Мельникова Яна Викторовна Технология получения субстанции гиалуронидазы с использованием сорбционно-хроматографического и мембранного методов

brief description

Мельникова Яна Викторовна Технология получения субстанции гиалуронидазы с использованием сорбционно-хроматографического и мембранного методов
ОГЛАВЛЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИ
кандидат наук Мельникова Яна Викторовна
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Физико-химические свойства, биологическая роль и применение гиалуронидаз из различных источников сырья

1.1.1 История развития исследований гиалуронидаз

1.1.2 Классификациягиалуронидаз

1.1.3 Свойства гиалуронидаз из различных источников сырья

1.1.3.1 Молекулярная массагиалуронидазы

1.1.3.2 Активаторы и ингибиторыгиалуронидаз

1.1.3.3 Структура гиалуронидазы

1.1.3.4 Специфичность гиалуронидаз из различных 29 источников сырья

1.1.4 Биологическая роль гиалуронидазы и области ее применения

1.2 Технология выделения и очистки белков и ферментов из сырья 36 различного происхождения

1.2.1 Основные методы выделения и очистки белков и ферментов

из сырья различного происхождения

1.2.2 Сорбционно-хроматографические методы

1.2.3 Селективные сорбенты для выделения белков и ферментов

1.2.4 Мембранные методы очистки

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы исследования

2.1.1 Объекты исследования

2.1.1.1 Семенники крупного рогатого скота

2.1.1.2 Субстанция «Лидаза»

2.1.1.3 Сорбенты

2.1.2 Стандарты гиалуронидазы

2.1.3 Лекарственные препараты, содержащие гиалуронидазу

2.1.4 Наноноситель

2.1.5 Оборудование

2.2 Методы исследования

2.2.1 Определение концентрации белка

2.2.1.1 Определение концентрации белка колориметрическим методом с биуретовым реактивом

2.2.1.2 Определение концентрации белка спектрофотометрическим методом

2.2.2 Спектрофотометрический метод определения

гиалуронидазной активности

2.2.3 Подготовка сорбентов к работе

2.2.4 Метод определения специфичности

2.2.5 Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

2.2.5.1. Определение белкового состава методом эксклюзионной ВЭЖХ на жидкостном хроматографе «СТАЙЕР»

2.2.5.2. Определение белкового состава методом эксклюзионной ВЭЖХ на жидкостном хроматографе «SHIMADZU»

2.2.6 Гельхроматографический метод

2.2.7 Метод электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) по Лэммли (SDSPAGE)

2.2.8 Методика определения коэффициента распределения

2.2.9 Методика определения критериального параметра X

2.2.10 Методика мембранной фильтрации на модуле Vivaflow

2.2.11 Методика сублимационной сушки

2.2.12 Математические методы обработки результатов

Глава 3. ПОЛУЧЕНИЕ СУБСТАНЦИИ ГИАЛУРОНИДАЗЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СОРБЦИОННО-ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО И МЕМБРАННОГО МЕТОДА

3.1 Исследование гиалуронидазы из экстракта семенников КРС

3.1.1 Подбор режима экстрагирования гиалуронидазы из семенников КРС

3.1.2 Анализ экстракта семенников КРС

3.1.2.1 Электрофоретический анализ экстракта семенников КРС

3.1.2.2 Анализ экстракта семенников КРС методом ВЭЖХ

3.1.2.3 Сравнительный анализ экстракта семенников КРС

3.2 Изучение сорбционно-хроматографического процесса выделения гиалуронидазы

3.2.1 Исследование сорбционно-хроматографического процесса выделения гиалуронидазы на различных сорбентах в статических условиях

3.2.2 Исследование сорбционно-хроматографического процесса выделения гиалуронидазыа на различных сорбентах в динамических условиях

3.2.2.1 Исследование сорбционно-хроматографического процесса

по общему белку

3.2.2.2 Исследование сорбционно-хроматографического процесса

по гиалуронидазной активности

3.3 Изучение процесса очистки гиалуронидазы мембранным методом

3.3.1 Исследование процесса концентрирования экстракта семенников КРС

3.3.2 Исследование процесса мембранной очистки фармацевтической субстанции «Лидаза»

3.4 Получение субстанции гиалуронидазыиз семенников КРС

3.4.1 Выбор режима сорбции с использованием кинетико-динамического анализа по критериальному параметру X

3.4.2 Исследование сорбционно-хроматографического процесса выделения гиалуронидазыиз экстракта семенников КРС

3.4.3 Схема выделения и очистки субстанции гиалуронидазы

3.4.4 Сравнительный анализ субстанции гиалуронидазы

3.4.5 Изучение влияния ß-циклодекстринов на гиалуронидазную активность при различном соотношении фермент

: наноноситель

3.4.6 Исследования стабильности субстанции гиалуронидазы

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

ПРИЛОЖЕНИЕ А. Акты апробации и внедрения результатов

ПРИЛОЖЕНИЕ Б. Патент

ПРИЛОЖЕНИЕ В. Нормативная документация (Проект)

«Гиалуронидаза, субстанция»

ПРИЛОЖЕНИЕ Г. Протокол «Валидация методики количественного

определения гиалуронидазной активности субстанции гиалуронидазы»... 171 ПРИЛОЖЕНИЕ Д. Лабораторный регламент «Гиалуронидаза,

субстанция»