Экологические основы контроля численности листогрызущих насекомых с применением ДНК-инсектицидов Оберемок Владимир Владимирович

Короткий опис

Оберемок,ВладимирВладимирович.ЭкологическиеосновыконтролячисленностилистогрызущихнасекомыхсприменениемДНК-инсектицидов: диссертация ... доктора биологических наук : 03.02.08 ; 06.01.07 /ОберемокВладимирВладимирович; [Место защиты: Никитский ботанич. сад - Нац. науч. центр РАН]. - Симферополь, 2019. - 259 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
правах рукописиОБЕРЕМОКВЛАДИМИРВЛАДИМИРОВИЧЭКОЛОГИЧЕСКИЕОСНОВЫКОНТРОЛЯЧИСЛЕННОСТИЛИСТОГРЫЗУЩИХНАСЕКОМЫХСПРИМЕНЕНИЕМДНК-ИНСЕКТИЦИДОВ03.02.08

стр. 9
2002) в качестве контактныхДНК-инсектицидовдляконтролячисленностилистогрызущихнасекомых. Первые эксперименты сДНК-инсектицидамибыли проведены на непарном шелкопряде (Оберемок, 2008a). Некоторое время спустя появились данные о возможности создания контактных двухцепочечных РНК-инсектицидовдляконтроля

стр. 11
представления, результаты и выводы, позволяющие расширить спектр безопасных подходов кконтролючисленностилистогрызущихнасекомых.ДНК-инсектициды(oligoRING-инсектициди oligoRIBO-11-инсектицид) могут найти своёприменениевконтролечисленностинепарного шелкопряда. OligoRING-инсектицидможет быть использован

Оглавление диссертациидоктор наук Оберемок Владимир Владимирович
1.3 Необходимость применения инсектицидов и причины создания новых препаратов
1.4 Вредные последствия использования химических инсектицидов для окружающей среды
1.5 Преимущества современных агентов регуляции численности насекомых как предпосылки к созданию ДНК-инсектицидов
1.6 Особенности разработки ДНК-инсектицидов с высоким уровнем экологичности
1.7 Трудности, связанные с разработкой РНК-препаратов для контроля численности чешуекрылых насекомых, и преимущества ДНК-инсектицидов
1.8 Первый эксперимент по применению ДНК-инсектицидов на непарном шелкопряде
1.9 Происхождение применённых против непарного шелкопряда ДНК-инсектицидов и их связь с апоптозом
1.10 Непарный шелкопряд как листогрызущее насекомое
РАЗДЕЛ 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Происхождение гусениц непарного шелкопряда и других насекомых
2.2 Выращивание насекомых в лабораторных условиях
2.3 Взвешивание насекомых
2.4 Дизайн олигонуклеотидов
2.5 Обработка насекомых ДНК-олигонуклеотидами
2.6 Заражение гусениц ВЯП НШ
2.7 Исключение и доказательство заражения непарного шелкопряда ВЯП
2.8 Выращивание растений
2.9 Взвешивание растений
2.10 Анализ содержания глюкозы и активности щелочной фосфатазы в
растениях
2.11 Выделение, амплификация ДНК и детекция продуктов амплификации
2.12 Выделение РНК
2.13 Обратная транскрипция
2.14 Секвенирование ДНК
2.15 ПЦР в реальном времени (анализ экспрессии генов)
2.16 Гистологические исследования
2.17 Детекция апоптотической "лестницы ДНК"
2.18 Измерение кальция и магния в тканях яиц насекомого
2.19 Определение количества погибших клеток в исследуемой популяции стволовых клеток быка домашнего
2.20 Анализ масла мяты перечной методом газовой хроматографии
2.21 Обнаружение олигонуклеотида о^оМВО-11 методом матрично-активированной лазерной десорбции/ионизации (МАЛДИ)
2.22 Обнаружение проникновения о^оМВО-11-фрагмента и oligoRING-фрагмента методом спектрофотометрии
2.23 Статистический анализ
РАЗДЕЛ 3_ВЛИЯНИЕ КОРОТКИХ ОДНОЦЕПОЧЕЧНЫХ ФРАГМЕНТОВ АНТИАПОПТОЗНЫХ ГЕНОВ НА БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ БЕЗВИРУСНОГО ШЕЛКОПРЯДА И ДРУГИХ НАСЕКОМЫХ
3.1 Повышение смертности насекомого
3.2 Снижение биомассы насекомого
3.3 Уменьшение количества самок в обработанном о^оЯШО-фрагментом поколении
3.4 Переход инсектицидного эффекта о^оЯШО-фрагмента в следующее поколение - повышение содержания кальция и магния в тканях яиц шелкопряда и снижение скорости развития эмбрионов
РАЗДЕЛ 4_ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТА ПОВЫШЕНИЯ СМЕРТНОСТИ ГУСЕНИЦ НЕПАРНОГО ШЕЛКОПРЯДА, ЗАРАЖЁННЫХ ВИРУСОМ ЯДЕРНОГО ПОЛИЭДРОЗА И ОБРАБОТАННЫХ КОРОТКИМ АНТИСМЫСЛОВЫМ ФРАГМЕНТОМ ЕГО АНТИАПОПТОЗНОГО 1АР-3-ГЕНА
4.1 Повышение смертности гусениц, которых заразили ВЯП НШ в лабораторных условиях
4.2 Снижение биомассы гусениц, которых заразили ВЯП НШ в лабораторных условиях
4.3 Повышение смертности гусениц, которые были заражены ВЯП НШ в природе
РАЗДЕЛ 5_ОБНАРУЖЕНИЕ КЛЕТОЧНОГО ОТВЕТА НА ДЕЙСТВИЕ OLIGORING-ФРАГМЕНТА АНТИАПОПТОЗНОГО 1АР-3-ГЕНА ВЯП НШ У БЕЗВИРУСНЫХ И ЗАРАЖЁННЫХ ЭТИМ ВИРУСОМ ГУСЕНИЦ НЕПАРНОГО ШЕЛКОПРЯДА
5.1 Безвирусные гусеницы непарного шелкопряда
5.1.1 Доказательство проникновения о^оЯШО-фрагмента в клетки непарного шелкопряда
5.1.2 Снижение экспрессии антиапоптозного 1АР-1-гена непарного шелкопряда под действием о^оЯЖО-фрагмента антиапоптозного 1АР-3-гена ВЯП НШ
5.1.3 Обнаружение антиапоптозного 1АР-7-гена шелкопряда, обладающего высокой степенью гомологии с антиапоптозным 1АР-3-геном ВЯП НШ, и снижение его экспрессии под влиянием о^оЯЖО-фрагмента
5.1.4 Анализ микросрезов гусениц непарного шелкопряда, контактно обработанных ДНК-олигонуклеотидами
5.2 Заражённые ВЯП НШ гусеницы непарного шелкопряда
5.2.1 Снижение экспрессии антиапоптозных генов системы взаимоотношений вирус-хозяин под действием о^оЯШО-фрагмента антиапоптозного 1АР-3-гена ВЯП НШ
5.2.2 Детекция апоптотической "ДНК-лестницы" в заражённых ВЯП НШ гусеницах непарного шелкопряда, обработанных одноцепочечными ДНК-фрагментами
РАЗДЕЛ 6 ДНК-ИНСЕКТИЦИД НА ОСНОВЕ АНТИСМЫСЛОВОГО ФРАГМЕНТА ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО 5^ РИБОСОМАЛЬНУЮ РНК
6.1 Антисмысловой о^оМВО-11-фрагмент проникает в клетки гусениц непарного шелкопряда
6.2 Антисмысловой о^оМВО-11-фрагмент вызывает смертность гусениц непарного шелкопряда, выращенных в лаборатории и устойчивых к о^оЯГЫО-инсектициду
6.3 О^оШВО-11-фрагмент снижает концентрацию 5^ рРНК в клетках гусениц непарного шелкопряда
6.4 Свидетельства снижения уровня биосинтеза белка в тканях гусениц непарного шелкопряда, обработанных о^оЫВО-11-фрагментом
РАЗДЕЛ 7 ИЗБИРАТЕЛЬНОСТЬ ДЕЙСТВИЯ ДНК-ИНСЕКТИЦИДОВ НА ОСНОВЕ КОРОТКИХ АНТИСМЫСЛОВЫХ ФРАГМЕНТОВ АНТИАПОПТОЗНЫХ ГЕНОВ
7.1 Биоразлагаемость о^оЫВО-11-фрагмента и о^оЯШО-фрагмента с участием тканевых дезоксирибонуклеаз
7.2 Нецелевые насекомые
7.3 Нецелевые растения
7.4 Стволовые клетки быка домашнего
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ