УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ МИКОБАКТЕРИЙ : УДОСКОНАЛЕННЯ ДІАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЬОЗУ ВЕЛИКОЇ РОГАТОЇ ХУДОБИ ТА МЕТОДИЧНІ ПІДХОДИ ОДЕРЖАННЯ ВАКЦИННИХ ШТАМІВ МІКОБАКТЕРІЙІ

Краткое описание

Харьковская государственная зооветеринарная академия
и Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медицины

На правах рукописи

Кочмарский Виктор Андреевич
УДК 619:616.98.579.873.21.636.2

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ДИАГНОСТИКИ
ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
И МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ
ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ МИКОБАКТЕРИЙ

16.00.08 - эпизоотология и инфекционные болезни

Диссертация на соискание ученой степени
доктора ветеринарных наук

Харьков 2003

СОДЕРЖАНИЕ

В В Е Д Е Н И Е 6
РАЗДЕЛ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...................................................................... 16
1.1. Сведения о возбудителях туберкулеза..................................................... 16
1.2. Распространение туберкулеза среди крупного рогатого скота,
его эпидемиологическое значение и причиняемый им
экономический ущерб................................................................................ 20
1.3. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота............................ 27
1.3.1. Эпизоотологический метод.................................................................... 27
1.3.2. Клинический метод................................................................................. 28
1.3.3. Аллергический тест................................................................................. 28
1.3.4. Серологический метод........................................................................... 38
1.3.5. Патологоанатомический и гистологический методы диагностики....... 39
1.3.6. Бактериологическая диагностика........................................................... 42
1.3.6.1. Методы идентификации культур атипичных микобактерий............... 46
1.4. Методы борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота.................... 47
1.4.1.Специфическая профилактика туберкулеза животных........................... 52
РАЗДЕЛ 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ............................................... 57
2.1. Материалы и методы исследований........................................................ 57
2.2. Изучение распространения туберкулеза крупного рогатого скота
в хозяйствах Харьковской области........................................................ 66
2.3. Результаты послеубойного контроля эпизоотической ситуации
по туберкулёзу крупного рогатого скота на мясокомбинатах.......... 89
2.4. Результаты контроля за благополучием хозяйств по
туберкулёзу крупного рогатого скота с использованием
туберкулина для млекопитающих в различных дозах........................... 99
2.5. Изучение эффективности симультанной аллергической пробы
у крупного рогатого скота..................................................................... 109
2.6. Разработка метода дифференциальной диагностики туберкулеза
у крупного рогатого скота..................................................................... 112
2.7. Изучение внутрикожной туберкулиновой пробы в
области подхвостовой складки у крупного рогатого скота............. 117
2.8. Разработка способа диагностики туберкулеза у телят....................... 124
2.8.1. Сравнительная оценка туберкулинового теста в области шеи
и подхвостовой складки у телят........................................................... 124
2.8.2. Изучение эффективности туберкулинового теста в подхвостовой
складке и в области лопатки у телят.................................................... 126
2.9. Изучение влияния туберкулина на организм, введенного
в эпидуральное пространство телятам, привитых
атипичными микобактериями и вакциной БЦЖ132

2.9.1. Изучение влияния КАМа на организм, введенного
в эпидуральное пространство телятам, сенсибилизированных
атипичными микобактериями.............................................................. 136
2.9.2. Определение диагностической ценности эпидурального метода
на крупном рогатом скоте, пораженном возбудителем туберкулеза
бычьего вида........................................................................................ 138
2.10. Изучение культур микобактерий, выделенных от убитого
крупного рогатого скота..................................................................... 144
2.10.1.Разработка метода дифференциации M.avium от M.intracellulare......... 145
2.10.2.Разработка способа идентификации M.triviale..................................... 148
2.10.3.Определение групповой и видовой принадлежности у культур
атипичных микобактерий.................................................................... 152
2.11. Изучение культур микобактерий, выделенных от больных
туберкулезом работников животноводства Харьковской области 159
2.12. Изучение лекарственной устойчивости у культур
микобактерий, выделенных от больных людей, крупного
рогатого скота и объектов внешней среды..161
2.13. Изучение возможности использования телят для
воспроизводства стада, полученных от реагирующих на
туберкулин коров в благополучном по туберкулезу хозяйстве...... 169
2.14. Теоретические подходы к усовершенствованию способа
получения аттенуированных штаммов для активной
профилактики туберкулеза крупного рогатого скота .169
2.14.1. Разработка питательной среды для аттенуации эпизоотических
культур возбудителя туберкулеза бычьего вида................................ 175
2.14.2. Способ получения аттенуированных штаммов
микобактерий туберкулеза для приготовления вакцины.................. 178
2.15. Характеристика основных свойств аттенуированного штамма
М-Украина”........................................................................................... 187
2.15.1. Морфологические, тинкториальные, культуральные и
биохимические свойства.................................................................... 187
2.15.2. Изучение у штамма М-Украина” химических свойств и
физико-химической структуры антигенов...189
2.15.3. Комиссионное испытание безвредности штамма М-Украина”
на морских свинках........................................................................... .195
2.15.4. Изучение реверсии у штамма М-Украина” при культивировании
in vitro и при пассаже in vivo на морских свинках............................... 197
2.15.5. Изучение срока персистирования штамма М-Украина” в
организме морских свинок................................................................ 199
2.15.6. Комиссионное испытание протективной активности штамма
М-Украина” на морских свинках в сравнении с вакциной БЦЖ...... 203
2.16. Разработка метода биологического контроля качества
питательных сред................................................................................... 209

2.17. Разработка питательной среды для бактериологической
диагностики туберкулеза...................................................................... 212
2.18. Изучение бактерицидных свойств у препаратов для
обезвреживания возбудителя туберкулеза во внешней среде.......... 216
2.18.1. Краткая характеристика бактерицидных композиций........................ 219
РАЗДЕЛ 3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ................ 222
В Ы В О Д Ы.................................................................................................. 247
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ............................................................. 250
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ.............................................. 252
П Р И Л О Ж Е Н И Е А..................................................................................... 311
П Р И Л О Ж Е Н И Е Б...................................................................................... 336

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АТМ - атипичные микобактерии;
ВНИИГПЭ - Всесоюзный научно-исследовательский институт
государственной патентной экспертизы;
КАМ - комплексный аллерген из атипичных микобактерий;
К-ВО - количество;
МЕ - международные единицы;
НИЦПЭ - научно-исследовательский центр патентной экспертизы
Украины;
ППД - сухой очищенный туберкулин для млекопитающих
(протеин пурифиед дериват);
СНГ - содружество независимых государств.

В В Е Д Е Н И Е

Актуальность темы. Несмотря на достигнутые значительные успехи в изучении возбудителя туберкулеза, путей заноса его в хозяйства, факторов, способствующих распространению заболевания, многие аспекты этой сложной проблемы изучены недостаточно и туберкулез крупного рогатого скота в Украине не ликвидирован. Имеющиеся очаги инфекции создают постоянную угрозу заноса возбудителя в благополучные хозяйства и представляют большую опасность заражения людей [8, 361, 428, 547, 555 и др.]. При этом проблема профилактики туберкулеза, купирования и ликвидации эпизоотических очагов еще далека от решения и приобретает особое значение в новых условиях ведения животноводства, когда животные изолированы от природной среды, а интенсивная эксплуатация их снижает резистентность. Кроме того, большая концентрация животных способствует передачи возбудителя туберкулеза и представляет угрозу заноса этилогического фактора в благополучные стада. Нередки случаи заболевания туберкулезом животных даже в областях, считавшихся свободными по данной инфекции, а новые экономические отношения создали дополнительные проблемы в ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота.
Одной из важных проблем в современных условиях ведения животноводства является разработка эффективных методов контроля за благополучием хозяйств по туберкулезу крупного рогатого скота. В этом направлении отечественными и зарубежными исследователями установлено, что послеубойная информация на мясокомбинатах может быть полезной для выявления распространения туберкулеза среди животных в регионе [54, 59, 149, 395, 465, 479, 489, 569 и др.].
Однако этот вопрос в специальной литературе недостаточно освещен и требует проведения более углубленных исследований.
Главным звеном в системе мер профилактики и борьбе с туберкулезом крупного рогатого скота является своевременная и эффективная диагностика. У крупного рогатого скота для массовой прижизненной диагностики туберкулеза используют внутрикожную туберкулиновую пробу. Однако в последние годы во многих благополучных по туберкулезу хозяйствах выявляют реагирующих на туберкулин животных, у которых при послеубойном исследовании во внутренних органах не выявляют характерных для туберкулеза поражений, а бактериологическим исследованием биоматериала от убитых животных получают отрицательный результат или выделяют атипичные микобактерии. При этом широкое распространение неспецифических реакций у крупного рогатого скота на Украине усложнило проведение аллергической диагностики туберкулеза у животных [96, 149, 191, 305, 342, 364 и др.]. Это дало основание для многих исследователей к изысканию различных диагностических комплексов, позволяющих при жизни определить причину сенсибилизации организма к туберкулину. С этой целью применяют симультанную аллергическую пробу с использованием туберкулина для млекопитающих и комплексного аллергена из атипичных микобактерий [345]. Однако диагностическая эффективность этой пробы на Украине недостаточно изучена и она не во всех случаях показывает достоверный результат [70], поэтому появилась острая необходимость ее усовершенствовать.
Существенным недостатком туберкулиновой пробы в области средней трети шеи является появление внутрикожных аллергических реакций на туберкулин у здоровых и отсутствие ее у больных туберкулезом животных. В этом направлении одним из перспективным и неизученным местом введения туберкулина при диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота является кожа подхвостовой складки. Кроме того, не изучено влияние туберкулина для млекопитающих (ППД), введенного в эпидуральное пространство, на организм крупного рогатого скота, сенсибилизированного атипичными микобактериями, вакциной БЦЖ и пораженного возбудителем бычьего вида с целью отбора животных для проведения диагностического убоя.
Недостаточно изучены свойства атипичных микобактерий, имеющих значения для дифференциации их на различные группы и виды. Не разработан в ветеринарной медицине метод аттенуации патогенных свойств у эпизоотических культур возбудителя бычьего вида для получения новых высокоиммуногенных штаммов с целью специфической защиты животных.
Связь работы с научными программами, планами, темами. Работа по теме диссертации проводилась с 1985 по 1998 гг. в ИЭКВМ, а с 1998 по 2001 гг. в ХЗВИ, входила в общий план научных исследований институтов: ”Изучить роль атипичных микобактерий в этиологии заболевания животных и их дифференциацию от возбудителя туберкулеза, выдать минсельхозу СССР соответствующие рекомендации”, Разработать и внедрить эффективные методы и средства диагностики и профилактики туберкулеза человека и животных”, Разработать методы специфической профилактики туберкулеза”, Изучить особенности иммунной реактивности, патогенез, инфекционный и эпизоотический процесс у животных, пораженных микобактериями различной биологической активности” и имеет регистрационные номера №01890059896, №А01009825Р, №0197U000755 и №0199U002212.
Цель и задачи исследований. Основной целью исследований было усовершенствовать существующие и разработать новые более эффективные методы диагностики туберкулеза крупного рогатого скота, изучить особенности течения эпизоотического процесса в хозяйствах Харьковской области, а также теоретически и экспериментально обосновать способ получения аттенуированных штаммов с высокими протективными свойствами для специфической профилактики туберкулеза у крупного рогатого скота.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить зональные особенности распространения туберкулеза крупного рогатого скота в хозяйствах Харьковской области.
2. Определить эффективность системы контроля эпизоотической ситуации по туберкулезу в хозяйствах с использованием результатов послеубойных исследований на мясокомбинатах.
3. Изучить диагностическую ценность туберкулина для млекопитающих в дозах 5 тыс. МЕ и 10 тыс. МЕ у крупного рогатого скота.
4. Разработать метод дифференциальной диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота.
5. Разработать способ диагностики туберкулеза у телят.
6. Изучить влияние туберкулина и КАМа на организм, введенных в эпидуральное пространство крупному рогатому скоту, сенсибилизированного атипичными микобактериями, вакциной БЦЖ с адьювантом и возбудителем туберкулеза бычьего вида.
7. Определить видовую принадлежность культур микобактерий, выделенных от реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота и больных туберкулезом работников животноводства.
8. Разработать методы дифференциации M.avium, M.intraccellulare и M.triviale.
9. Разработать способ и получить аттенуированный штамм из эпизоотической культуры возбудителя туберкулеза бычьего вида и изучить его биологические свойства.
10. Разработать способ биологического контроля качества питательных сред для культуральной диагностики туберкулеза у животных.
11. Разработать более эффективную питательную среду для бактериологической диагностики туберкулеза.
12. Изучить бактерицидные свойства у препаратов для обезвреживания возбудителя туберкулеза во внешней среде.
Объект исследования: крупный рогатый скот из благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйств.
Предмет исследования: возбудители туберкулеза бычьего, человеческого, птичьего видов и культуры атипичных микобактерий.
Методы исследования: эпизоотологический, клинический, аллергический, симультанная аллергическая проба, патологоанатомический и лабораторный методы исследования: микроскопический, бактериологический, биологический, гистологический и биохимический.
Научная новизна полученных результатов. Впервые на Украине установлено, что туберкулезу крупного рогатого скота в Харьковской области свойственны циклические изменения интенсивности эпизоотического процесса, а также имеет место стационарность проявления заболевания.
Впервые в СНГ установлено, что симультанная аллергическая проба с использованием туберкулина для млекопитающих и КАМ в области подхвостовой складки повышает эффективность дифференциальной диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота и позволяет быстрее определить эпизоотическую ситуацию по данному заболеванию в хозяйствах.
Получил дальнейшее развитие метод контроля за благополучием по туберкулезу крупного рогатого скота с использованием результатов послеубойных исследований на мясокомбинатах, являющихся в настоящее время наиболее эффективным и надежным при диагностики туберкулеза у животных.
Установлено, что аллергическую пробу в благополучных по туберкулезу хозяйствах необходимо рассматривать как предварительный тест для оценки степени сенсибилизации в стаде, дающий основание для проведения диагностического убоя с последующим отбором биоматериала для бактериологического исследования.
Впервые на Украине установлено, что туберкулиновый тест в области подхвостовой складки у взрослого крупного рогатого скота неблагополучных по туберкулезу хозяйствах превосходит внутрикожный тест в области шеи по чувствительности на 10,1%, а по специфичности на 7,1%.
Впервые в СНГ установлено, что разработанный метод диагностики туберкулеза у телят в области подхвостовой складки выявляет на 11,4% - 18,1% больше больных туберкулезом животных и является более специфичным, чем туберкулиновый тест в области лопатки.
Впервые установлено, что туберкулин для млекопитающих или КАМ, введенные в эпидуральное пространство телятам, сенсибилизированным атипичными микобактериями или вакциной БЦЖ с адьювантом, вызывают у них через 6-12 часов повышение температуры тела на 1,8-2,50 С от исходной.
Впервые установлено, что эпидуральным тестом в неблагополучном по туберкулезу хозяйстве у 55% животных, сенсибилизированных к туберкулину, выявили через 6-12 часов повышение температуры тела на 1,1-1,80 С от исходной, а послеубойным исследованием у 25% таких животных обнаружили в лимфатических узлах характерные для туберкулеза поражения.
Впервые установлена чувствительность у M.avium и M.triviale к 0,1% раствору синтайода, содержащегося в средах Левенштейна-Иенсена или Финн-2.
Впервые установлено, что усовершенствованная схема идентификации атипичных микобактерий позволяет быстрее и точнее определить групповую и видовую принадлежность у культур.
Установлена первичная лекарственная устойчивость у 18,7-31,2% культур бычьего вида, выделенных от убитого крупного рогатого скота и у 65,5-100% - птичьего вида и атипичных микобактерий II, III и IY групп по Раниону к противотуберкулезным препаратам: тубазид, ПАСК и стрептомицину.
Впервые установлено, что усовершенствованная питательная среда Павловского, содержащая перевар Хоттингера, глицерин и картофельный клин, обеспечивает быструю адаптацию и рост эпизоотических культур возбудителя туберкулеза бычьего вида, а также дает возможность проводить пассажи культур, не растущих на жидких питательных средах с эктерицидом.
Впервые получен аттенуированный штамм М-Украина” из эпизоотической культуры возбудителя туберкулеза бычьего вида, обладающий более высокими протективными свойствами, чем вакцина БЦЖ.
Впервые установлено, что аттенуированный штамм М-Украина” можно использовать для биологического контроля питательных сред, который безопасен для работающего персонала.
Впервые установлено, что на разработанной питательной среде для выделения культур микобактерий быстрее вырастает возбудитель туберкулеза и разработанная среда дешевле, чем среда Левенштейна-Иенсена.
Впервые установлена бактерицидная активность к возбудителю туберкулеза у препаратов №12, №52 , №62, которые перспективны для использования их как дезинфектантов.
Практическое значение полученных результатов. На основании проведенных исследований основные результаты диссертационной работы использованы при составлении Инструкции о мерах профилактики и оздоровлении животноводства от туберкулеза” и Наставления по диагностики туберкулеза животных и птиц”, утвержденные ГУВМ МСГП Украины, соответственно 15.03.94 г. и 26.05.94 г., а также разработаны:
· методические рекомендации по дезинфекции при туберкулезе животных, Харьков, 1987, 10с.;
· методические рекомендации по уточнению диагноза на туберкулез у крупного рогатого скота благополучных хозяйств и определению видовой принадлежности культур микобактерий, Харьков, 1987, 20с.;
· способ дифференциации M.avium от M.intracellulare, который внедрен в производство;
· питательная среда для выращивания возбудителя туберкулеза бычьего вида, на которую получен патент №18613 от 25.12.97 г.;
· способ диагностики туберкулеза у телят, на который получен патент №22739А от 7.04.98 г. Метод утвержден и рекомендован для внедрения в практику ветеринарной медицины научно-методическим Советом Департамента Украины (протокол №1 от 27 декабря 2001 г.);
· способ получения штаммов микобактерий туберкулеза для приготовления вакцин, на который из НИЦПЭ Украины получен патент №29711А от 15.11.2000г.;
· способ дифференциальной диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота, на который получен патент №28423А от 16.10.2000г. Метод утвержден и рекомендован для внедрения в практику ветеринарной медицины научно-методическим Советом Департамента Украины (протокол №1 от 27 декабря 2001 г.);
· вакцинный штамм М.bovis - М-Украина”, на который получен патент №24154А от 7.07.98 г.;
· способ определения селективной чувствительности питательных сред для выделения возбудителя туберкулеза, на который получен патент №28788А от 16.10.2000г.;
· питательная среда для выделения культур микобактерий, на которую получен патент №10272А от 25.12.96 г. На базе лаборатории изучения туберкулеза ИЭКВМ УААН организовано серийное производство питательной среды для обеспечения лабораторий ветеринарной медицины Украины;
· способ идентификации M.triviale, на который получен патент №31676А от 15.12.2000г;
· эпидуральный тест как дополнительный метод при отборе животных для проведения диагностического убоя на туберкулез;
· усовершенствованная схема определения групповой и видовой принадлежности у культур атипичных микобактерий.
Кроме того, рекомендуются для использовании в практике препараты №12, №52 , №62 для дезинфекции помещений при туберкулезе животных, а также нецелесообразно M.avium, как истинного возбудителя туберкулеза у птиц, относить к атипичным микобактериям Ш группы по Раниону. Предложенные разработки используются в учебном процессе на кафедрах микробиологии и эпизоотологии, а также на курсах повышения квалификации специалистов ветеринарной медицины.
Личный вклад диссертанта. Диссертант самостоятельно выполнил весь объем экспериментальной работы, статистическую обработку и провел анализ полученных результатов, за исключением материалов по разработке Методических рекомендаций по дезинфекции при туберкулезе животных”, Методических рекомендаций по уточнению диагноза на туберкулез у крупного рогатого скота благополучных хозяйств и определению видовой принадлежности культур микобактерий”, Способа дифференциации M.avium от M.intracellulare”, Питательной среды для выращивания возбудителя туберкулеза бычьего вида” и Питательной среды для выделения культур микобактерий” (совместно с докторами ветнаук Кассичем Ю.Я., Завгородним А.И. и кандидатами ветнаук Тихоновым П.М. и Калашник Н.В.), гистологических исследований патматериала от морских свинок (совместно с академиком Красниковым Г.А.), а также изучение у аттенуированного штамма М-Украина” химических свойств и физико-химической структуры антигенов в сравнении с исходной культурой возбудителя бычьего вида (совместно с канд. биологических наук Антоновым В.С. и Михайловой С.А.).
Апробация результатов работы. Основные материалы диссертации доложены и одобрены на:
· заседаниях и отчетных сессиях Ученого совета ИЭКВМ (Харьков, 1985 - 1998 гг.), а также на сесиях Ученого совета ХЗВИ (1998 2000гг.);
· 3 республиканской научно-практической конференция Современные проблемы профилактики зоонозных болезней и пути их решения” (Гродно, 1987 г.)
· межведомственной конференции Вопросы борьбы с туберкулезом людей и животных” (Ташкент, 1990 г.);
· конференции Проблемы научного обеспечения животноводства Молдавии” (Кишинев, 1990 г.);
· республиканской конференции Ветеринарная медицина, экономические, социальные и экологические проблемы (Харьков, 1990г.);
· всесоюзной научной конференции Повышение продуктивности сельскохозяйственных животных и современные меры борьбы с болезнями в условиях интенсивного ведения животноводства и создания фермерских хозяйств” (Харьков, 1991 г.);
· научно-практической конференции Биотехнология ветеринарных препаратов (Харьков, 1993 г.);
· научно-практической конференции Сохранность молодняка с/х животных - залог развития животноводства Украины” (Белая Церква, 1994 г.);
· республиканской научно-практической конференции Проблемы повышения продуктивности животных и эффективность их лечения (Днепропетровск, 1994 г.);
· международной научной конференции Общая эпизоотология: иммунологические, экологические и методологические проблемы” (Харьков, 1995г.);
· международной научно-практической конференции Развитие ветеринарной науки на Украине: достижения и проблемы” (Харьков, 1997г.).
Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 40 работ, получены одно авторское свидетельство и 8 патентов. Из них 24 работы опубликованы в научных сборниках по специальности, утвержденных ВАК Украины.

Список литературы

В Ы В О Д Ы

1. В диссертации теоретически и экспериментально обоснованны необходимость разработки новых, усовершенствование существующих методов диагностики туберкулеза крупного рогатого скота и методических подходов получения аттенуированных штаммов с высокими протективными свойствами для специфической профилактики туберкулеза у крупного рогатого скота; установлено, что заболеванию туберкулезом крупного рогатого скота в хозяйствах Харьковской области свойственны волноподобные изменения интенсивности течения эпизоотического процесса, а также стационарность проявления заболевания.
2. Аллергическую пробу в благополучных по туберкулезу хозяйствах необходимо рассматривать как предварительный тест для оценки степени сенсибилизации в стаде, дающий основание для проведения диагностического убоя с последующим отбором биоматериала для бактериологического исследования.
3. Внедренная нами на мясокомбинатах система контроля эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота является наиболее надежной для получения достоверной информации в новых экономических условиях животноводства. С помощью данной системы диагноз туберкулез крупного рогатого скота был поставлен в 96,4% случаев на основании выявленных у животных характерных для туберкулеза поражений. Результаты послеубойных исследований необходимо использовать не только при планировании профилактических и оздоровительных мероприятий по туберкулезу, но и для прогнозирования эпизоотической ситуации.
4. Применение туберкулина в дозе 5000 МЕ для контроля за благополучием по туберкулезу в стадах уменьшает выделение животных с неспецифическими реакциями, однако эта доза не исключает появление таких реакций у крупного рогатого скота, что свидетельствует о необходимости ее совершенствования.
5. Разработанный метод дифференциальной диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота позволяет быстрее выяснить эпизоотическую ситуацию по туберкулезу в хозяйствах, предотвратить от необоснованного убоя высокопродуктивных здоровых животных, уменьшить расходы дефицитного КАМа, а также потерь и затрат, связанных с проведением диагностических мероприятий в хозяйствах.
6. При оздоровлении неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйств необходимо использовать туберкулиновый тест в области подхвостовой складки у взрослого крупного рогатого скота, который превосходит внутрикожную пробу в области шеи по чувствительности на 10,1%, а по специфичности - на 7,1%.
7. Разработанный метод прижизненной диагностики туберкулеза у телят в области подхвостовой складки на 11,4-18,1% больше выявляет больных туберкулезом животных и является более специфичным, чем туберкулиновый тест в области лопатки.
8. Комплексный аллерген из атипичных микобактерий, введенный в эпидуральное пространство телятам, сенсибилизированным атипичными микобактериями видов M.scrofulaceum и M.intracellulare с адъювантом, вызывает у отдельных животных через 6-9 часов повышение температуры тела на 1,8-2,50С. При этом наиболее высокую температурную реакцию организма наблюдали у телят, привитых M.intracellulare, что свидетельствует о более сильной биологической активности данного вида.
9. Туберкулин, введенный в эпидуральное пространство телятам, привитых M.scrofulaceum, М.intracellulare и вакциной БЦЖ с адьювантом, вызывает у них через 3-12 часов повышение температуры тела на 0,8 - 2,50С. При этом на гомологичный аллерген выявлено большее количество животных с повышенной температурой тела, что свидетельствует о высокой видовой специфичности аллергии.
10. Эпидуральным тестом в неблагополучном по туберкулезу хозяйстве у 55% животных, сенсибилизированных к туберкулину, выявили через 6-12 часов повышение температуры тела на 1,1-1,80С от исходной. Из них у 25% животных послеубойным исследованием обнаружили характерные для туберкулеза поражения во внутренних органах.
11. Разработанный культуральный тест с 0,1% синтайодом можно использовать не только для дифференциации M.avium от M.intracellulare, но и в комплексе с биопробой для идентификации M.triviale. Использование разработанного теста в схеме по идентификации культур атипичных микобактерий, позволяет быстрее и более точно определить видовую принадлежность у культур.
12. Выявлена первичная лекарственная устойчивость к противотуберкулезным препаратам: тубазид, ПАСК и стрептомицин у 18,7%-31,2% культур бычьего вида и у 65,5%-100% - птичьего и атипичных микобактерий II, III и IY групп по Раниону.
13. На усовершенствованной питательной среде Павловского хорошо растут эпизоотические культуры возбудителя туберкулеза бычьего вида и для этого не требуется длительного времени на их адаптацию.
14. Впервые разработан способ получения вакцинных штаммов микобактерий из эпизоотических культур возбудителя туберкулеза бычьего вида, а полученный этим методом штамм М-Украина” обладает высокими иммуногенными свойствами, чем вакцина БЦЖ.
15. Усовершенствованный метод биологического контроля качества питательных сред безопасен для работающего персонала и повышает эффективность культуральной диагностики туберкулеза у животных.
16. Разработанная новая питательная среда для культуральной диагностики туберкулеза более элективна, в 25 раз дешевле, чем среда Левенштейна-Иенсена и не требует дорогостоящих химреактивов.
17. Установлена бактерицидная активность к возбудителю туберкулеза у препаратов №12, №52 и №62, которые в два раза дешевле существующих дезинфектантов и их можно приготовить из местного сырья.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании проведенных исследований разработаны, внедрены и рекомендуются в практику:
1. Основные результаты диссертационной работы использованы при составлении Инструкции о мерах профилактики и оздоровления животноводства от туберкулеза” и Наставления по диагностике туберкулеза животных и птиц”, которые утверждены ГУВМ МСГП Украины соответственно 15.03.1994 г. и 26.05.1994 г.
2. Методические рекомендации по дезинфекции при туберкулезе животных. Харьков, 1987, 10 с.
3. Методические рекомендации по уточнению диагноза на туберкулез у крупного рогатого скота благополучных хозяйств и определению видовой принадлежности культур микобактерий. Харьков, 1987, 20 с.
4. Способ дифференциации M.avium от M.intracellulare (автор.свидетельство №1666530 от 1.04.1991 г.).
5. Питательная среда для выращивания возбудителя туберкулеза бычьего вида (патент №18613 от 25.12.97 г.).
6. Методические рекомендации по аллергической диагностике туберкулеза у телят (патент №22739А от 7.04.98 г.). Научно-методический Совет Департамента Украины утвердил для использования в практике ветеринарной медицины (протокол №1 от 27.12.2001г.).
7. Способ получения штаммов микобактерий туберкулеза для приготовления вакцин (патент №29711А от 15.11.2000г.).
8. Вакцинный штамм M.bovis - М-Украина” с высокими иммуногенными свойствами (патент №24154А от 7.07.98 г.).
9. Методические рекомендации по использованию ускоренного метода дифференциальной диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота (патент №28423А от 15.12.2000г.). Научно-методический Совет Департамента Украины утвердил для использования в практике ветеринарной медицины (протокол №1 от 27.12.2001г.).
10. Способ определения селективной чувствительности питательных сред для выделения возбудителя туберкулеза (патент №28788 от 16.10.2000г.).
11. Способ идентификации M.triviale (патент №31676А от 15.12.2000г.).
12. Эпидуральный тест как дополнительный метод при отборе животных для проведения диагностического убоя на туберкулез.
1. Усовершенствованная схема определения групповой и видовой принадлежности у культур атипичных микобактерий.
2. Питательная среда для выделения культур микобактерий (патент №10272А от 25.12.96г.).
3. Препараты №12, №52 и №62 использовать для дезинфекции помещений при туберкулезе животных.
4. Нецелесообразно M.avium, как истинного возбудителя туберкулеза у птиц, относить к атипичным микобактериям III группы по Раниону.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Абрамов Л. П. Материалы по аллергической диагностике туберкулеза у крупного рогатого скота // Сб. науч. тр./ Ленингр. ин-т усовершенствования врачей. Л., 1957. Вып. 11. С. 6880.
2. Авербах М. М., Гергерт В.Я. Туберкулино-провокационный тест в дифференциальной диагностике туберкулеза //Pneumol. Hung. 1976. N. 2. С.357.
3. Авербах М.М. Иммунология и иммунопатология туберкулеза М., 1976. 309с.
4. Авербах М.М., Литвинов В.И. Иммунология и иммуногенетика туберкулеза: состояние и перспективы развития исследований // Проблемы туберкулеза.- М., Медицина.- 1989.-№2.-С.65-68.
5. Авилов В.М., Пылинин В.Ф. Эпизоотическое состояние по туберкулезу в РСФСР и меры борьбы с болезнью // Ветеринария. М., Агропромизд.- 1992.- №1. С.39.
6. Александров Н. А. Эпизоотология туберкулеза крупного рогатого скота и организационные формы его искоренения в длительно неблагополучных хозяйствах северной зоны Нижнего Поволжья //Автореферат дис.д-ра вет.наук.-Саратов, 1972.- 34с.
7. Александров Н. А. Обоснование и опыт искоренения туберкулеза крупного рогатого скота методом замены. Саратов: Изд-во Сарат. ин-та, 1975. 57 с.
8. Александров Н. А. Противотуберкулезные мероприятия в животноводческих хозяйствах // Пробл. туберкулеза. 1975. N 6. С. 1517.
9. Александров Н. А. О периодичности активизации туберкулеза крупного рогатого скота в хозяйствах зоны длительного неблагополучия // Тр. / Сарат. НИВС. Саратов, 1976.Вып. 10. С. 2229.
10. Александров Н. А. О некоторых причинах своеобразия внутрикожных туберкулиновых проб у крупного рогатого скота длительно неблагополучных хозяйств// Прогнозирование и организация мер борьбы с болезнями с.-х. животных: Тр. / Сарат. НИВС. Саратов, 1977. Вып. 11. С. 1324.
11. Александров Н. А. К вопросу диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в длительно неблагополучных хозяйствах // Тр. / Сарат. НИВС. Саратов, 1978. Вып.12. С. 3340.
12. Александров Н. А. О латентном течении туберкулеза крупного рогатого скота в хозяйствах зоны длительного неблагополучия // Тр. / Сарат. НИВС. Саратов, 1980. Вып.14. С. 718.
13. Александров И.Д., Хабузов И.П., Ладан Н.С. Т и В активины и протективные свойства вакцины БЦЖ // Ветеринария. М.-Колос.- 2000.- N 1. С. 23-29.
14. Алиев А.И., Халиков М.Х. Система мер по охране благополучия молочных ферм от туберкулеза // Сб. науч. труд. северо- кавказского зонального НИВИ. Новочеркаск. 1984. т.15. С.3 7.
15. Аликаева А. П. Упрощенный метод выделения и выращивания чистых культур туберкулезных бацилл из патологического материала // Сов. ветеринария. 1940. N 1112. С. 4748.
16. Аликаева А. П., Жерносек Т. П. Упрощенный метод типирования туберкулезных культур // Ветеринария. 1950. N 4. С. 56.
17. Аллергическая диагностика туберкулеза / В. П. Урбан, М. М. Широбокова, Ю.Ю. Данко и др. // Профилактика ликвидации заразных болезней с.-х. животных. Л., 1985. С. 8085.
18. Аллергическая диагностика туберкулеза у крупного рогатого скота / В.П.Урбан, М. М. Широбокова, Г.М. Громова. // Сб. науч. тр. / Ленингр. вет. ин-т. Л., 1977. Вып. 48. С. 6872.
19. Аллергические реакции у крупного рогатого скота туберкулезного изолятора / В. П. Урбан, М. М. Щербакова, А.П. Зубков, Н. М. Калишин // Сб. работ / Ленингр. вет. ин-т. Л., 1969. Вып. 30. С. 8387.
20. Антынович А. Борьба с туберкулезом животных в Польше // Ветеринария. 1972. N 9. С. 115116.
21. Артюх И. А., Осташевский А. Б., Гурова Е. И. Об эффективности пастеризации молока в хозяйствах, неблагополучных в отношении бруцеллеза и туберкулеза //Вопр. питания. 1956. Вып. 15, N 2. С. 3844.
22. Архипова О. П., Горшков М. А. Дезинфекция в паровых камерах мягкого инвентаря, зараженного туберкулезной палочкой // Тр. / Центр. НИ дезинфекц. ин-т. М., 1956. Т. 9. С. 96100.
23. Архипова О. П. Дезинфекция при туберкулезе // Многотомное руководство по туберкулезу. М., 1962. С. 427444.
24. Асатиани В. С. Биохимическая фотометрия. 1957. 47 с.
25. Ашилова К.К. Патоморфологические изменения при экспериментальном туберкулезе у морских свинок, обработанных циклофосфаном //Бюллетень ВИЭВ,-М.,- 1987. -Вып.67. С.46 48.
26. Ашмарин И. П., Воробьев А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз, 1962. 180 с.
27. Бакулов И. А. Заразные болезни диких животных // Вет. газета. 1997. N6. С.7.
28. Батуро А. П. Дифференциация атипичных штаммов микобактерий и кислотоустойчивых сапрофитов при помощи внутрикожной пробы на морских свинках // Проб. туберкулеза. 1964. N 6. С.7174.
29. Благодарный А. Я. Туберкулез как антропозооноз. Алма-Ата: Кайнар, 1972.200 с.
30. Благодарный А. Я. Источники туберкулеза и меры профилактики. Алма-Ата: Кайнар, 1980. 250 с.
31. Бойко А. А. О задачах ветеринарии в усовершенствовании мероприятий по искоренению инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных // Уч. зап./ Казан. вет. ин-т. Казань,1964. Т. 90. С. 2437.
32. Бокун А. О., Кудашкин И. Т. Чувствительность крупного рогатого скота к туберкулину// Ветеринария. 1978. N 8. С. 4348.
33. Бондарь В.М., Федюк И.Д. Неспецифические аллергические реакции при исследовании крупного рогатого скота на туберкулез // Тезисы докладов конференции 25 мая 1990.- Кишинев.- С.107-108.
34. Буряк Е. И. Изучение титра гуморальных антител при серологической диагностике туберкулеза крупного рогатого скота : Дис. ... канд. вет. наук. Одесса, 1969. 250 с.
35. Буряк Є.І. Порівняльне вивчення інтенсивності прояву внутрішкірної туберкулінової реакції і реакції мононуклеарів корів на туберкулін in vitro у хворих на туберкульоз корів // Міжвід. тематич. науковий зб. Ветеринарна Медицина. Київ. Урожай.- 1995.-вип.70.-С.36-40.
36. Бусол В. А., Коваленко А. М. Изучение иммуногенных свойств противотуберкулезных вакцинных препаратов // Общая эпизоотология: иммунол., экол. и методол. пробл.: Материалы междунар. науч. конф., 2022 сент. 1995 г. Х., 1995. С. 488494.
37. Василев В. Н. Микобактериозы и микозы легких. София, 1971. 383 с.
38. Василевский В. Н., Нечваль И. Т., Кованда С. И. К вопросу экономической эффективности оздоровления неблагополучных по туберкулезу ферм крупного рогатого скота // Сб. науч. тр. / Одес. с.-х. ин-т. Одесса, 1975. С.1418.
39. Васильченко Г. А. Аллергическая диагностика туберкулеза крупного рогатого скота // Науч.-техн. бюл. / ВАСХНИЛ; Сиб. отд-ние. Новосибирск, 1982. N 11. С. 910.
40. Васин А. В. Новые экспериментальные данные о значении нервной системы и факторов внешней среды в аллергической реактивности при туберкулезе // Докл. науч.-производ. конф./ Сарат. НИВС . Саратов, 1958. С.15-16.
41. Вейсфейлер Ю. К. Биология и изменчивость микобактерий туберкулеза и атипичных микобактерий. Будапешт, 1975. 335 с.
42. Вертелецкий Л. Л. Эпизоотическое состояние сельскохозяйственных животных по туберкулезу и паратуберкулезу и меры борьбы с ними в РСФСР// Пробл. борьбы с туберкулезом и паратуберкулезом с.-х. животных. Воронеж, 1965. С. 313.
43. Вершигора А. Е. Основы иммунологии. К., 1975 320 с.
44. Вишневский П. П. Сравнительная оценка термического, глазного и внутрикожного методов туберкулиновой диагностики // Тр. 1-го Всерос. вет. науч.-организац. съезда, 25.1Х 2.Х. 1926. М., 1927. Т. 2.- С. 225235.
45. Вишневский П. П. Серодиагностика туберкулеза у крупного рогатого скота с помощью реакции фиксации комплемента // Вет. дело.1929.N 6 (67). С.33-38; N 7 (68). С. 713; N 8 (69). С.3339.
46. Влияние изменчивости возбудителя на эпизоотический процесс при туберкулезе. / В.С.Федосеев, А.Н.Байгазанов, И.Н.Рубцова, Е.О.Омарбеков // Тезисы докладов ІІІ Всесоюзной конференции по эпизоотологии 24-26 сентября 1991.- Новосибирск.- С.151-152.
47. Внутривенная туберкулиновая проба дополнительный тест в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота /М. М. Григорьев, В.А.Сюсюкин, Г.А.Объедков и др. // Вет. наука производству: Межвед. сб. Минск, 1984. Вып. 22. С. 35.
48. Вопросы взаимосвязи туберкулеза животных и человека /А.Г.Хоменко, А.Я.Благодарный, Т. И. Козулицына и др. // Материалы всесоюз. науч. конф., Омск, 2023 мая 1980 г. Омск, 1980. С. 3941.
49. Вышелесский С. Н. Туберкулин и его применение в диагностике туберкулеза домашних животных.// Тр./ Гос. ин-т эксперим. ветеринарии. М., 1924. Т.2., Вып.1. С. 311.
50. Вышелесский С. Н., Бухтилов Ф.Н. О роли комплекса мероприятий в борьбе с туберкулезом крупного рогатого скота // Ветеринария. 1956. N 5. С. 2126.
51. Гаспарян Н.Г. Проблема типов туберкулезной палочки в Узбекистане. Ташкент, 1950. 183 с.
52. Гельберг С. И., Абрамович М. М. К вопросу о химической дезинфекции при туберкулезе // Пробл. туберкулеза. 1939. N 15. С. 2944.
53. Гельман Х. И. О свойствах туберкулина полученного из туберкулезных бацилл, выращенных на картофеле // Архив. биол. наук.1892. N 1. С. 138.
54. Говоров О. М., Кассіч Ю. Я., Сегал Л С. Нові дані про діагностику та засоби боротьби з туберкульозом великої рогатої худоби // Ветеринарія : Респ. міжвід. тематич. наук. зб. К., 1974. Вип. 37. С. 13-17.
55. Говоров А. М., Осташко Ф.И. Получение и производственное испытание сухого туберкулопротеина // Науч. тр. / УИЭВ.К.,1956. Т. 23. С. 101111.
56. Говоров А. М. Разработка мероприятий по специфической профилактике туберкулеза крупного рогатого скота // Науч. тр. УИЭВ. К. 1952 Т.Х1Х. С.8897.
57. Говоров А. М. Усовершенствование диагностики и разработка мер профилактики и оздоровления от туберкулеза стад крупного рогатого скота и свиней в Украинской ССР: Приложения к докладу д-ра вет. наук. Х., 1969. 499с.
58. Гращенко О.В., Зыков М.П. Оценка вирулентности микобактерий туберкулеза с помощью внутримозгового заражения морских свинок // Проблемы туберкулеза. М., - Медицина. 1985. - №5. С.56 59.
59. Гуркин А. В. Эпизоотология туберкулеза и система оздоровительных мероприятий в хозяйствах промышленного типа в зоне интенсивного животноводства: Автореф. дис. ... д-ра вет. наук. М., 1994. 36 с.
60. Гуславский И. И., Фомин В. М. Некоторые аспекты эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота в Западной Сибири // Туберкулез крупного рогатого скота и мера борьбы с ним: Сб. науч. трудов / ВАСХНИЛ; Сиб. отд-ние. Новосибирск, 1986. С. 1721.
61. Гутман В. Опыты над туберкулезными коровами с кохином // Учен. зап./ Казан. вет. ин-т. Казань, 1891 Т. 8, Вып.1. С. 1219.
62. Демченко А.В., Кондратюк М.К., Муляк С.В. Оценка результатов серологических исследований крупного рогатого скота на туберкулез в хозяйствах Одесской области // Диагностика и специфическая профилактика инфек. болезней животных и птиц.- 1989.-С.24-26.
63. Дворникова М. А. Послеубойная диагностика туберкулеза у крупного рогатого скота // Науч. тр. / Сарат. с.-х. ин-т. Саратов, 1974. Т. 15. С. 2428.
64. Джупина С.И. Методы эпизоотологического исследования и теория эпизоотического процесса.- Новосибирск - 1991.142с.
65. Диагностические аспекты туберкулеза крупного рогатого скота./ В.П.Урбан, М. М. Широбокова , А. П. Зубков, Н. М. Калишин // Сб. работ/ Ленингр. вет. ин-т. Л.,1971. Вып. 32. С.103111.
66. Диагностика туберкулеза при массовых туберкулиновых реакциях у крупного рогатого скота / Л.М. Ходун, Н.И. Овсянов, Л.В. Погуляева, Ю.В. Мартынов и др. // Ветеринария. М.,- Агропромиздат.- 1991.- №11.- С.23-25.
67. Дикий И. Л. Способ получения и иммунобиологические свойства вакцинных штаммов микобактерий туберкулеза: Дис. ... д-ра вет. наук. Х., 1982. 358 с.
68. Донченко А. С. Опыт определения экономического ущерба от туберкулеза крупного рогатого скота // Вестн. с.-х науки Казахстана. 1971. N1. С. 5963.
69. Донченко А. С., Донченко В. Н., Савченко Г. А. Туберкулиновые реакции у крупного рогатого скота сенсибилизированного различными видами микобактерий // Науч.-техн. бюл. / ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. Новосибирск, 1985. Вып. 32. С. 914.
70. Донченко А. С., Донченко В. Н. Туберкулез крупного рогатого скота, верблюдов, яков, овец, пантовых оленей. Новосибирск, 1994. 354 с.
71. Донченко А.С., Удальцов Е.Л. Обусловленность возникновения и напряженность зон приуроченности туберкулеза крупного рогатого скота в Западной Сибири // Вестн. РАСХН.- 2000.-№4.- С.75-77.
72. Достоевский П. П. Эпизоотическая ситуация и организационно правовые основы ветеринарной медицины в Украине: Автореф. дис. ... канд. вет. наук. К., 1997. 23 с.
73. Драбкина Р. О. Микробиология туберкулеза. М.: Медгиз, 1963. 255 с.
74. Дудко А. А. Организация послеубойной экспертизы крупного рогатого скота на мясокомбинатах Украинской ССР // Эффективность мероприятий по борьбе с туберкулезом животных: Тез. докл. конф. К.,1982. С.3839.
75. Дунаев Г. В. Серологическая диагностика туберкулеза у крупного рогатого скота с отрицательными и сомнительными пробами // Вестн. с.-х. науки. 1958.N 9. С.4850.
76. Дыхно М. М., Земцова О.М., Зайдес В. М. Дифференциация КУС от микобактерий туберкулеза и атипичных штаммов с помощью определения формамидазной активности // Пробл. туберкулеза.1964.N 9.С. 6366.
77. Евглевский Ал. А., Евглевский Ан. А. Протективные свойства туберкулезного анатоксина при испытании на крупном рогатом скоте // Основные науч. исследования по пробл. туберкулеза и бруцеллеза с.-х. животных, профилактика и организация мероприятий по ликвидации болезней в регионе Сибири. Новосибирск, 1995. С. 3032.
78. Ермакова Р.М. Случаи выделения атипичных микобактерий из кровососущих комаров // Сб. науч. трудов Всероссийского НИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологиию.- 1995.- 96.- С.85-91.
79. Ерошов А.И., Заболоцкий В.П. Научно-обоснованная система борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота // Тезисы докладов конференции 25 мая 1990.- Кишинев.- 1990.- С. 129-130.
80. Жаров В. Г. Об устойчивости микобактерий туберкулеза к некоторым дезсредствам // Бюл. науч.-техн. информации / НИИ эксперим. ветеринарии Сибири и Дальнего Востока. Новосибирск, 1976. Вып. 3. С. 310.
81. Жумашев А. С. Внутривенная туберкулинизация крупного рогатого скота // Вестн. с.-х. науки Казахстана. 1973. N 7. С. 7073.
82. Журнакова М. А., Малыгин В. И., Борисенкова Л. Н. Парааллергические реакции на туберкулин у крупного рогатого скота, зараженного птичьим типом микобактерий // Ветеринария. 1964.N 3. С. 2325.
83. Журнакова М.А. Современное состояние вопроса диагностики туберкулеза крупного рогатого скота // Пробл. борьбы с туберкулезом с.-х. животных . 1965. С. 4752.
84. Загальна епізоотологія / Б.М. Ярчук, П.І. Вербицкий, В.Л.Литвин, Л.Є.Корнієнко, О.Б.Домбровський та ін. // Біла Церква. 2002.- 656с.
85. Заглухинская С. Б., Скрябина Л. Е., Персон Ф. В. Исследование микобактерий туберкулеза методом люминисцентной микроскопии //Пробл. туберкулеза. 1960. N 7. С. 8993.
86. Законодавство України про