Ржавина, Екатерина Михайловна Роль простагландинового звена каскада арахидоновой кислоты в развитии ишемического повреждения сетчатки у крыс : Ржавіна, Катерина Михайлівна Роль простагландинового ланки каскаду арахідонової кислоти в розвитку ішемічного пошкодження сітківки у щурів Rzhavina, Ekaterina Mikhailovna The role of the prostaglandin link of the arachidonic acid cascade in the developmen

Короткий зміст

Объект исследования. Эксперимент проводили на самцах крыс популяции Wistar массой 366,7±48,2 г в модели необратимой ишемии и 412,4±61,1 г в модели стрептозотоцин- индуцированного сахарного диабета с соблюдением регламента по работе с экспериментальными животными, определенного приказом Минздрава СССР №755 от 12.08.1977.
Моделирование сахарного диабета. Экспериментальный сахарный диабет вызывали внутрибрюшинным введением стрептозотоцина (СТЗ) в дозе 65 мг/кг («Sigma-Aldrich»), растворенного в 0,1М натриево-цитратном буфере (pH 4,5). Контрольной группе животных вводили внутрибрюшинно аналогичную дозу натриево-цитратного буфера. Через трое суток определяли уровень глюкозы в венозной крови из хвостовой вены, при этом животных предварительно не лишали корма. Из группы животных, которым вводили стрептозотоцин, исключали крыс с уровнем глюкозы менее 15 мМ. Каждую неделю в утреннее время регистрировали уровень глюкозы в венозной крови, забранной из хвостовой вены у всех животных. В течение всего времени наблюдения животным, получившим инъекции стрептозотоцина, ежедневно вводили подкожно инсулин детемир в дозе 2 ЕД/кг. На 50-е, 58-е и 66-е сутки осуществляли эвтаназию по подгруппам обследованных животных путем введения раствора хлоралгидрата.
Моделирование необратимой ишемии. Необратимую ишемию глаза моделировали путем двусторонней перевязки внутренних сонных артерий с интервалом в 30 минут у наркотизированных хлоралгидратом (0,4 г/кг, внутрибрюшинно) крыс.
Введение блокаторов каскада арахидоновой кислоты. Введение триамцинолона (блокатор фосфолипазы А2), лорноксикама (неселективный ингибитор циклооксигеназ) или физиологического раствора осуществляли через 15 минут после двусторонней окклюзии артерий интравитреально и через 24 и 28 часов после операции - парентерально. Перед интравитреальным введением блокаторов каскада арахидоновой кислоты использовали капли Мидриацил (0,5% раствор тропикамида) для расширения зрачка и улучшения обзора введенной иглы и Алкаин (0,5% раствор проксиметакаина) для местного обезболивания. До и после инъекции глаз обрабатывали каплями Витабакт (0,05% раствор пиклоксидина), противомикробным препаратом. Триамцинолон (40 мг/кг) и лорноксикам (8 мг/кг) или физиологический раствор вводили интравитреально в объеме 2 мкл. Иглу вводили вблизи бифуркации вортикозной вены под углом 40° под визуальным контролем. Парентеральные дозы препаратов, рассчитанные на основании веса животного, составили для лорноксикама - 230 мкг/кг, для триамцинолона - 571 мкг/кг. Физиологический раствор вводили аналогично в объеме 0,5 мл/кг.
Морфологический анализ сетчатки. После энуклеации глаза фиксировали в оригинальным фиксаторе Дэвидсона в течение 24 часов, после чего материал обрабатывали в серии спиртов и заключали в парафиновые блоки по стандартной методике. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. На срезах оценивали толщину всех слоев сетчатки в трех зонах (в центре, на экваторе и периферии сетчатки), наличие и выраженность ундулирующих изменений сетчатки и число мигрировавших ядер, окрашенных аналогично ядрам в ядерных слоях сетчатки.
Офтальмоскопическое исследование проводили на наркотизированных животных с помощью налобного бинокулярного видеоофтальмоскопа с линзой +70 Дптр. Предварительно животным для расширения зрачка закапывали в глаз Мидриацил. Отмечали развитие неперфузируемых капиллярных зон (от 0 до 8 баллов), трофику зрительного диска (в % от исходного уровня), особенности хода сосудов.