних тестів є визначення здатності лімфоїдних клітин відповідати проліферацією на дію мітогенних лектинів і досліджуваних лікарських засобів [137,173].
Зв'язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисер-таційна робота виконана згідно з планом проблеми „Фармація” МОЗ України і є фрагментом комплексних науково-дослідних робіт Львівського національного медичного університету імені Данила Галицького (шифр теми ІН 10.06.0001.01, номер державної реєстрації 0101U009227 та шифр теми ІН 21.00.002.05, номер державної реєстрації 0105 U007868).
Мета і задачі дослідження. Метою роботи була розробка науково обгрунтованого складу, технології та методик контролю якості вагінальних супозиторіїв з Протефлазідом, а також вивчення можливості використання культури клітин крові для дослідження імунної активності розчинних лікарських засобів.
Для досягнення поставленої мети необхідно було вирішити наступні завдання:
- вивчити асортимент лікарських засобів противірусної дії, зареєстрованих в Україні;
- проаналізувати дані літератури щодо застосування Протефлазіду як лікарського засобу;
- обґрунтувати вибір лікарської форми для Протефлазіду;
- розробити оптимальний склад та технологію супозиторіїв з Протефлазідом;
- встановити основні показники якості супозиторіїв з Протефлазідом, обґрунтувати терміни та умови їх зберігання;
- розробити проект технологічної інструкції на виготовлення супозиторіїв з Протефлазідом та апробувати його в умовах аптеки;
- розробити технологічну і апаратурну схеми виробництва супозиторіїв з Протефлазідом та аналітичну нормативну документацію на запропонований лікарський засіб;
- вивчити деякі імунокоригуючі властивості Протефлазіду на культурі клітин людського організму і порівняти досліджувані властивості Протефлазіду з властивостями загальноприйнятого адаптогена екстракту елеутерокока.
Об’єкт дослідження лікарський засіб з Протефлазідом у вигляді вагінальних супозиторіїв; культура клітин крові людського організму.
Предмет дослідження - розробка науково обґрунтованого складу і технології супозиторіїв для вагінального застосування на основі рослинного екстракта Протефлазід, призначених для лікування вірусних захворювань урогенітальної системи; показники якості та безпеки; імунофармакологічні дослідження Протефлазіду.
Методи дослідження. Для вирішення поставлених у роботі завдань застосовувались загальноприйняті органолептичні, фізико-хімічні, технологічні (вивчення температури топлення, розпадання, розчинення тощо), біофармацевтичні (метод „агарових циліндрів”, метод „агарових пластинок”), мікробіологічні та біологічні (вивчення мікробіологічної чистоти, місцевоподразнюючої дії) методи досліджень, а також реакція бласттрансформації лімфоцитів (БТЛ) з використанням фітогемаглютиніну (ФГА), як активатора трансформації; імунофлюоресцентне визначення фенотипу клітин після бласттрансформації за допомогою моноклональних антитіл; електрофорез на ацетатцелюлозі сироваток крові донорів, лейкоцити яких потім використовувались для БТЛ (паралельно електрофорез культуральної рідини після БТЛ); визначення імуноглобулінів (Ig A, Ig M, Ig G) сироваток крові і культуральної рідини після БТЛ; імуноферментне визначення концентрації гама-інтерферону, 1b-інтерлейкіну в сироватках крові та культуральній рідині після БТЛ.
Статистичний аналіз одержаних результатів проводили за допомогою комп'ютерного пакету "Statistica" 5.0.
Наукова новизна одержаних результатів. Запропоновано оптимальний склад і технологію вагінальних супозиторіїв противірусної дії з Протефлазідом (одержано деклараційний патент на корисну модель "Супозиторій противірусний" А 61К9/02 від 17.01.2005р.). Опрацьовані методики ідентифікації та визначення кількісного вмісту діючих речовин, що ввійшли до проекту аналітичної нормативної документації.
Вперше запропоновано вивчення імунокоригуючих властивостей Протефлазіду на культурі клітин людського організму з наступним фенотипуванням трансформованих клітин імунофлюоресцентним методом за допомогою моноклональних антитіл та дослідженням культуральної рідини (після бласттрансформації). Проведено оригінальне порівняння імунокоригуючих властивостей Протефлазіду та екстракта елеутерокока на лімфоцити людини. Протефлазід, перебуваючи в контакті з лейкоцитами і білками протягом 3 днів, не денатурує білки та імуноглобуліни, а також не активує В-лімфоцити до продукції імуноглобулінів. Протефлазід має виражений імунокоригуючий вплив на лімфоцити людини, знижуючи апоптозозалежність лімфоцитів, активізуючи продукцію гама-інтерферону і є супресором прозапального цитокіна (1в інтерлейкіну).
Практичне значення одержаних результатів. Створено новий оригінальний лікарський засіб з Протефлазідом у вигляді супозиторіїв для вагінального застосування. Запропоновано застосування супозиторіїв з Протефлазідом як засобу для лікування вірусних захворювань урогенітальної системи. Розроблено проект аналітичної нормативної документації (АНД) на вагінальні супозиторії з Протефлазідом.
Розроблено технологічну інструкцію та апробовано технологію супозиторіїв в умовах аптек (акти про апробацію від 12.09.2007, 2.10.2007).
Запропонована модель дослідження імунної активності розчинних лікарських засобів на основі реакції бласттрансформації лейкоцитів людини під впливом фітогемаглютиніну з наступним фенотипуванням трансформованих лімфоцитів моноклональними антитілами та дослідженням культуральної рідини на наявність цитокінів.
Проведено порівняльне імунофармакологічне дослідження Протефлазіду та екстракту елеутерокока на культурі клітин людського організму.
Фрагменти роботи впроваджено у навчальний процес кафедри фармації Івано-Франківського державного медичного університету, кафедри технології ліків Одеського державного медичного університету і кафедри технології ліків і біофармації Львівського національного медичного університету імені Данила Галицького (акти впровадження від 15.10.2007, 5.10.2007 і 15.02.2008 відповідно).
Особистий внесок здобувача. Дисертація є особистою завершеною науковою роботою здобувача. У комплексному дослідженні з опрацювання нового засобу для вагінального застосування дисертантом особисто: проведено аналіз даних літератури з метою вивчення сучасного стану лікування вірусних захворювань; досліджено асортимент противірусних засобів системної та місцевої дії та доведено необхідність опрацювання ефективних та безпечних противірусних засобів для місцевого застосування; теоретично обгрунтовано найбільш доцільну лікарську форму для нового противірусного засобу місцевої дії; підібрано діючі і допоміжні речовини для вагінальних супозиторіїв; розроблено технологію вагінальних супозиторіїв з Протефлазідом; вивчено фізико-хімічні та фармако-технологічні показники вагінальних супозиторіїв з Протефлазідом; розроблено методики ідентифікації та кількісного вмісту основних діючих речовин у супозиторіях, які увійшли до проекту АНД; вивчено стабільність вагінальних супозиторіїв у процесі зберігання; розроблено технологічну інструкцію на виробництво вагінальних супозиторіїв з Протефлазідом в умовах аптек; підготовлено і проведено реакції бласттрансформації та досліджено клітини та культуральну рідину після БТЛ; узагальнено результати експериментальних досліджень з вивчення імунофармакологічних властивостей Протефлазіду.
Персональний внесок у всіх опублікованих наукових працях зі співавторами вказується за текстом дисертації.
Апробація результатів дисертації. Основні теоретичні і практичні результати дисертаційної роботи доповідались та обговорювались на ІХ Міжнародному конгресі з клінічної патології Фізіологія і патологія імунної системи” (Бангкок, Таїланд, 2004 р.), ХІ Всесвітньому конгресі по імунопатології і алергії (Росія, Москва, 2004 р.), Х конгресі світової федерації Українських лікарських товариств (Чернівці, 2004 р.), на VІІІ з'їзді Всеукраїнського лікарського товариства (Івано-Франківськ, 2005 р.), науково-практичній конференції обласного товариства клінічної лабораторної діагностики (Львів, 2005 р.), на конференції молодих вчених Львівського національного медичного університету ім. Данила Галицького (Львів, 2006 р.).
Публікації. Основні положення дисертації опубліковані у 9 наукових працях, у тому числі 4 статтях (з яких 2 - у фахових наукових виданнях, рекомендованих ВАК України для публікації результатів дисертаційних досліджень та 2 - в журналах загальнотерапевтичного профілю), 4 тезах, 1 патенті України.

Список литературы

ЗАГАЛЬНІ ВИСНОВКИ

1. На основі вивчення асортименту противірусних лікарських засобів встановлено, що на фармацевтичному ринку України широко представлені засоби для системного лікування вірусних захворювань, проте номенклатура противірусних засобів для місцевого застосування недостатня, зовсім відсутні засоби для ректального і вагінального застосування.
2. Теоретично обґрунтовано актуальність розробки противірусного засобу у формі вагінальних супозиторіїв для місцевого лікування герпес-вірусних захворювань урогенітальної системи. У результаті пошуку ефективних противірусних засобів в Україні встановлено, що перспективним засобом є Протефлазід - препарат, який за механізмом дії належить як до віростатиків (пригнічує ДНК-полімеразу у клітинах, інфікованих вірусами герпесу, ВІЛ), так і до інтерфероногенів (збільшує продукцію ендогенного альфа- і гама-інтерферону), а також сприяє підвищенню загального рівня імунного статусу організму, тобто діє як своєрідний адаптоген.
3. На основі проведених технологічних, фізико-хімічних, біофармацевтичних та біологічних досліджень вперше запропоновано склад і розроблено технологію вагінальних супозиторіїв з Протефлазідом. Як оптимальну основу для супозиторіїв з Протефлазідом запропоновано суміш поліетиленоксидів 400 і 1500 у співвідношенні 2:8.
4. Проведено оцінку якості запропонованих супозиторіїв з Протефлазідом згідно з вимогами ДФ України. Розроблено спектрофотометричний метод стандартизації Протефлазіду і супозиторіїв з Протефлазідом за сумою флавоноїдів у перерахунку на рутин (як основних діючих речовин Протефлазіду). Відносні похибки методу становлять ± 3,12 % і ± 5,40 % відповідно.
5. Вивчено стабільність запропонованих супозиторіїв при зберіганні при кімнатній температурі (18±2°С) і в умовах холодильника (4±1°С). Встановлено, що при зберіганні супозиторії з Протефлазідом є стабільними, що підтверджується наступними показниками: зовнішній вигляд, середня маса, однорідність маси, однорідність вмісту, час розчинення, ідентифікація та кількісний вміст флавоноїдів, мікробіологічна чистота. На підставі проведених експериментальних досліджень встановлено термін зберігання супозиторіїв (не менше 2-х років). Доведено відсутність взаємодії між компонентами супозиторіїв за допомогою хроматографічного методу у тонкому шарі сорбенту на пластинках Silufol.
6. Запропонована модель дослідження противірусної активності лікарських речовин на основі реакції бласттрансформації лейкоцитів людини під впливом фітогемаглютиніну з наступним фенотипуванням трансформованих лімфоцитів моноклональними антитілами та дослідженням культуральної рідини на наявність цитокінів. Імунофлюоресцентний метод за допомогою моноклональних антитіл та дослідженням культуральної рідини (після бласттрансформації) можна застосовувати для вивчення імунної активності противірусних засобів.
7. Імунофармакологічні дослідження Протефлазіду, вперше проведені на культурі клітин людини, показали що Протефлазід є активатором продукції гама-інтерферону, виступає інгібітором прозапального цитокіна і знижує апоптозозалежність лімфоцитів.
8. У результаті біологічних досліджень доказано протигерпетичну активність розроблених супозиторіїв з Протефлазідом, доведено відсутність місцевоподразнюючої дії супозиторіїв на слизову оболонку піхви дослідних тварин.
9. Розроблено технологічну і апаратурну схеми виробництва, інструкцію щодо виготовлення супозиторіїв з Протефлазідом в умовах аптек, проект аналітичної нормативної документації на запропонований лікарський засіб, проект технологічного регламенту на виробництво супозиторіїв з Протефлазідом.

СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ

1. Абрамович Р.А., Ларионова Е.В. Биофармацевтическое исследование вагинальных противогерпетических суппозиториев с алпизарином // Тез.докл.7-го Российского нац.конгресса «Человек и лекарство». М.: РЦ «Фармединфо», 2000. С.598.
2. Азаренко Ю.М., Тихонов О.І. Розробка складу та технології супозиторіїв з фенольним гідрофобним препаратом прополісу // Вісник фармації. 1999. № 1 (19). С. 70-73.
3. Алексеева И.В. Технология и стандартизация суппозиториев с анилокаином // Человек и лекарство: Матер. Х Рос. нац. конгресса.- Москва, 2003.- С.572.
4. Арцимович Н.Г. К вопросу исследования иммунотропной активностихимических соединений // Пробл. гематол. и перелив. крови. - 1981. - № 10. - С.28-33.
5. Баринский И.Ф., Шубладзе А.К., Каспаров А.А. Герпес (этиология, диагностика, лечение).- М.: Медицина, 1986.- 272 с.
6. Белова О.И., Князева Н.Н. О приготовлении суппозиториев методом выливания // Фармация. - 1980. - Т.29, №1. - С.44-46.
7. Биофармация: Учебник для студентов высших учебных заведений и фармацевтов / А.И. Тихонов, Т.Г. Ярных, И.А.Зупанец и др.; Под ред. А.И. Тихонова.- Харьков: Изд-во НфаУ: Золотые страницы, 2003.-240 с.
8. Бодяшина В.И. О герпетической и папиломавирусной инфекции половых органов // Акушерство и гинекология. - 1988. - № 5. - С.67-72.
9. Болдырева М.Н., Алексеев Л.П., Яздовский В.В. Динамика регулирующего эффекта свежевыделенных мононуклеаров периферической крови в культуре мононуклеаров, стимулированных митогенами // Иммунология.- 1991.- № 2.- С.63-66.
10. Брезжинова Т.С., Юрлова Т.И. Герпетические инфекции // Клиническая медицина. - 1996.- № 7.- С.7-8.
11. Брежнева Ю.А. Эффективность применения Протефлазида в комплексе лечения заболеваний, вызванных вирусом герпеса у детей // Імунологія та алергологія.- 2002.- № 3.- С.38.
12. Вахитова Ю.В. Сибиряк С.В., Курчатова С.В. Влияние ладастена на пролиферативную активность и апоптоз Т-лимфоцитов периферической крови // Эксперимент. и клинич. фармакология. - 2002.- Т.65. - № 6.- С.49-52.
13. Вдовиченко Ю.П., Баскаков П.Н., Глазков И.С. Применение Протефлазида для профилактики акушерских и перинатальных осложнений у женщин с герпетической инфекцией // Репродукт. здоровье женщины.- 2003.- № 1.- С.38-39.
14. Вдовиченко Ю.П., Баскаков П.Н., Глазков И.С. Применение Протефлазида в комплексном лечении хронических воспалительных процессов гениталий // Репродуктивное здоровье женщины. 2003. № 3. С. 65-68.
15. Вивчення герпетичної активності протефлазіду /С.Л.Рибалко, С.Т.Дюдюн, В.П. Атаманюк та ін. // Вісник Вінницького державного медичного університету. 2002. № 6 (2). С. 42-47.
16. Вимоги до виготовлення нестерильних лікарських засобів в умовах аптек: Методичні рекомендації / За ред. О.І.Тихонова, Т.Г.Ярних. Київ; ТОВ «МОРІОН», 2005. 98 с.
17. Влияние тимических пептидов на синтез и внуктриклеточное содержание некоторых цитокинов / К.Ф.Ким, С.В.Климова, В.А.Дьяконова и др. // Иммунология.- 2002.- № 5.- С.274-279.
18. Влияние вспомогательных веществ на биологическую доступность лекарственных препаратов / А.И.Тенцова, Г.С.Киселева, А.П.Гарбузова и др. // Состояние и преспективы разработки, производства и использования вспомогательных веществ для изготовления лекарственных средств: Тез.докл. Харьков. 1982. С.105-106.
19. Вплив основних і допоміжних речовин на біологічну доступність флуренізиду з вагінальних супозиторіїв / Голейко Д.М., Федин Р.М., Ващенко К.Ф. / Матер. науковопракт. конф., присвяченої 75 ти річчю Української фармацевтичної академії «Досягнення сучасної фармації — в медичну практику».— Харків, 1996.— С. 93—94.
20. Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул: Пер.с англ. - М.: Мир, 1982.- 448с.
21. Ганичева Л.М., Карева Е.Г. Выбор оптимального состава основы для суппозиториев с бишофитом // Проблемы и перспективы лекарственного обеспечения и развития фармацевтического рынка: Сб. науч. Тр. Конф. - Кемерово, 2003.- С. 41-42.
22. Ганичева Л.М, Карева Е.Г. Влияние некоторых фармацевтических факторов на технологические и биофармацевтические характеристики суппозиториев бишофита // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. тр. - Вып. 60. - Пятигорск, 2005. - С.91-92.
23. Гельман В.Я. Медицинская информатика: практикум.- СПб: Питер,-2001.- 480 с.
24. Геник Н.И. Протефлазид в комплексной терапии осложнений беременности у женщин с хламидийной инфекцией // Репродукт. здоровье женщины.- 2002.- №3.- С. 13-16.
25. Голейко Д.М. Розробка складу, технології та біологічна оцінка вагінальних супозиторіїв з флуренізидом: Авт.дис...канд. фарм.наук. Львів,1996. - 21с.
26. Головкін В.В. Біофармацевтичне обгрунтування складу, технології та дослідження м’яких лікарських форм з мефенаміна натрієвою сіллю і мебетизолом: Авт.дис...канд.фармац.наук: 15.00.01/Львів. мед.ун-т.- Львів, 1997.- 18 с.
27. Головкін В.В. Вагінальні лікарські форми. Повідомлення 1. // Фармац. журн.- 1998.- № 3.- С.47-50.
28. Головкін В.В. Вагінальні лікарські форми. Повідомлення 2. // Фармац. журн.- 1999.- № 4.- С.27-30.
29. Головкін В.В. Лікувально-профілактичні засоби для вагінального застосування на основі стандартизованого розчину бішофіту: Методичні рекомендації. Київ, 2007. 25 с.
30. Головкін В.В., Борищук В.О., Кот Т.Л. Вагінальні лікарські форми. Повідомлення 3 // Фармац. журн. - 2000. - № 5. - С. 51-54.
31. Горпинченко И.И., Гурженко Ю.Н. Использование препарата Протефлазид в комплексной терапии воспалительных заболеваний мужских половых органов // Здоровье мужчины.- 2003.- №2(5).- С.111-114.
32. Государственная Фармакопея СССР. - 10-е изд.- М.: Медицина, 1968. - 1079 с.
33. Государственная фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. 11-е изд., доп. М.: Медицина, 1989. 400 с.
34. Грабар П., Буртен П. Иммуноэлектрофоретический анализ.: Пер.с франц. М.: Изд. иностр. литер., 1963.- С.198-207.
35. Граник В.Г. Лекарства. Фармакологический, биохимический и химический аспекты. М.: Вузовская книга, 2001. 408 с.
36. Гранитов В.М. Герпесвирусная инфекция.- М.: Мед.книга. 2001. - 88с.
37. Грінкевич Т.М. Сучасні методи лікування генітального герпесу у жінок репродуктивного віку: Автореф. дис... канд. мед. наук. - К., 2005. - 19 с.
38. Грищенко В.І., Танько О.Н., Сокогонь Л.М. Клініко-фармакологічні аспекти застосування препаратів макмірор та макмірор-комплекс з метою лікування вульвовагінітів грибкової, трихомонадної та змішаної етіології // ПАГ.- 1995.- № 3.- С.60-61.
39. Давтян Л.Л. Вивчення осмотичних властивостей модельних основ залежно від носія // Фармац.журн.- 2003.- № 3.- С74-77.
40. Державна Фармакопея України / Державне підприємство Науково-експертний фармакопейний центр”. - 1-е вид. - Харків: РІРЕГ, 2001. 556 с.
41. Державна Фармакопея України / Державне підприємство Науково-експертний фармакопейний центр”. - 1-е вид. - Харків: РІРЕГ, 2001. - Доповнення 1. - 2004. - 520 с.
42. Дмитрієвський Д.І., Передерій Є.О., Малоштан Л.М. Розробка складу та дослідження вагінальних супозиторіїв з глюкорібіном // Вісник фармації. 2005. - №3. С.24-27.
43. Допоміжні речовини та їх застосування в технології лікарських форм /Ф.Жогло, В.Возняк, В.Попович, Я.Богдан. - Львів, 1996. - 96 с.
44. Дослідження in vitro препаратів ербісол на продукцію інтерлейкіну-2 та g-інтерферону Т-хелперами 1 типу здорових донорів / В.Й. Фесенкова, Г.М.Драннік, В.С. Дріянська та ін. // Лабор. діагност. - 2003.- №2.- С.37-40.
45. Дослідження в галузі супозиторних основ і нової номенклатури супозиторіїв різної спрямованості дії / Н.Г. Козлова, І.М. Довга, О.Е Замараєва та ін. // Фармац.журн. - 1995. - № 5. - С.60-63.
46. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология.- Одесса, 1999. 604 с.
47. Дьяконова В.А., Бураков В.В., Шаронов Г.В. Изучение клеточных и молекулярных механизмов взаимодействия иммуномодулятора полиоксидония с клетками иммунной системы человека // Иммунология. - 2004. - № 3.- С.145- 152.
48. Ершов А.Н. Антивирусные препараты . - М.: Медицина, 1998. - 187с.
49. Захарченко В.В. Дослідження впливу пропесу на функціональну активність лімфоцитів// Ліки.- 2003.- №3/4.- С.22-25.
50. Застосування препарату „Протефлазід” у лікуванні вірусних ендоцервіцитів, ерозій шийки матки / Б.Д.Луцик, С.О.Кравець, Л.С.Гуцал та ін. //Медицина залізничного транспорту України. - 2003. - №4. - С. 57-59.
51. Изучение безвредности препарата Протефлазид по показателям местнораздражающего, аллергизующего, эмбриотоксического и мутагенного действий. Отчет. Национальный медицинский университет МЗ Украины. - Киев.- 1997.- 15 с.
52. Изучение специфического действия препарата Протефлазид. Экофармакологические свойства. Отчет ГИПК Минэкобезопасности Украины.- Киев.- 1997.- 16 с.
53. Ильинская А.Н., Пичугина Л.В., Бахус Г.О. Влияние отечественного циклоспорина А на функциональную активность лимфоцитов человека // Иммунология.- 2002.- № 23 (4).- С.208-210.
54. Иммунология (справочник) / Под ред. Герхарда Бундшу и Буркхарда Шнеевайса: Пер.с нем. - Киев: "Наукова думка".- 1981.- С.213.
55. Інструкція для медичного застосування препарату Віферон (інтерферону людського рекомбінантного альфа-2 у свічках) виробництва ТзОВ"Ферон". - Москва, затверджена Головним санітарним лікарем України О.О. Бобильовою від 7 лютого 2002 р.
56. Інструкція для медичного застосування препарату Протефлазід (Рroteflazidum). Виробник: ВАТ "Фітофарм". Реєстраційне посвідчення№ Р.02.01/02777.
57. Карпенко О.А. Протефлазид не панацея, но многое ему по силам // Doctor . 2001. № 5. С. 93-94.
58. Кетлинский С.А. Роль Т-хелперов типов 1 и 2 в регуляции клеточногои гуморального иммунитета // Иммунология.- 2002.- №2(23).- С.77-79.
59. Кишакевич І.Т. Удосконалення лікування фонових захворювань шийки матки у жінок з папіломавірусною та герпетичною інфекціями: Автореф.дис...канд.мед.наук.- Львів, 2004.- 21 с.
60. Кишакевич И.Т. Сучасні аспекти лікування доброякісних процесів шийки матки, асоційованих з папіломавірусною інфекцією // ПАГ, 2004.- № 2.- С.116-118.
61. Клаус Дж. Лимфоциты. Методы. - М.: Мир, 1990.- 280 с.
62. Клиническая онкогематология: Руководство для врачей / Под ред.М.С.Волковой. М.: Медицина.- 2001.- 82 с.
63. Козлова В.И., Пухнер А.Ф. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий: Руководство для врачей.- М.: Авиценна, ЮНИТИ.- 1995. - 317с.
64. Козлова Н.Г., Замараева Е.Е., Драник Л.И. Некоторые особенности создания лекарственных форм в виде суппозиториев // Фармация. 1992. - №6. С.80-83.
65. Компендиум - 2005. Лекарственные препараты / Под ред.В.Н. Коваленко, А.П.Викторова. К.: Морион, 2005. - 1920 с.
66. Комплексная терапия папилломавирусной инфекции с использованием отечественного препарата "протефлазид"/В. Радионов, В.Шведюк, Ю.В.Семиряд и др. // Укр. журн. дерматологии, венерологии, косметологии.- 2002.- №4 (7).- С.86-90.
67. Крючко Т.А., Несина И.Н. Эффективность применения Протефлазида в комплексной терапии детей с хроническим гепатитом В// Імунологія та алергологія.- 2002.- № 4.- С.38-40.
68. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Под ред. В.В.Меньшикова.- М.: Медицина, 1987.- С.177-178.
69. Лаповець Л.Є., Луцик Б.Д. Посібник з лабораторної імунології.- Львів, 2002.- 173 с.
70. Левицкий А.П. Биофлавоноиды как регуляторы физиологических функций // Вісник стоматології.- 2001.- №1.- С.71-76.
71. Левицкий А.П., Макаренко О.А., Сукманский О.И. Фитоэстрогены(биохимия, фармакология, применение в медицине).- Одесса, 2002. - 95с.
72. Лобанова А.А., Будаева В.В., Сакович Г.В. Исследование биологически активных флавоноидов в экстрактах из растительного сырья // Химия растительного сырья. 2004. — №1. С. 47-52.
73. Лозюк Л.В., Потопальський А.И., Лозюк Р.М. Медикаментозная терапия и профилактика вирусных заболеваний. Львів: Норма, 2003. 208 с.
74. Луцик Б.Д., Лаповець Л.Є. Статистика для медиків на підставі комп’ютерного пакета Statistica // AML. Львів.мед.часопис.- 2002. т.VІІІ, № 2.- С.96-99.
75. Максютіна Н., Пилипчук Л. Структурована система природних вітамінів-антиоксидантів "Віталектин" та його імуномодулюючі властивості // Ліки України.- 2000.- № 10.- С.31-33.
76. Марченко л.Г., Русак А.В., Смехова И.Е. Технология м’яких лекарственных форм / Под ред.проф. Л.Г.Марченко. СПб.: СпецЛит, 2004. 174 с.
77. Метелиця Л.О.,Чарочкіна Л.Л., Могилевич С.С. Особливості впливу лікарських засобів на функціональну активність поліморфоядерних лейкоцитів крові людини // Ліки.- 2003.- №3/4.- С.15-17.
78. Методика применения препарата Протефлазид в терапии вирусного гепатита С /В.И.Матяш, И.А.Боброва, А.Д.Вовк и др.: Информационное письмо №123. - 2002. - 2с.
79. Методичні рекомендації: Діагностика та лікування офтальмопатології в осіб, що постраждали внаслідок аварії на Чорнобильській АЕС. Київ, 2003. 19 с.
80. Методичні вказівки для постановки досліджень по вивченню подразнюючих властивостей і обгрунтування гранично-допустимих концентрацій вибірково діючих подразнюючих речовин. - Київ, 1980. - 14 с.
81. Нго Т., Ленхафф Т. Иммуноферментный анализ: Пер.с анг. М.: Мир.-1988.- 446с.
82. Нагорний В.В. Вивчення структурно-механічних властивостей супозиторних композицій з натрію нітропрусидом // Фармац.журн.-1999.- № 6.- С.81-83.
83. Наказ № 441 МОЗ України „ Про затвердження Порядку проведення доклінічного вивчення лікарських засобів, Порядку визначення установ, які проводять доклінічне вивчення лікарських засобів. Київ, 2001.
84. Настанова 42-01-2003 Лікарські засоби. Технологічний процес. Документація”. К.: МОЗ України, 2003. 42 с.
85. Никитин А.В. Методические подходы к изучению действия антибиотиков на иммунную систему// Антибиотики и химиотерап.-1990.- № 8.- С.45-48.
86. Обработка данных и анализ результатов клинических испытаний лекарственных средств / А.В.Жмуро, В.И.Мальцев, Т.К.Ефимцева, Л.И. Ковтун //Укр. мед. часопис.- 2001.- № 6.- С.34-48.
87. Овчаров Р., Генчева Г. Имунофармакология // Медиц. и физкульт.- София (Болгария), 1986.- 234 с.
88. Опыт применения Протефлазида в комплексной терапии нейроинфекций у детей / Т.А.Крючко, Н.И.Несина, Е.С.Кошлакова, Ю.А. Костенко // Імунологія та алергологія.- 2002.- № 3.- С.60.
89. Островская О.Н. Некоторые аспекты применения препарата Протефлазид в комплексном лечении угрозы прерывания беременности у женщин с хламидийной инфекцией // Репродукт. здоровье женщины.- 2002.- №2.- С.9-ІЗ.
90. Островська О.М. Препарат Протефлазід та його дія на рівень імуноглобулінів М та G сироватки крові при лікуванні невиношування вагітності у жінок з хламідійною інфекцією // Матеріали ІV Української конференції молодих вчених, присвяченої пам’яті академіка В.В.Фролькіса.- Київ.- 2003.- С.181-182.
91. Островська О.М. Вплив використання препарату Протефлазід на рівень лізоциму сироватки крові при лікуванні невиношування вагітності у жінок з хламідійною інфекцією // Матеріали VІ науково-практичної та звітно-виборної конференції Українського товариства фахівців з імунології, алергології та імунореабілітації.- Київ.- 2002.- С. 57.
92. Панасюк О. Етіопатогенетична терапія герпесвірсної інфекції із застосуванням протефлазіду та ультрафіолетового опромінювання крові: Авт.дис...канд.мед.наук. Київ, 2006. - 20с.
93. Передерій Є.О. Розробка складу і технології вагінальних супозиторіїв сперміцидної дії з рослинним комплексом «Глюкорібін»: Авт.дис...канд. фарм.наук. Харків, 2007. - 20с.
94. Полимеры медицинского назначения /Под ред.Сєноо Манабу. - М.: Медицина,1991. - 248 с.
95. Постольник В.В., Перцев І.М. Склад та властивості нової супозиторної основи // Вісник фармації.- 2002.- № 2 (30).- С.84-86.
96. Правові, медичні та фармацевтичні аспекти створення, реалізації і застосування лікарських засобів / За ред. проф. Т.Г. Калинюка, проф. Б.Л. Парновського. Львів: Ліга-Прес, 2002. 216 с.
97. Практикум по биохимии / Под ред.Н.П.Мешковой, С.Е.Северина. М.: МГУ, 1979.- С.91-92.
98. Применение антиоксидантов из группы флавоноидов в лечении диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2/ М.И.Балаболкин, М.С.Никишова, А.К.Волкова, Васильев А.В.// Пробл. эндокринологии.- М., 2003.- Т.49, № 3.- С.3-6.
99. Применение нового противовирусного препарата Протефлазид в лечении вирусного гепатита С / В.И. Матяш, Т.Л. Власик, В.Б. Шевчук и др. // Материалы VI съезда инфекционистов «Клинические проблемы борьбы с инфекционными заболеваниями». - Одесса, 2002. С. 326 - 327.
100. Применение Протефлазида в лечении больных рецидивирующим генитальным герпесом / В.П. Федотов, Л.А. Погребняк, В.А. Конова и др.// Дерматология Косметология Сексопатология. 2002. - № 3-4 С.27-31.
101. Применение Протефлазида в комплексной терапии больных вирусным гепатитом В / Б.М. Дикий, В.Ф. Пюрик, Р.С. Остяк и др. // Материалы пленума ассоциации инфекционистов «Управляемые инфекции»- Ивано-Франковск , 2003.
102. Прокопчук З.Н. Антимикробные, физико-химические свойства суппозиториев Десептол на гидрофильной основе // Провизор. - 1999. - № 10. - С.47-48.
103. Пропокчук З.М. Антимікробні властивості Десептолу та фізико-хімічні властивості гідрофільної супозиторної основи // Експериментальна і клінічна медицина. - 1999. - № 2. - С.72-74.
104. Прокопчук З.М. Вивчення властивостей супозиторіїв з декаметоксином // Вісник Вінницького державного медичного університету. - 1998. - Т.2, № 2. - С.341-342.
105. Промислова технологія ліків: Підручник. У 2-х т. / В.І.Чуєшов, М.Ю.Чернов, Л.М.Хохлова та ін.; Під ред. В.І.Чуєшова. - Харків: Основа, Вид-цтво УкрФА, 2003. -Т.1. - 560 с.; Т.2. -704 с.
106. Протефлазид: Научно-практические рекомендации // НКП "Экофарм". - Киев, 2003.- 89 с.
107. Протефлазід у лікуванні генітального герпесу / Л.Л.Гармаш, С.К.Псюк, С.Г. Мазорчук та ін. // Імунологія та алергологія.- 2002.- № 3.-С.64-65.
108. Протефлазид в практике акушер-гинеколога // НКП «Экофарм». - К., 2004.- 16 с.
109. Разработка и практическое использование новых экспер