Мелихова Александра Вадимовна. Разработка технологии приготовления сухих дозированных форм комплексного иммуноглобулинового препарата

Краткое описание

Мелихова Александра Вадимовна. Разработка технологии приготовления сухих дозированных форм комплексного иммуноглобулинового препарата : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.06, 14.03.09 / Мелихова Александра Вадимовна; [Место защиты: Моск. науч.-исслед. ин-т эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского МЗ РФ]. - Москва, 2010. - 151 с. : ил. РГБ ОД,

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ
«МОСКОВСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ
ЭПИДЕМИОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ им. Г.Н.ГАБРИЧЕВСКОГО
ФЕДЕРАЛЬНОЙ СЛУЖБЫ ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗАЩИТЫ ПРАВ
ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА»
На правах рукописи
Je™
Мелихова Александра Вадимовна
Разработка технологии приготовления сухих дозированных форм комплексного иммуноглобулинового препарата
03.01.06. Биотехнология
^J 14.03.09. Клиническая иммунология, аллергология
см £ °
Ю Т~ Диссертация на соискание ученой степени
СЭ см кандидата биологических наук
О <=> СМ °°
Научные руководители:
^Э - доктор биологических наук, профессор - Алешкин В.А.
- доктор биологических наук, - Лютов А.Г.
Москва-2010

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 5
ГЛАВА 1. ИММУНОГЛОБУЛИНЫ, ИХ СВОЙСТВА И МЕТОДЫ
ВЫДЕЛЕНИЯ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1 Иммуноглобулиновые препараты в медицине 14
1.2. Физико-химические свойства иммуноглобулинов 20
1.3. Препаративные методы выделения иммуноглобулиновых
композиций, содержащих три основных класса
иммуноглобулинов IgG, IgA, IgM 26
1.3.1. Методы фракционирования неорганическими солями.. 26
1.3.2. Фракционирование органическими растворителями 28
1.3.3. Выделение иммуноглобулиновой фракции полимерами. 30
1.3.4. Метод ионообменной хроматографии 31

1.4. Стабилизация физико-химических и биологических свойств иммуноглобулиновых препаратов 32
1.5. Методы стерилизации иммунобиологических препаратов и способы инактивации вирусов 37
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 42
2.1. Материалы 42
2.1.1. Материалы и реактивы 42
2.1.2. Экспериментальные животные 44
2.2. Методы исследований 44
2.2.1. Иммунохимические методы 44
2.2.2. Химические методы 46
2.2.3. Физико-химические методы 46
2.2.4. Физические методы 49
2.2.5. Биологические методы 49
2.2.6. Планирование эксперимента и статистическая обработка результатов 52
2

ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ВЫДЕЛЕНИЯ ИММУНО -
ГЛОБУЛИНОВОЙ ФРАКЦИИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КИП 52
3.1. Сравнительная оценка качественного состава осадков Б и выбор критериев их пригодности в качестве исходного сырья
для получения КИП 53
3.2. Исследование эффективности фракционирования
иммуноглобулинов солями двухвалентных металлов 61
3.3. Разработка метода выделения очищенной иммуноглобули-
новой фракции с использованием сульфата меди 78
3.4. Определение содержания в препарате ионов меди 87
ГЛАВА 4. СТАБИЛИЗАЦИЯ СВОЙСТВ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ СУХИХ
ДОЗИРОВАННЫХ ФОРМ КИП 97
4.1. Влияние стабилизаторов на физико-химические и
биологические свойства КИП при сублимационном 98
обезвоживании
4.2. Оценка эффективности стерилизации КИП у-облучением 102
4.3. Приготовление твердых дозированных форм КИП 106
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ БЕЗВРЕДНОСТИ И ЭФФЕКТИВНОСТИ
ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ КИП ПО
5.1. Испытание токсичности препарата на мышах 110
5.2. Изучение безвредности и эффективности комплексного
иммуноглобулинового препарата на обезьянах 111
5.2.1. Испытание безвредности препарата на обезьянах 111
5.2.2. Изучение терапевтического эффекта КИП при лечении острой кишечной инфекции с диарейным
синдромом 117
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 125
ВЫВОДЫ 133
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 134
ПРИЛОЖЕНИЕ 145
з

СОКРАЩЕНИЯ

вич- вирус иммунодефицита человека
ГФ- Государственная фармакопея
жкт- желудочно-кишечный тракт
ИФА- иммуноферментный анализ
ИЭФ- иммуноэлектрофорез
кип- комплексный иммуноглобулиновый препарат
оки- острая кишечная инфекция
пэг- полиэтиленгликоль (полиэтиленоксид)
РАМН- Российская академия медицинских наук
РИД- радиальная иммунодиффузия
РПГА- реакция пассивной гемагглютинации
ФСП- фармакопейная статья предприятия
ФЭК- фотоэлектрокалориметр
ЭДТА - натриевая соль этилендиаминтетрауксуснои кислоты
HBsAg- поверхностный антиген вируса гепатита В
HCV- коронавирус человека
IgG- иммуноглобулин класса G
IgM- иммуноглобулин класса М
IgA- иммуноглобулин класса А
PBS- фосфатный буферный раствор
SC- секреторный компонент

4

ВВЕДЕНИЕ
В настоящее время клиницисты уделяют все больше внимания иммуноглобулиновым препаратам. Этому способствует постоянно регистрируемый рост иммунодефицитных состояний, вызываемых взаимодействием организма с внешней средой и процессом развития генофонда микроорганизмов [51]. Кроме того, применяемые в терапии острых и хронических инфекционных заболеваний химпотерапевтические препараты, в том числе антибиотики, обладают супрессорной активностью в отношении иммунной системы. Антибиотики угнетают фагоцитарную активность лейкоцитов и комплементарную активность сыворотки крови. Длительная и интенсивная антибиотикотерапия у ряда больных обусловливает развитие лекарственной резистентности возбудителей, дисбактериоза, кандидоза, аллергических реакций [57].
Важное значение в настоящее время приобрели инфекции, вызываемые условно-патогенными микроорганизмами, госпитальные инфекции, феномен суперинфицирования. По мнению клиницистов, будущее - за препаратами и схемами лечения, объединяющими в себе как специфическое действие на конкретный возбудитель, так и одновременное иммуномодулирующее действие [8]. Одним из наиболее перспективных направлений является разработка пероральных форм иммуноглобулиновых препаратов, так как данный способ введения имеет ряд преимуществ перед парентеральным [67,101]: непосредственная и быстрая доставка препарата в ЖКТ; простота введения; хорошая переносимость препарата; возможность добавления препарата в пищу; возможность увеличения объема вводимого препарата.
Комплексный иммуноглобулиновый препарат (КИП) для парентерального применения был разработан на базе лаборатории- биохимии МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского под руководством проф. Н. В. Холчева в 70-х годах. В 90-х годах В.А. Алешкиным была предложена концепция пероралыюго применения КИП, в соответствии с которой препарат используется для профилактики и терапии острых кишечных инфекций (ОКИ) и ряда других заболеваний [63, 39].
5

КРІП содержит три класса иммуноглобулинов G, А, М, что обеспечивает высокий терапевтический эффект при его оральном и ректальном применении, убедительно демонстрируемый клиницистами уже более 10 лет [57]. В связи с высоким уровнем заболеваемости ОКИ, участившимися тяжелыми и затяжными формами инфекционного процесса комплексный иммуноглобулиновый препарат используется все шире. Есть данные о том, что КИП эффективен не только для детей первых лет жизни, как считалось ранее, но и для взрослых [39].
Существующая технология производства КИП характеризуется длительностью, многостадииностью и имеет ряд недостатков, делающих се непригодной для приготовления твердых дозированных форм препарата. В частности, на стадии выделения иммуноглобулинов в качестве основного фракционирующего агента используется органический растворитель -хлороформ в концентрации, обусловливающей необходимость соблюдения особых условий, усложняющих проведение процесса. Сублимационное обезвоживание препарата в стеклянных флаконах чрезмерно продолжительно (до 2 суток) и не предусматривает возможности получения сухой субстанции КИП в количествах, необходимых для производства твердых дозированных форм (таблетки, капсулы).
В последние годы особое внимание уделяется биологической безопасности препаратов, получаемых из биологических жидкостей человека, и методам их стерилизации [70]. Наиболее экономически выгодным и наиболее щадящим из всех существующих методов стерилизации препаратов, по мнению ряда авторов, признан метод с использованием у-облучения [46]. Однако, отсутствуют сведения о возможности применения его для обработки сухого КИП.
Все вышеизложенное свидетельствует об актуальности проведения исследовательской работы по усовершенствованию технологии получения комплексного иммуноглобулинового препарата и создание новых лекарственных форм.
б

Цель исследования: разработка технологии получения сухой субстанции КИП, пригодной для создания твердых дозированных лекарственных форм препарата, и оценка терапевтической эффективности КИП в таблетках и капсулах на обезьянах, страдающих ОКИ.
Задачи исследования:
1. Предложить критерии оценки качества осадков "Б", получаемых на различных предприятиях по производству иммуноглобулина по методу Кона, как исходного сырья для приготовления КИП.
2. Изучить возможность использования солей двухвалентных металлов для выделения фракций, содержащих три основных класса иммуноглобулинов и предложить оригинальную технологию получения субстанции КИП.
3. Оценить возможность интенсификации процесса сублимационного обезвоживания КИП с подбором необходимых стабилизаторов для сохранности физических и биологических свойств полученного материала.
4. Исследовать возможность стерилизации субстанции КИП методом гамма-облучения, оценить его влияние на биологическую активность , микробиологическую чистоту и биологическую безопасность.
5. Изучить механическую устойчивость иммуноглобулинов в сухой субстанции и приготовить различные лекарственные формы препарата (во флаконах, таблетках и капсулах).
6. Провести оценку токсичности всех полученных лекарственных форм препарата КИП на мышах и изучить безвредность и лечебную эффективность на обезьянах, больных ОКИ.
Научная новизна
Впервые показано, что соли двухвалентных металлов могут быть использованы для одновременного выделения иммуноглобулинов трех основных классов IgG, IgA и IgM. При этом фракционирование возможно из концентрированных субстанций, к которым, в частности, относится осадок Б. Наиболее эффективным фракционирующим агентом с точки зрения полноты выделения антител и чистоты получаемой фракцииявляется сульфат меди.
7

Экспериментально обоснован выбор из ряда веществ различной природы (сахара, аминокислоты) стабилизирующих компонентов, определены их сочетания и концентрации, оказывающие наибольший защитный эффект от действия на иммуноглобулины неблагоприятных факторов технологических процессов переработки сухой субстанции КРІП, приготовления готовых форм препарата и их хранения.
Впервые показано, что повышение температуры греющей поверхности полки до 55°С на этапе сублимации влаги из лиофильно высушиваемого препарата не оказывает негативного влияния на специфические свойства иммуноглобулинов, что вносит коррективы в существующее представление об их слабой устойчивости к обезвоживанию.
Предложена стерилизация сухой субстанции КИП гамма-облучением. Доза поглощенной радиации 20 кГр вызывает, в зависимости от вида использованных защитных веществ, потерю антпсальмонеллезной активности иммуноглобулинов на 1-3 двукратных разведения и может приводить к изменению соотношения классов иммуноглобулинов. Наибольший защитный эффект оказывает комбинация 1% глицина и 2% глюкозы.
Впервые проведенные исследования по созданию твердых дозированных форм КИП дают представление о степени механоустойчивости антител в сухом состоянии. Установлено, что воздействие физико-механических факторов, возникающих в процессе разрушения сухой субстанции КИП при ее измельчении и в ходе прессования таблеточной смеси при изготовлении таблеток, сопровождается снижением специфической активности иммуноглобулинов не более чем на одно двукратное разведение, но не оказывает влияния на соотношение классов иммуноглобулинов в препарате.
В экспериментах на обезьянах, больных острой кишечной, инфекцией с диарейным синдромом, впервые показано, что разработанные твердые дозированные формы КИП - таблетки и капсулы обладают терапевтической эффективностью, не уступающей таковой препарата, выпускаемого в настоящее время в виде сухой массы во флаконах, и достоверно превосходят эффективность антибиотикотерапии.
8

Практическая значимость
Предложены критерии оценки осадков Б с целью их дополнительного использования в качестве сырья для производства комплексного иммуноглобулинового препарата.
Использование сульфата медп на стадии выделения иммуноглобулинов из осадка Б, как основного фракционирующего агента, а экстрагента липидов и липо протеидов - хлороформа в концентрации не более 1%, исключает необходимость соблюдения особых условий проведения процесса, что, в свою очередь, обеспечивает снижение трудоемкости и повышение рентабельности всей технологии приготовления препарата.
Экспериментально обоснованный выбор состава и концентрации защитных компонентов обеспечивает стабильность специфических свойств иммуноглобулинов во всех разработанных лекарственных формах препарата в течение более 2 лет хранения.
Интенсивность подвода тепла к высушиваемому препарату на этапе сублимации влаги позволяет сократить длительность не только этого этапа, но и всего процесса высушивания КИП в 2,7 раза до 14 часов.
Доказана принципиальная возможность использования у- стерилизации для иммуноглобулинсодержащих препаратов, что способствует расширению сферы применения данного метода.
Сухая субстанции КИП позволяет приготовить твердые дозированные формы препарата, что удобно в использовании и способствует расширению сферы его применения.
Лекарственные формы комплексного иммуноглобулинового препарата, приготовленные по разработанной технологии, показали эффективность лечения обезьян, больных диарейными заболеваниями, в питомнике ГУ НИИ медицинской приматологии РАМН: Рекомендованы проведения клинических испытаний готовых лекарственных форм комплексного иммуноглобулинового препарата - капсул, таблеток, флаконов на людях.
9

Внедрение результатов работы.
На базе лаборатории медицинской биотехнологии ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора разработаны и пригоговлены экспериментальные серии комплексного иммупоглобулинового препарата во флаконах, таблетках и капсулах.
На основании проведенных исследований оформлены шесть патентов на изобретения:
1. Патент РФ. № 2189833, А61К 39/395. Способ получения
иммуноглобулинового препарата / А.В. Зорик, В.А. Алешкин, А.Г. Лютов, И.В.
Борисова Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской
Федерации 19 октября 2000. Патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.
Габричевского Роспотребнадзора.
2. Патент РФ. № 2255766, МІЖ А61К 39/395. Способ получения иммуноглобулинового препарата для профилактики и терапии бактериальных и вирусных инфекций, иммуноглобулиновый препарат для профилактики и терапии бактериальных и вирусных инфекций (варианты) и суппозитории на основе иммуноглобулинового препарата / Алешкин В.А.. Новикова Л.И., Афанасьев С.С., Борисова И.В., Зуева М.М., Зорик А.В. . Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 5 марта 2003. Патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.
3. Патент РФ. № 2247578, МПК А61К 39/395. Состав, обладающий противомикробным действием / Мелихова А.В., Алешкин В.А., Давыдкин В.Ю., Давыдкин И.Ю., Афанасьев С.С., Борисова И.В., Рубальский О.В., Гаврин А.Г. (Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 10 марта 2005. Патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.
4. Патент РФ. № 2334503, МІЖ A61J 3/10. Способ таблетирования медицинских иммунобиологических препаратов / Давыдкин И.Ю., Алешкин В.А., Давыдкин В.Ю., Рубальский О.В., Гаврин А.Г., Мелихова А.В., Афанасьев С.С. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской
ю

Федерации 27 сентября 2008. Патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.
5. Патент РФ. № 2371200, МПК А61К 39/395. Способ получения иммуноглобулинового препарата / Мелихова А.В., Давыдкин В.Ю.. Алешкин В.А., Давыдкин И.Ю. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 27 октября 2009. Патентообладатель ФГУЫ МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.
6. Патент РФ. № 2371199, МПК А61К 39/395. Способ получения иммуноглобулинового препарата / Мелихова А.В., Давыдкин В.Ю., Алешкин В.А., Давыдкин И.Ю. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 27 октября 2009. Патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.
Результаты исследований используются в научно-практической работе ФГУН МНИИЭМ им.Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора.
Экспериментальные серии препаратов КИП прошли успешные испытания при лечении больных ОКИ обезьян в питомнике ГУ НИИ медицинской приматологии РАМН (г. Сочи - Адлер) под руководством академика РАМН, профессора Б.А. Лапина и доктора медицинских наук, профессора Э.К. Джикидзе. Акт о доклинических испытаниях от 9 апреля 2009 года.
Метод определения ионов меди используется в лаборатории медицинской биотехнологии ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора с 2001 года для определения качества комплексного иммуноглобулинового препарата.
Методика доклинических испытаний биопрепаратов, разработанная в ходе выполнения работы совместно с сотрудниками ГУ НИИ медицинской приматологии РАМН, легла в основу разработки «Новые алгоритмы доклинических испытаний неинъекционных иммунобиологических препаратов и БАД», награжденной серебряной медалью VII Московского международного салона инноваций и инвестиций на ВВЦ (Москва) в 2007 г.
п

Положения, выносимые на защиту:
1. Критериями качества осадков Б как сырья для производства
комплексного иммуноглобулииового препарата являются концентрации общего
белка и иммуноглобулинов, распределение иммуноглобулинов по классам IgG,
IgA, IgM, титр антител к сальмонеллам, а также производный показатель,
характеризующий долю иммуноглобулинов от общего белка.
2. Разработанный способ получения комплексного иммуноглобулииового
препарата включает последовательную обработку гомогенизата осадка Б (III
фракция по Кону) хлороформом и сульфатом меди, выделение
иммуноглобулиновой фракции методом ультрафильтрации в присутствии
комплексообразующего соединения с последующим концентрированием и
возможным осаждением фракции полиэтиленгликолем, растворение осадка
иммуноглобулинов, стабилизацию и стерилизующую фильтрацию. {
3. Сухая субстанция комплексного иммуноглобулииового препарата
пригодна для приготовления капсульной и таблстированной форм с
использованием метода стерилизации у-облучением.
4. Комплексный иммуноглобулиновый препарат во флаконах, таблетках и
капсулах, приготовленный по разработанной технологии с использованием в
качестве фракционирующего агента сульфата меди, нетоксичен, безвреден и
обладает терапевтическим эффектом при лечении острой кишечной инфекции с
диарейным синдромом у обезьян.
Апробация работы
Диссертация апробирована на заседании секции Ученого Совета ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора «Медицинская биотехнология», протокол № 3 от 10 июня 2009г.
Основные положения диссертационной работы доложены на: Российской конференции "Организм и окружающая среда: жизнеобеспечение и защита человека в экстремальных условиях", Москва; 2000; научно-практической конференции «Медицина будущего», Краснодар-Сочи, 2002; Международной научно-практической конференции памяти Г.И.Гончаровой «Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы
12

использования», Москва, 2002; IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва, 2002; 1-м международном Конгрессе «Биотехнология - состояние и перспективы развития», Москва, 2002; Третьей международной конференции, посвященной 80-летию института имени Пастера, «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями», Санкт-Петербург, 2003; Научно-практической конференции «Иммуноглобулиновые препараты энтерального и внутривенного применения», Москва, 2003; XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва, 2004; Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы совершенствования технологии производства и переработки продукции сельского хозяйства», Йошкар-Ола, 2005; Международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии в опытах на обезьянах», Сочи-Адлер, 2007.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 25 печатных работ, в том числе: 1 в издании, рекомендованном ВАК Российской Федерации, 2 - в периодических изданиях, 2 - в сборник научных трудов, 14 - в материалах конференций , 6 патентов на изобретение.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 152 страницах, состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Диссертация иллюстрирована 31 таблицей и 8 рисунками. Список литературы включает 159 работ, в том числе 102 - отечественных и 57 - иностранных авторов.
Выражаю благодарность за помощь в проведении исследований сотруднику КДЦ МИИИЭМ им. Г. Н. Габричевского Роспотребнадзора В.П. Насонову, сотрудникам лабораторий МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского Роспотребнадзора: иммунобиологических препаратов (руководитель Л.И. Новикова), биопрепаратов и лекарственных форм (руководитель В.М. Лахтин), клинической лаборатории (руководитель О.В. Логунов), а также сотрудникам лаборатории инфекционной патологии (руководитель Э.К. Джикидзе) НИИ медицинской приматологии РАМН (директор академик РАМН Б.А.Лапин).

Список литературы

выводы
1. Показано, что наиболее информативными критериями качества осадков Б
являются концентрации белка и иммуноглобулинов, отношение содержания
антител к общему белку, процентное распределение иммуноглобулинов по
классам IgG, IgA, IgM, а также титр антител к сальмонеллам.
2. Разработана технология получения комплексного иммуноглобулинового
препарата, основанная на последовательной обработке гомогенизированного
осадка Б хлороформом и раствором сульфата меди, очистке
иммуноглобулиновой фракции от низкомолекулярных примесей
ультрафильтрацией в присутствии комплексообразующего соединения с
последующим концентрированием и возможным осаждением
иммуноглобулиновой фракции полиэтиленгликолем, растворением осадка
иммуноглобулинов, стабилизацией и стерилизующей фильтрацией раствора КИП.
3. Доказана возможность интенсификации сублимационного обезвоживания
КИП с сокращением общей длительности процесса в 2,7 раза при использовании в
качестве стабилизаторов смеси глицина и глюкозы, что обеспечивает сохранность
физических и биологических свойств полученного материала и его пригодность
для приготовления флаконной, капсульной и таблеточной форм препарата.
4. Показано, что при стерилизации сухой субстанции комплексного
иммуноглобулинового препарата гамма-излучением при дозе облучения 20 кГр
препарат удовлетворяет всем требованиям ФСП 42-0381-3757-02.
5. Разработан технологический цикл приготовления таблеток
иммунологических препаратов, при котором воздействие физико-механических
факторов, возникающих в процессе разрушения сухой субстанции КИП при ее
измельчении и в ходе прессования таблеточной смеси, приводит к суммарному
снижению специфической активности иммуноглобулинов не более чем на 1
двукратное разведение.
6. Комплексный иммуноглобулиновый препарат, приготовленный по
экспериментальной технологии нетоксичен, безвреден и эффективен при лечении
острой кишечной инфекции у обезьян с диарейным синдромом.
133

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Ашмарин И. П., Васильев Н.Н., Амбросов В.А.Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. - Л; Издательство Ленинградского ун-та, 1974.-С.76
2. Ашмарин И. П., Воробьев А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л; Издательство Ленинградского ун-та, 1962.-С.179
3. Анастасиев В.В. Регуляция биологических систем. - Горький, 1990.
4. Байрушин Ф.Т. Разработка промышленной технологии получения нового лечебного препарата «Орозин»: Дне...канд. биол. наук: 14.00.36. - Уфа, 1995.-102с.
5. Бейли К., Нейрот Г. Белки. - М., 1996. - 4.2.
6. Березов Т.Т., Коровкии Б.Ф. Биологическая химия. - М., 1998.
7. Бекер М.Е. Биотехнология микробного синтеза. - Рига: Зина гне, 1980.

8. Биотехнология - основа лечебного и профилактического направлений здравоохранения / Алешкин В.А., Афанасьев С.С, Давыдкин В.Ю. и др. // Сб. материалов науч.-практич. конференции «Иммуноглобулиновые препараты энтерального и внутривенного применения» под ред. В.А. Алешкина и С.С. Афанасьева. Приложение к журналу « Вестник восстановительной медицины». -М., 2003. - С. 6-7.
9. Бланков Б.И., Клебанов Д.Л. Применение лиофилизации в микробиологии. -М.: Медгиз, 1961.
10. Большой энциклопедический словарь. Биология / Под ред. М. С.
Гилярова. - М.: Научное издательство «Большая Российская энциклопедия»,
1998.-С. 355.
11. Большой энциклопедический словарь. Химия / Под ред. И.Л. Кнунянц. -
М., 1998-С. 792.
12. Борисова И.В., Мухина Н.А. Получение и исследование
иммуноглобулинов из отходов производства препаратов крови // Сб. науч. тр.
«Препараты нормальных и специфических иммуноглобулинов человека» - М.,
1976.-Т. XVIII.-С. 69-78.
13. Борисова И.В. Содержание иммуноглобулинов в сыворотках крови и в
отходах производства у-глобулина (в осадке Б) // Сб. науч. тр. «Препараты
нормальных и специфических иммуноглобулинов человека». - М., 1976. -
T.XVIII. - С. 66-68.
14. Борисова И.В. Экспериментальные исследования по получению
комплексных препаратов иммуноглобулинов из сывороток плацентарной крови:
Дис....канд. биол. наук: 14.00.36.-М., 1979.
15. Бэйли Дж. Методы химии белков. - М.,1965.
134

16. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. - М.: Наука, 1972.
17. Влияние гамма-облучения на иммобилизированный трипсин / Рыльцев В.В., Власов Л.Г., Самойлова Т.И. и др. // Прикладная биохимия и микробиология. - 1984. - Т. 20, № 5. - С. 694-698.
18. Влияние гамма-излучения на компоненты вируса гепатита В и дельта-
антиген / Михайлов М.И., Самойленко И.И., Заиров Г.К., Ананьев В.А. //
Вопросы вирусологии. - 1987. - Т. 32, № 1. - С. 68-71.
19. Влияние гамма-облучения на ферментативную активность коллалитина
в процессе хранения / Белов А.А., Белова Л.А., Рыльцев В.В. и др. //
Радиобиология. - 1990. - Т. 30, № 4. - С. 519-521.
20. Влияние стабилизируемых добавок на антикомплементарную
активность иммуноглобулина / Доронина НА., Сарафанова Л.Н., Мигунов В.Н.
и др. // Сб. науч. тр. « Иммуноглобулины» Нижегородского мед. института под
ред. АнастасиеваВ.В. -Н. Новгород, 1993.
21. Волькенштейн М.А. Б ио неорганическая химия и молекулярная
биология // Молек.биол. - 1982. - № 5. - С. 901-902.
22. Воспаление // Руководство для врачей под ред. В. В. Серова, В. С. Паукова. - М., 1995г.
23. Временная инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения» при повышенной температуре. - М., 1983.
24. Гапонов К.П. Процессы и аппараты микробиологических производств. -Л.: Легкая и пищевая промышленность, 1981.
25. Голубев Л.Г., Сажин Б.С., Валашек Е.Р. Сушка в химико-
фармацевтической промышленности. -М.: Медицина, 1978.
26. Государственная фармакопея СССР X изд. - М.: Медицина, 1968.
27. Государственная фармакопея СССР. - 11-е изд. (репринтное) - Вып. 1,2. - М.: Медицина, 1998.
28. Даванков В.А., Навратил Дж. Уолтон. Лигандообменная хроматография.
-М., 1989.