Великорецкая Ирина Александровна Создание новых комплексных ферментных препаратов грибных протеаз на основе штамма Penicillium canescens для эффективной конверсии белоксодержащего растительного сырья

Краткое описание

Великорецкая Ирина Александровна Создание новых комплексных ферментных препаратов грибных протеаз на основе штамма Penicillium canescens для эффективной конверсии белоксодержащего растительного сырья

ОГЛАВЛЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

кандидат наук Великорецкая Ирина Александровна

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ

1.1 Протеолитические ферменты

1.1.1 Экзопептидазы

1.1.2 Эндопептидазы

1.2 Применение протеолитических ферментов при гидролизе растительного белоксодержащего сырья

1.2.1 Основные виды белоксодержащего растительного сырья

1.2.1.1 Характеристика зернового сырья

1.2.1.2 Характеристика бобового сырья

1.2.2 Применение протеолитических ферментов при переработке растительного сырья

1.3 Грибные продуценты протеаз

1.4 Подходы к получению грибных рекомбинантных продуцентов

1.4.1 Использование мицелиальных грибов для продукции рекомбинантных белков

1.4.2 Создание экспрессионной системы на основе штамма Р. canescens

1.4.2.1 Выбор селективного маркера для штамма Р. canescens

1.4.2.2 Идентификация и выделение сильных промоторов для экспрессии генов

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

2 ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И МЕТОДЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ

2.1 Штаммы-микроорганизмы

2.2 Используемые плазмидные конструкции

2.3 Получение плазмидных конструкций

2.4 Получение протопластов и трансформация реципиентного штамма

2.4.1 Получение компетентных клеток реципиентного штамма Р. canescens RN3-11-7 таП

2.4.2 Трансформация

52

2.4.3 Рассев протопластов на агаризованные среды

2.5 Среды для культивирования штаммов

2.6 Ферментные препараты

2.7 Субстраты

2.8 Определение активности ферментов

2.9 Определение концентрации белка

2.10 Электрофорез в полиакриламидном геле

2.11 Определение рН- и температурных оптимумов ферментных препаратов

2.12 Определение термостабильности ферментных препаратов

2.13 Анализ компонентного состава ферментных препаратов

2.14 Методы анализа сусла и бражки

2.15 Структура экспериментальных исследований

3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Получение рекомбинантных штаммов

3.1.1 Создание продуцента пенициллопепсина - трансформация штамма Р. canescens КЫ3-П-7 niaD' плазмидой pPrXEG_PEP

3.1.2 Создание продуцента пенициллопепсина и лейцинаминопептидазы -котрансформация штамма Р. canescens КЫ3-П-7 niaD' плазмидами pPrXEG_PEP и рРгАЬ^ар

3.1.3 Создание продуцента комплекса протеаз - котрансформация штамма Р. canescens КЫ3-П-7 niaD- плазмидами pPrXEG_alcPr_Aor, pPrXEG_PEP и

рРгАЬ^ар1

3.1.3.1 Оптимизация методики электрофоретического анализа культуральной жидкости трансформантов Р. canescens, имеющих активность сериновой протеазы

3.1.4 Создание продуцента сериновой протеазы - трансформация штамма Р.

canescens КЫ3-П-7 niaD' плазмидой pPrXEG_alcPr_Aor

3.1.4.1 Профили рН- и температурной зависимости активности сериновой протеазы штамма Р. canescens 0^т-25

3.1.4.2 Индукция биосинтеза сериновой протеазы штаммом P. canescens Oryzin-

25 при глубинном культивировании

3.1.5 Исследование стабильности полученных рекомбинантных штаммов при последовательных пересевах

3.2 Получение сухих ферментных препаратов на основе новых рекомбинантных штаммов P. canescens

3.2.1 Получение сухого ферментного препарата пенициллопепсина на основе штамма P. canescens Pep-4

3.2.2 Получение сухого ферментного препарата пенициллопепсина и лейцинаминопептидазы на основе штамма P. canescens RN3-11-7-7

3.2.3 Получение сухих комплексных ферментных препаратов протеаз на основе рекомбинантных штаммов P. canescens

3.3 Масштабирование процесса культивирования рекомбинантных штаммов в условиях промышленного производства

3.4 Свойства и состав ферментных препаратов, полученных с помощью новых рекомбинантных штаммов P. canescens

3.4.1 рН и температурные оптимумы целевых активностей

3.4.2 Термостабильность ферментов

3.4.3 Компонентный состав ферментных препаратов

3.5 Прикладные испытания новых ферментных препаратов, полученных с помощью рекомбинантных штаммов

3.5.1 Исследование эффективности применения ферментного препарата пенициллопепсина и лейцинаминопептидазы для интенсификации спиртового брожения

3.5.2 Результаты испытаний in vitro ферментного препарата Пенициллопепсина в качестве кормовой добавки на зерновом сырье

3.5.3 Результаты испытаний in vitro ферментных препаратов сериновой протеазы P. canescens в качестве кормовой добавки на соевом сырье

3.5.4 Результаты испытаний in vivo комплексных ферментных препаратов по влиянию на продуктивность и физиологическое состояние свиней при откорме

3.5.4.1 Расчет экономической эффективности производства свинины с

использованием новых ферментных препаратов в составе комбикормов

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ