Характеристика продуктов генов кластера утилизации ламинарина Thermotoga neapolitana Волков, Илья Юрьевич

Краткое описание

Волков,ИльяЮрьевич.ХарактеристикапродуктовгеновкластераутилизацииламинаринаThermotoganeapolitana: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 1999. - 115 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
/РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК отитут МОЛЕКУЛЯРНОЙ ГЕНЕТИКИ На правах рукописиВОЛКОВИЛЬЯЮРЬЕВИЧХАРАКТЕРИСТИКАПРОДУКТОВГЕНОВКЛАСТЕРАУТИЛИЗАЦИИЛАМИНАРИНАТНЕКМОТОСА Ш Е А Р О Ы Т А М Специальность 03.00.03 - молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

стр. 2
сокращений ВВЕДЕНИЕ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ... 1.1. • Бактерии рода комплекс ферментов ^hermotoga • и их гликозилгидролазный • 4 5 7 7 1.2. СтруктуракластераутилизацииламинаринабактерииThermotogaпеаронгапа 8 1.3. 3(1, 3)-глюканы, р(1,3-1,4)-глюканы и их 9 3-глюкозидазы, их 10 17 распространенность в природе

стр. 8
целлюлаз, ферментативных актив­ ламинариназы, р-ксиланаз, р-глюкозидаз, a-D-глюкуронидазы, a-L-араби[43. 114, 158, 3 6 ] . 1.2. Структуракластераутилизацииламинаринатермофиль­ ной анаэробной бактерииThermotogan e a p o U t a n a . Ранее в Лаборатории молекулярной генетики анаэробов ИМГ (Dakliova, 1993),

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Волков, Илья Юрьевич
Список сокращений.
ВВЕДЕНИЕ.-.'.'■■
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. ' Бактерии рода ТПегтогода и их гликозилгидролазный комплекс ферментов.■.
1.2. Структура кластера утилизации ламинарина бактерии Thermotoga пеароИ1апа.
1.3. 0(1, 3)-глюканы, Р(1,3-1,4)-глюканы и их распространенность в природе.
1.4. 0(1,3)- и 0(1,3; 1,4)-глюканазы, . р-глюкозидазы, их биохимические и субстратные характеристики.
1.5. Систематика гликозилгидролаз на основе гомологии аминокислотных последовательностей.
1.6. Основные механизмы каталитического действия и характерные особенности пространственного строения гликозил-гидролаз.
1.7. Доменная структура некоторых 3~глюканаз и (З-глюкозидаз.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Бактериальные штаммы и плазмиды.
2.2. Химические реактивы и субстраты.:.
2.3. ПААГ-электрофорез белков и методы получения зимограмм.
2.4. Изоэлектрофокусирование и определение р1.
2.5. Определение концентрации белка.,.
2.6. Методы определения восстанавливающих Сахаров й глюкозы.
2.7. Методы определения ферментативной активности
0-глюканаз и (3-глюкозидаз.
2.8. Определение термостабршьности ферментов.
- з
2.9. Анализ продуктов гидролиза лихенана и ламинарина.
2.10. Изучение адсорбции на нерастворимых субстратах.
2.11. Определение константы Михаэлиса.
2.12. Изучение ретардации LamA при прохождении денатурирующего гель-электрофореза в ПААГ в присутствии растворимых субстратов.
2.13. Ультрафильтрация.
2.14. Определение локализации ферментов в E.coll.
2.15. Разрушение клеток ультразвуком.
2.16. Очистка рекомбинантных ферментов:.
2.16.1. Очистка р-глюкозидазы BglB.
2.16.2. Очистка р-(1, 3)-глюканазы LamA.
2.16.3. Очистка делеционных производных LamA.
2.17. Анализ аминокислотной последовательности LamA.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Анализ аминокислотной последовательности BglB.
3.2. Очистка BglB.
3.3. Характеристики BglB.
3.4. Анализ доменной структуры LamA и функций доменов.
3.5. Очистка LamA.
3.6. Строение делеционных производных LamA.
3.7. Очистка делеционных производных LamA.'.
3.8. Свойства LamA и ее делеционных производных.
3.9. Адсорбционные свойства делеционных производных LamA.82