Создание рекомбинантных антител против вируса клещевого энцефалита и изучение их свойств Николенко, Галина Николаевна

Краткое описание

Николенко,ГалинаНиколаевна.Созданиерекомбинантныхантителпротиввирусаклещевогоэнцефалитаиизучениеихсвойств: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Кольцово, 1999. - 132 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
БИОИНЖЕНЕРИИ На правах рукописиНИКОЛЕНКОГАЛИНАНИКОЛАЕВНАСОЗДАНИЕРЕКОМБИНАНТНЫХАНТИТЕЛПРОТИВВИРУСАКЛЕЩЕВОГОЭНЦЕФАЛИТАИИЗУЧЕНИЕИХСВОЙСТВ03.00.03

стр. 6
использовать их для исследования молекулярных основ протективностиантители их вируснейтрализующихсвойств. Цель работы. Целью данного исследования являлосьсозданиерекомбинантныхантителпротиввирусаклещевогоэнцефалитаиизучениеихсвойств. В соответствии с поставленной целью необходимо было решить

стр. 43
рекомбинантныеантитела - аналоги моноклональныхантителпротиввирусаклещевогоэнцефалита, исследовать их иммунохимическиесвойства, что является первым этапом работ посозданиюв будущем лекарственных средств нового поколенияпротивэтого опасного вирусного заболевания. 42 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ РЕАКТИВЫ

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Николенко, Галина Николаевна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. РЕКОМБИНАНТНЫЕ АНТИТЕЛА.
1. Структура и свойства иммуноглобулинов.
2. Организация генов иммуноглобулинов.
3. Рекомбинантные антитела.
3.1. Химерные антитела.
3.2. Гуманизированные антитела.
3.3. Fab- и Fv-фрагменты антител.
3.4. Одноцепочечные антитела (scFv).
3.5. Гибридные молекулы рекомбинантных антител.
3.6. Изолированный VH-домен.
3.7. Производные гипервариабельных (CDR) петель.
4. Получение рекомбинантных антител in vitro.
4.1. Продукция фрагментов антител в клетках Е.coli.
4.2. Комбинаторные библиотеки генов иммуноглобулинов.
4.3. Экспрессия генов антител в клетках млекопитающих.
5. Перспективы применения рекомбинантных антител. 38 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 43 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 58 1. Конструирование гена одноцепочечных антител против вируса клещевого энцефалита.
1.1 Клонирование генов вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей
МКАЕ6В.
1.2. Анализ первичной структуры Vh и Vk генов МКА Е6В.
1.3. Конструирование гена одноцепочечного антитела (scFv).
2. Получение и исследование мономерных одноцепочечных антител.
2.1. Конструирование плазмиды, обеспечивающей продукцию в клетках E.coli мономерных рекомбинантных антител.
2.2. Исследование особенностей продукции мономерных одноцепочечных антител в клетках Е. coli.
2.3. Оценка иммунохимических свойств мономерных рекомбинантных антител в составе клеточных лизатов.
3. Получение и исследование димерных одноцепочечных антител.
3.1. Конструирование плазмиды, обеспечивающей продукцию в клетках E.coli димерных рекомбинантных антител.
3.2. Исследование особенностей продукции димерных одноцепочечных антител в клетках Е. coli.
4. Очистка рекомбинантных антител против вируса КЭ. 93 4.1 Конструирование плазмид, обеспечивающих продукцию мономерной и димерной форм одноцепочечных антител с гистидиновым гексамером на С-конце. 94 4.2. Очистка рекомбинантных антител на никелевом сорбенте.
5. Исследование иммунохимических свойств очищенных мономерных и димерных рекомбинантных антител.
6. Определение констант диссоциации комплекса антиген-антитело для рекомбинантных антител и МКА Е6В. 105 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 109 ВЫВОДЫ 113 БЛАГОДАРНОСТИ 115 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ