БІОЛОГІЧНІ ТА ІМУНОГЕННІ ВЛАСТИВОСТІ ЕПІЗООТИЧНИХ ШТАМІВ ВІРУСУ ІНФЕКЦІЙНОГО БРОНХІТУ КУРЕЙ

brief description

МІНІСТЕРСТВО АГРАРНОЇ ПОЛІТИКИ УКРАЇНИ
ЛУГАНСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ АГРАРНИЙ УНІВЕРСИТЕТ

На правах рукопису
Нестерова
Лариса Юріївна

УДК 619:616.98:578.834.11:636.52/.58 (043)

БІОЛОГІЧНІ ТА ІМУНОГЕННІ ВЛАСТИВОСТІ ЕПІЗООТИЧНИХ ШТАМІВ ВІРУСУ ІНФЕКЦІЙНОГО БРОНХІТУ КУРЕЙ

16.00.03 — ветеринарна мікробіологія та вірусологія

Д И С Е Р Т А Ц І Я
на здобуття наукового ступеня
кандидата ветеринарних наук

Науковий керівник:
кандидат ветеринарних наук, доцент
Пархоменко Людмила Іванівна

Луганськ − 2008

ЗМІСТ

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ..................................................................5
ВСТУП...................................................................................................................7

РОЗДІЛ 1. ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ.................................................................12
1.1. Інфекційний бронхіт курей. Загальна характеристика.............................12
1.1.1. Збудник інфекційного бронхіту курей....................................................12
1.1.1.1. Морфологія і хімічний склад................................................................12
1.1.1.2. Фізико-хімічні властивості....................................................................16
1.1.1.3. Гемаглютинуючі властивості ...............................................................17
1.1.1.4. Генетична варіабельність .....................................................................18
1.1.2. Епізоотологія, патогенез та клінічний прояв інфекційного бронхіту курей.....................................................................................................................20
1.1.3. Патологоанатомічні та гістоморфологічні зміни органів при інфекційному бронхіті курей.............................................................................23
1.1.4. Експериментальна інфекція ....................................................................27
1.1.5. Діагностика інфекційного бронхіту курей.............................................27
1.1.6. Імунітет та специфічна профілактика інфекційного бронхіту курей..33

РОЗДІЛ 2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ...............................36
2.1. Біологічні об'єкти, використані в дослідженнях.......................................37
2.2. Серологічні дослідження.............................................................................39
2.3. Вірусологічні дослідження..........................................................................40
2.4. Гістологічні дослідження............................................................................45
2.5. Біохімічні дослідження................................................................................46
2.6. Електронна мікроскопія..............................................................................47
2.7. Молекулярно-генетичний аналіз................................................................48
2.8. Статистична обробка отриманих результатів...........................................49

РОЗДІЛ 3. РЕЗУЛЬТАТИ ВЛАСНИХ ДОСЛІДЖЕНЬ.............................50
3.1. Серологічний моніторинг ефективності специфічної профілактики інфекційного бронхіту курей.............................................................................50
3.2. Індикація та вивчення біологічних властивостей польових ізолятів вірусу інфекційного бронхіту курей.................................................................61
3.2.1. Ізоляція та визначення інфекційної активності польових ізолятів вірусу інфекційного бронхіту курей на курячих ембріонах...........................61
3.2.2. Ідентифікація ізолятів за полімеразною ланцюговою реакцією..........67
3.2.3. Патогенність польових ізолятів вірусу інфекційного бронхіту курей для курчат............................................................................................................69
3.2.4. Визначення інфекційності польових ізолятів вірусу в культурі первинних та перещеплюваних клітин ............................................................71
3.2.5. Визначення гемаглютинуючої активності ізолятів вірусу інфекційного бронхіту курей.....................................................................................................80
3.3. Фізико-хімічні властивості ізолятів вірусу інфекційного бронхіту курей.....................................................................................................................82
3.3.1. Вивчення терморезистентності польових ізолятів вірусу інфекційного бронхіту курей ....................................................................................................82
3.3.2. Визначення електрофоретичного профілю вірусу інфекційного бронхіту курей.....................................................................................................83
3.3.3. Морфологічна структура польових ізолятів вірусу інфекційного бронхіту курей.....................................................................................................86
3.4. Вивчення впливу вірусу інфекційного бронхіту на циліарну активність та гістоморфологію трахеї, легень і нирок курчат...........................................88

РОЗДІЛ 4. АНАЛІЗ І УЗАГАЛЬНЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ДОСЛІДЖЕНЬ..................................................................................................99

ВИСНОВКИ......................................................................................................114
ПРОПОЗИЦІЇ ВИРОБНИЦТВУ .....................................................................117
СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ.........................................................118
ДОДАТКИ............................................................................................156

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ

Ат

антитіло

ВІБК

вірус інфекційного бронхіту курей

ВНК-21

перещеплювана культура клітин нирки сирійського хом’яка

ГЛА

гідролізат лактальбуміну

ГАО

гемаглютинуюча одиниця

ДДС-Na

додецилсульфат натрію

ДНК

дезоксирибонуклеїнова кислота

ЗТ-ПЛР

зворотня транскриптазна-полімеразна ланцюгова реакція

ІБК

інфекційний бронхіт курей

ІЛТ

інфекційний ларинготрахеїт

ІБХ

інфекційна бурсальна хвороба

ЕІД50

50 % ембріональна інфікуюча доза

КЕ

курячий ембріон

кДНК

комплементарна ДНК

ЛД50

50 % летальна доза

МПА

м’ясо-пептонний агар

МПБ

м’ясо-пептонний бульйон

мРНК

матрична рибонуклеїнова кислота

нм

нанометр

НХ

ньюкаслська хвороба

ОД

одиниця дії

ПААГ

поліакріламідний гель

п.н.

пара нуклеотидів

ПЛР

полімеразна ланцюгова реакція

РЗГА

реакція затримки гемаглютинації

РНК

рибонуклеїнова кислота

РГА

реакція гемаглютинації

РН

реакція нейтралізації

РНГА

реакція непрямої гемаглютинації

СЗН

синдром зниження несучості

СНД

Співдружність Незалежних Держав

США

Сполучені Штати Америки

ТЦД50

50 % тканинна цитопатогенна доза

ФКЕ

фібробласти курячого ембріону

ХАО

хоріоналантоїсна оболонка

ЦПД

цитопатогенна дія

ЦПЕ

цитопатичний ефект

ЕДТА

етілендіамінтетраацетат

BSA

бичачий сироватковий альбумін (bovine serum albuminum)

Ig

імуноглобулін

kD

кілодальтон

рН

показник концентрації водневих іонів

TSE буфер

буфер, який утримує 25 mM трис-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM етілендіамінтетраацетат

Vero

перещеплювана культура клітин нирки зеленої мавпи

ВСТУП

Актуальність теми. В країнах з розвинутим птахівництвом значну загрозу представляють захворювання тварин, птиці та людей, викликані коронавірусами, в тому числі й атипова пневмонія [1, 2]. Вірус інфекційного бронхіту курей (ВІБК) є типовим представником родини Coronaviridae та викликає захворювання птиці, яке залишається однією з основних причин значних економічних збитків за рахунок відходу молодняку, зниження несучості до 40 % та зниження якості тушки в бройлерів [3].
Виділено й ідентифіковано понад 20-и серотипів збудника інфекційного бронхіту курей. Популяція вірусу в кожній країні постійно змінюється. Це, головним чином, пов’язано з високою еволюційною мінливістю збудника, що призводить до появи нових антигенних варіантів, які значно відрізняються за антигенними та біологічними властивостями від раніш відомих штамів.
Україна відноситься до країн з благополучною щодо інфекційного бронхіту курей епізоотичною ситуацією [4]. Незважаючи на значні досягнення у вивченні біологічних властивостей збудника та розробці заходів щодо профілактики, реєструють спалахи захворювання на інфекційний бронхіт серед курей, а також декоративної та синантропної птиці, викликані епізоотичними штамами вірусу [5, 6]. Крім того, під час застосування живих поліштамних вакцин, до складу яких входять штами вірусу, що виділені в різних країнах світу, не виключена вірогідність рекомбінації штамів.
Ефективна вакцинопрофілактика птиці є запорукою епізоотичного благополуччя птахогосподарств і залишається основним заходом боротьби з інфекційним бронхітом курей. Відповідно до сучасних вимог при виборі вакцин необхідно ураховувати серотип вірусу, що циркулює в даному регіоні.
У зв’язку з вищевикладеним серологічний моніторинг інфекційного бронхіту курей, визначення біологічних та імуногенних властивостей епізоотичних штамів з подальшим виготовленням на їх основі вакцинних препаратів є приоритетним та актуальним напрямком наукових досліджень, що надає можливість науково обґрунтувати систему заходів боротьби і профілактики та забезпечити збереження стабільної епізоотичної ситуації в Україні.
Зв’язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертаційна робота є складовою частиною науково-дослідної роботи, виконаної згідно з тематичними планами кафедри мікробіології і вірусології Луганського національного аграрного університету, зокрема, в 2002р. «Розробити ефективні методи боротьби з інфекційними захворюваннями тварин при різних умовах їх утримання й запропонувати засоби специфічної і неспецифічної профілактики і лікування захворювань»; у 20032007рр. «Вивчення інфекційної патології молодняка сільськогосподарських тварин і птиці, розробка ефективних заходів боротьби в господарствах південно-східної частини України» (номер державної реєстрації 0104U005403); у 2008р. «Розробити та впровадити засоби антивірусної терапії птиці, ссавців при моно- та асоційованих інфекціях» (номер державної реєстрації 0108U006380).
Мета і задачі досліджень. Мета досліджень— з’ясування за серологічним моніторингом і вірусологічним дослідженням птахопоголів’я ефективності вакцинопрофілактики інфекційного бронхіту курей, індикація та вивчення біологічних та імуногенних властивостей збудника.
Для досягнення цієї мети необхідно було вирішити наступні задачі:
провести серологічний моніторинг вірусу інфекційного бронхіту курей у птахогосподарствах з різним напрямком продуктивності та форми власності;
ізолювати та ідентифікувати польові штами вірусу;
вивчити біологічні, фізико-хімічні та імуногенні властивості епізоотичних ізолятів вірусу інфекційного бронхіту курей у порівнянні звакцинними штамами Н‑120, 4/91 і Ма‑5.
Об’єкт дослідження. Інфекційний бронхіт курей.
Предмет дослідження. Біологічні, фізичні, хімічні, імуногенні властивості епізоотичних і вакцинних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей.
Методи дослідження. У роботі використовували епізоотологічний, клінічний, патологоанатомічний, гістологічні, серологічні, вірусологічні, мікробіологічні, імунологічні, біохімічні, молекулярно-генетичні та статистичні методи досліджень.
Наукова новизна одержаних результатів. Уперше ідентифіковано та вивчено деякі біологічні, фізико-хімічні та імуногенні властивості епізоотичних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей, які за електрофореграмою білків, гемаглютинацією та впливом на циліарну активність трахеї курчат відрізняються від вакцинних штамів, що використовуються в Україні. Патогенність ізолятів експериментально підтверджено в біопробі на курчатах, курячих ембріонах і за допомогою циліостатичного тесту. Визначено мітотичний режим (мітотичний індекс, фази мітозу та кількість патологічних мітозів клітин, які діляться) перещеплюваних культур клітин Vero, інфікованих ізолятами вірусу ІБК. Наукова новизна розробок захищена двома деклараційними патентами на корисні моделі України: №26102 «Ізолят ЛІ‑1 як продуцент антигену вірусу інфекційного бронхіту курей» (заявл. 25.12.2006р., опубл. 10.09.2007р.) та №26692 «Ізолят ЛІ‑2 як продуцент антигену вірусу інфекційного бронхіту курей» (заявл.27.12.2006р., опубл. 10.10.2007р.).
Практичне значення одержаних результатів. Впроваджено критерії оцінки патогенності епізоотичних штамів вірусу ІБК за впливом на циліарний апарат трахеї курчат і показниками мітотичного режиму інфікованої перещеплюваної культури клітин Vero, що узагальнені в методичних рекомендаціях «Визначення циліарної активності трахеї курчат та мітотичного режиму перещеплюваної культури клітин Vero, інфікованих штамами вірусу інфекційного бронхіту курей», які затверджено науково-методичною радою Державного комітету ветеринарної медицини України (протокол №1 від 20.12.2007р.). Матеріали дисертації використовуються в навчальній програмі курсу вірусології, епізоотології та гістології факультету ветеринарної медицини Луганського національного аграрного університету, Полтавської державної аграрної академії і Дніпропетровського державного аграрного університету.
Особистий внесок здобувача полягає в самостійному аналізі літературних джерел за темою дисертації, проведенні серологічного моніторингу інфекційного бронхіту курей, виконанні експериментальних, зокрема, вірусологічних, цитологічних і гістологічних, а також аналітичних досліджень, здійсненні аналізу та узагальнення одержаних результатів, формулюванні висновків і практичних рекомендацій.
Напрямок і схеми досліджень обрано та обґрунтовано за допомогою наукового керівника кандидата ветеринарних наук, доцента Л.І.Пархоменко. Індикацію збудника за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) здійснено в лабораторії молекулярної діагностики Національного наукового центру «Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини» разом з кандидатом ветеринарних наук А.П.Геріловичем. Електронно-мікроскопічні дослідження проведені з кандидатом біологічних наук М.В.Рєпіним вІнституті проблем кріобіології і кріомедицини НАНУкраїни.
Апробація результатів досліджень. Основні положення дисертації доповідались і обговорювались на звітних сесіях вченої ради та науково-практичних конференціях факультету ветеринарної медицини Луганського національного аграрного університету (м.Луганськ, 20022007р.); міжнародній конференції молодих вчених (м.Харків, 2003р.); на семінарі з хвороб птиці (м.Луганськ, 2004р.); Всеукраїнській науковій конференції студентів, магістрантів та аспірантів, присвяченої пам’яті професора I.Г.Мороза «Майбутнє ветеринарної медицини, біології та біотехнології» (м.Луганськ, 2005р.); науково-практичній конференції з міжнародною участю «Актуальні проблеми молекулярної діагностики у ветеринарній медицині та біології» (м.Феодосія, 2007р.); міжнародній науково-практичній конференції «Регіональні проблеми екології ветеринарної медицини» (м.Житомир, 2007р.); міжнародній науково-практичній конференції «Сучасні проблеми ветеринарної медицини з питань епізоотології, біотехнології та імунології» (м.Полтава, 2008р.).
Публікації. За матеріалами дисертаційної роботи опубліковано 15наукових праць, у тому числі 10— у фахових виданнях, перелік яких затверджено ВАК України, з них 4— одноосібні, а також два описи отриманих деклараційних патентів на корисні моделі та методичні рекомендації.

Структура та обсяг дисертації. Дисертаційна робота викладена на 117сторінках комп’ютерного друку, ілюстрована 10таблицями, 21рисунком та включає вступ, огляд літератури, матеріали та методи досліджень, результати власних досліджень, аналіз та узагальнення результатів досліджень, висновки, пропозиції виробництву, список літературних джерел, що містить 350найменувань, у тому числі 244зарубіжних авторів, та додатки.

bibliography

ВИСНОВКИ

1. У дисертації узагальнено результати серологічного моніторингу та вірусологічного дослідження птахопоголів’я з визначенням ефективності профілактики інфекційного бронхіту курей при застосуванні в птахогосподарствах імпортних вірус-вакцин. Проміж вакцинованого птахопоголів’я встановлено циркуляцію епізоотичних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей, які за біологічними, фізико-хімічними і імуногенними властивостями мають відмінності від вакцинних штамів вірусу.
2. За серологічним моніторингом птиці, щепленої моно- і бівалентними вакцинами, виготовленими на основі штамів Ма‑5, Н‑120 та 4/91, встановлено низький рівень сероконверсії в курчат 130‑добового віку (040%), строкатість та підвищення до 4,04,8log2 титрів антитіл до вірусу інфекційного бронхіту в птиці починаючи з 200‑добового віку, зниження на 1520% яєчної продуктивності, появу деформованого яйця (до 5%) і наявність 2530% задохликів серед відходів інкубації.
3. За ідентифікацією 7‑ми інфекційних агентів, виділених з патологічного матеріалу від курей 2‑х промислових і 3‑х індивідуальних птахогосподарств, методом ампліфікації фрагменту кДНК ділянки S1 гену віднесено до виду Avian Coronavirus (Infectious bronchitis virus).
4. Ізоляти ЛІ‑1 та ЛІ‑2 є патогенними для курячих ембріонів 911‑добової інкубації і спричиняють загибель, карликовість, набряк хоріоналантоїсної оболонки, наявність уратів у екстраембріональній рідині. На відміну від вакцинних штамів 4/91 і Н‑120 характерною патологоанатомічною зміною ембріонів, заражених ізолятом ЛІ‑1, є збільшення об’єму екстраембріональної рідини, а ізолятом ЛІ‑2— гіперемія та крововиливи на тілі ембріонів. Титр інфекційності ізоляту ЛІ‑2 становить 5×106,26ЕІД50/см3, ізоляту ЛІ‑1— 5×107,0ЕІД50/см3.
5. У біопробі на курчатах 3- і 13‑добового віку за інтраназальним інфікуванням встановлено, що ізоляти ЛІ, ЛІ‑3, ЛІ‑4, ЛІ‑5 та ЛІ‑6 є непатогенними. Ізоляти ЛІ‑1 і ЛІ‑2 через 1236годин після інфікування викликають захворювання в 40 і 100% курчат відповідно, з індукцією вірусоспецифічних антитіл, що виявляються в сироватці крові в титрах 1:4 і 1:16 на 25-ту (ЛІ‑1) та 3-тю доби (ЛІ‑2).
6. Ізоляти ЛІ‑1 та ЛІ‑2 вірусу інфекційного бронхіту курей подібно до вакцинних штамів 4/91 і Н‑120 розмножуються в культурі первинно трипсинізованих фібробластів курячого ембріону і перещеплюваних клітин Vero з ознаками симпластоутворення і деструктивних змін. Репродукція вірусу в інфікованих культурах клітин супроводжується пригніченням мітотичної активності зі збільшенням кількості патологічних мітозів до 47,5±0,1551,25±0,25% (у нормі 4,25±0,137,75±0,13%). Інфекційність ізоляту ЛІ‑1 у культурі клітин Vero становить 104,59ТЦД50/см3, ізоляту ЛІ‑2− 105,25ТЦД50/см3.
7. Ізоляти ЛІ‑1 та ЛІ‑2 є віріонами сферичної форми діаметром 122169нм з булавоподібними виступами довжиною 1018нм. Білкова фракція, молекулярною масою 25,1кD, що відповідає внутрішньому мембранному білку (М) та матриксному глікопротеїну (Е1) вірусу інфекційного бронхіту, є загальною як для ізолятів ЛІ‑1 та ЛІ‑2, так і для вакцинних штамів 4/91, Н‑120, Ма‑5, тоді як білкова фракція 67,0кD виявлена лише в ізолятів.
8. Установлено більш виражену терморезистентність ізолятів ЛІ‑2 (5×106,23ЕІД50/см3) та ЛІ‑1 (5×105,33ЕІД50/см3) до температури 45°С впродовж 90хвилин, під впливом якої титр їх інфекційності знизився відповідно на 4,0 і 4,33lgЕІД50/см3, у порівнянні до вакцинного штаму Ма‑5, який за цього температурного режиму повністю інактивується.
9. На відміну від вакцинного штаму Н‑120 вірусу інфекційного бронхіту курей встановлено лабільність гемаглютинуючих властивостей ізолятів ЛІ‑1 та ЛІ‑2 впродовж зберігання за температури мінус 20°С і тенденцію до зниження рівня гемаглютининів як без, так і після обробки трипсином.
10. Ізольовані штами ЛІ‑1 та ЛІ‑2 нарівні з вакцинними штамами Ма‑5, Н‑120 та 4/91 викликають запальні та деструктивні процеси в організмі курчат: помірний набряк власно слизової оболонки трахеї, збільшення кількості келихоподібних клітин, дециліацію, деструкцію та відшаровування епітеліальних клітин трахеї, гостру венозну гіперемію і лімфоїдну інфільтрацію легень та нирок.
11. Встановлено зворотно-пропорційну кореляцію між циліарною активністю трахеї й титром антитіл до вірусу інфекційного бронхіту в курчат після інокуляції ізоляту ЛІ‑2 і штаму Н‑120. З підвищенням титру антитіл від 3,75 до 4,5log2 подовжується термін (до 34діб) та знижується ступінь прояву циліостазу трахеї від 40,0 до 31,75 і від 19,25 до 10,00 балів відповідно.

ПРОПОЗИЦІЇ ВИРОБНИЦТВУ
1. Методичні рекомендації «Визначення циліарної активності трахеї курчат та мітотичного режиму перещеплюваної культури клітин Vero, інфікованих штамами вірусу інфекційного бронхіту курей», які затверджені науково-методичною радою Державного комітету ветеринарної медицини України (протокол №1 від 20грудня 2007р.).
2. Ізолят ЛІ‑1 як продуцент антигену вірусу інфекційного бронхіту курей (родина Coronaviridae, Coronavirus) (деклараційний патент України на корисну модель №26102 від 10.09.2007р.).
3. Ізолят ЛІ‑2 як продуцент антигену вірусу інфекційного бронхіту курей (родина Coronaviridae, Coronavirus) (деклараційний патент України на корисну модель №26692 від 10.10.2007р.).

СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ

1. Bijlenga G. Proposal for vaccination against SARS coronavirus using avian infectious bronchitis virus strain H from The Netherlands [Text] / G.Bijlenga // J. Infect. 2005. Vol. 51, № 3. С. 263265.
2. Evolutionary implications of Avian Infectious Bronchitis Virus (AIBV) analysis [Text] / P. Shi [et al.] // Cell Res. 2006. Vol. 16, № 3. P.323327.
3. Cavanagh D. Severe acute respiratory syndrome vaccine development: experiences of vaccination against avian infectious bronchitis coronavirus [Text] / D.Cavanagh // Avian Pathol. 2003. Vol. 32, № 6. P.567582.
4. Вербицький П.І. Вопросы ветеринарии [Текст] / П.І.Вербицький // Агроперспектива. 2004. − №6. С. 5052.
5. Ігнатов М.М. Епізоотичний моніторинг інфекційних хвороб птиці [Текст] / М.М. Ігнатов // Вет. медицина. 2001. − № 2. С. 2122.
6. Іммуно-епізоотологічний моніторинг найбільш небезпечних та маловивчених вірусних хвороб птиці (грипу, ньюкаслської хвороби, ІБХ,ІБК, ІТС, вірусного ентериту гусей) [Текст] / В.І. Сікачина [та ін.] // Вет. медицина України. 2006. − № 10. − С. 913.
7. Infectious bronchitis serology in broiler breeders: correlation between antibody titers and performance in vaccinated flocks [Text] / P. De Herdt [et al.] // Avian Dis. − 2001. Vol. 45, № 3. P. 612619.
8. Сюрин В.Н. Диагностика вирусных болезней животных : справочник [Текст] / В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина − М.: Агропромиздат, 1991. − 528 с.
9. Completion of the sequence of the genome of the coronavirus avian infectious bronchitis virus [Text] / M.E. Boursnell [et al.] // J. Gen. Virol. 1987. Vol. 68, № 3. P. 5777.
10. Zhoo X. Presence of subgenomic mRNAs in virions of coronavirus IBV [Text]/ X. Zhoo, К. Shaw, D. Cavanagh // Virol. − 1993. − Vol. 196, №1. − P. 172178.
11. Brian D.A. Coronavirus genome structure and replication [Text] / D.A. Brian, R.S. Baric // Curr. Top. Microbiol. Immunol. − 2005. − Vol. 287. − P.130.
12. Chen Н. Interaction of the coronavirus nucleoprotein with nucleolar antigens and the host cell [Text] / Н. Chen, Т. Wurm, Р. Britton // J. Virol. − 2002. − Vol. 76, № 10. − P. 52335250.
13. Morphogenesis of avian infectious bronchitis virus and a related human virus (strain 229E) [Text] / W.B. Becker [et al.] // J. Virol. − 1967. − Vol. 1, № 5. − P. 10191027.
14. Справочник ветеринарного врача птицеводческого предприятия / Под ред. Р.Н. Коровина. − СПб., 1995. − Т. 1. 125 с.
15. Harkness J.W. Morphological variation among avian infectious bronchitis virus strains [Текст] / J.W. Harkness, C.D. Bracewell // Res. Vet. Sci. − 1974. − Vol. 16. − P. 128131.
16. Collins M.S. Heterogeneity of infectious bronchitis virus grown in eggs [Text] / M.S. Collins, D.J. Alexander, J.W. Harkness // Arch. Virol. − 1976. Vol. 50, №1−2. − Р. 5572.
17. Iritani Y. Purification of small size infectious bronchitis virus isolated from nephritic infectious bronchitis of chicken and some of its characteristics [Text] / Y. Iritani, S. Takigami // Japan Poult. Sci. − 1995. − Vol.32, № 1. − P. 4751.
18. Cavanagh D. Structural polypeptides of coronavirus infectious bronchitis virus [Text] / D. Cavanagh // J. Gen. Virol. − 1981. − Vol. 53, № 3. − P.93103.
19. Nagy E. Polypeptide patterns of infectious bronchitis virus serotypes fall into two categories [Text] / E. Nagy, B. Lomniczi // Arch. Virol. − 1979. − Vol. 61, № 4. − P. 341345.
20. Cavanagh D. Coronavirus IBV: structural characterization of the spike protein [Text] / D. Cavanagh // J. Gen. Virol. − 1983. − Vol. 64, Pt. 12. − P.25772583.
21. Ігнатов М.М. Наукове обґрунтування вакцинопрофілактики інфекційного бронхіту курей [Текст] / М.М. Ігнатов: автореф. дис... канд. вет. наук : 16.00.03 / Ін-т експерим. і клін. вет. медицини. Х., 2003. 24 с.
22. Collins M.S. Avian infectious bronchitis virus structural polypeptides: effect of different conditions of disruption and comparison of different strains and isolates [Text] / M. S. Collins, D. J. Alexander // Arch. Virol. − 1980. − Vol. 63, № 34. − P. 239251.
23. Alexander D.J. The purification and polypeptide composition of avian infectious bronchitis virus [Text] / D. J. Alexander, M.S.Collins // Microbiol. − 1977. − Vol. 18, № 72. − P. 8798.
24. Macnaughton M.R. The polypeptide composition of avian infectious bronchitis virus particles [Text] / M.R. Macnaughton M.R., M.H. Madge // Arch. Virol. 1977. Vol. 55, № 12. P. 4754.
25. Lomniczi B. Polypeptides of infectious bronchitis virus. I. Polypeptides of the virion [Text]/ B. Lomniczi, J. Morser // J. Gen. Virol. − 1981. − Vol. 55, Pt. 1. − P. 155164.
26. Replication and morphogenesis of avian coronavirus in Vero cells and their inhibition by monensin [Text]/ F.V. Alonso-Caplen [et al.] // Virus Res. − 1984. − Vol. 1, № 2. − P. 153167.
27. Characterization of Mexican strains of avian infectious bronchitis isolated during 1997 [Text] / M. Escorcia [et al.]// Avian Dis. 2000. − Vol. 44, № 4. − P. 944947.
28. Reverse genetics system for the avian coronavirus infectious bronchitis virus [Text]/ R. Casais [et al.]// J. Virol. − 2001. − Vol. 75, № 24. − P. 1235912369.
29. Recombinant avian infectious bronchitis virus expressing a heterologous spike gene demonstrates that the spike protein is a determinant of cell tropism / R. Casais [et al.]// J. Virol. − 2003. − Vol. 77. − P. 90849089.
30. A single amino acid mutation in the spike protein of coronavirus infectious bronchitis virus hampers its maturation and incorporation into virions at the nonpermissive temperature [Text] / S. Shen [et al.]// Virol. − 2004. − Vol. 326, № 2. − P. 288298.
31. Использование рекомбинантного N-белка в непрямом варианте иммуноферментного анализа для обнаружения антител к вирусу инфекционного бронхита кур [Текст] / Н.Н. Луговская [и др.] // Труды федерального центра охраны здоровья животных. Владимир, 2005. − С. 261266.
32. The nucleocapsid protein of coronavirus infectious bronchitis virus: crystal structure of its N-terminal domain and multimerization properties [Text] / H. Fan [et al.]// Structure. − 2005. − Vol. 13, № 12. − P. 18591868.
33. Delineation and modelling of a nucleolar retention signal in the coronavirus nucleocapsid protein [Text] / M.L. Reed [et al.]// Traffic. − 2006. − Vol. 7, № 7. − P. 833848.
34. Novel variation in the N protein of avian infectious bronchitis virus [Text] / S.I. Sapats [et al.] // Virol. − 1996. − Vol. 226, № 2. − P. 412417.
35. Biochemical evidence for the presence of mixed membrane topologies of the severe acute respiratory syndrome coronavirus envelope protein expressed in mammalian cells [Text] / Q. Yuan [et al.]// FEBS Lett. − 2006. − Vol. 580, № 13. − P. 31923200.
36. Corse E. The cytoplasmic tails of infectious bronchitis virus E and M proteins mediate their interaction [Text] / E. Corse, C. Machamer // Virology. − 2003. − Vol. 312, № 1. − P. 2534.
37. Corse E. Infectious bronchitis virus E protein is targeted to the Golgi complex and directs release of virus-like particles [Text] E. Corse, C.Machamer // J. Virol. − 2000. − Vol. 74, № 9. − P. 43194326.
38. Jia W. Genetic and antigenic diversity in avian infectious bronchitis virus isolates of the 1940s [Text] / W. Jia, S. Mondal // Avian Disease. − 2002. − Vol. 46, № 2. − P. 437441.
39. Cavanagh D. Вирус инфекционного бронхита: подвижная цель [Text] / D. Cavanagh // Poultry Internachional. 1999. Vol. 38, № 3. P. 345−354.
40. Ignjatovic J. Structural proteins of avian infectious bronchitis virus: role in immunity and protection [Text] / J. Ignjatovic, L. Galli // Adv. Exp. Med. Biol. − 1993. − Vol. 342. − P. 449453.
41. Інфекційний бронхіт курей [Текст] / О. Борисов, Т.Хлібова, С.Фролов, О. Семененко // Вет. медицина України. − 1998. − № 5 − С. 2829.
42. Лихачев Н.В. Инфекционный бронхит птиц [Текст] / Н.В.Лихачев, Я.Р.Голод // ГНКИ вет. препаратов. М., 1972. − № 5. − С. 712.
43. Shen S. Characterization of temperature-sensitive (ts) mutants of coronavirus infectious bronchitis virus [Text] / S. Shen, D. Liu // Adv. Exp. Med. Biol. − 2001. Vol. 494. P. 557562.
44. Singh I.P. Differentiation of avian infectious bronchitis virus isolates by thermal sensitivity [Text] / I.P. Singh, C.H. Cunningham // Avian Dis. − 1978. − Vol. 2, № 3 − P. 440450.
45. Attenuation of avian infectious bronchitis virus by cold-adaptation [Text] / J. Jr. Gelb [et al.]// Avian Dis. − 1991. − Vol. 35, № 4 − P. 847853.
46. Otsuki К. Studies on avian infectious bronchitis virus (IBV). I. Resistance of IBV to chemical and physical treatments [Text] / K. Otsuki, H.Yamamoto, M. Tsubokura // Arch. Virol. 1979. Vol. 6, № 1. P. 2532.
47. Yan-WeiWei Isolation and identification of avian infectious provenrticulus disease virus strain T95 [Text] / Yan-WeiWei, Zhu-GuoQuang. // Chin. J. Vet. Med. − 1999. − Vol. 25, № 3 − P. 1011.
48. Variant infectious bronchitis virus isolated from Indiana chickens / E. Gingerich [et al.] // Poult. Sci. − 1976. − Vol. 55, № 4 − P. 14821485.
49. An infectious bronchitis virus isolated from chickens experiencing a urolithiasis outbreak. I. In vitro characterization studies [Text] / B.S. Cowen [et al.]// Avian Dis. − 1987. − Vol. 31, № 4 − P. 878883.
50. Effects of cold storage on detection of avian infectious bronchitis virus in chicken carcasses and local antibodies in tracheal washes [Text] / K.Ganapathy [et al.] // J. Virol. Methods. − 2005. − Vol. 126, № 12. − P. 8790.
51. Hofstad M.S. Скорости инактивации некоторых лиофилизированных птичьих (домашней птицы) вирусов [Text] / M.S. Hofstad // Avian Dis. − 1963. − Vol. 1. − P. 170.
52. Влияние остаточной влажности и изолирующей атмосферы на жизнеспособность двух лиофилизированных вакцин [Text] / P.M. Precausta [et al.]// J. Clin. Microbiol. − 1980. − Vol. 12. − P. 497499.
53. Cублимационное высушивание вирусных препаратов (Приложение к т.1 (48) «Архива ветеринарных наук») [Текст] / А.И. Кобатов, В.О.Виноходов, Д.О. Виноходов − СПб., 1998. − C. 134135.
54. Cunningham C.H. Symposium on immunization against infectious bronchitis virus. I. Some basis properties of infectious bronchitis virus [Text] / C.H. Cunningham // Am. J. Vet. Res. − 1957. − Vol. 18. − P. 648654.
55. Малушко В.В. Малоизученные вирусные болезни птиц [Текст] / В.В.Малушко, Р.Н. Коровин. − М.: ВНИИТЭИ Агропром, 1992. − С. 3235.
56. Neuraminidase treatment of avian infectious bronchitis coronavirus reveals a hemagglutinating activity that is dependent on sialic acid-containing receptors on erythrocytes [Text] / B. Schultze [et al.]// Virol. − 1992. − Vol. 189, № 2. − P. 792794.
57. Sialic acid is a receptor determinant for infection of cells by avian Infectious bronchitis virus [Text] / C. Winter [et al.] // J. Gen. Virol. − 2006. − Vol. 87, № 5. − P. 12091216.
58. Chen-Chang Hai Isolation and identification of a kidney type strain of infectious bronchitis virus infectious bronchitis [Text] / Chen-Chang Hai, Shao-Cuili // Chin. J. Vet. Sci. Tech. − 1997. − Vol. 24, № 3. − P. 2223.
59. Wu-Yan Gong Identification of nephropathogenic infectious bronchitis virus using tracheal orbiculus tissue culture (TOC) [Text] / Wu-Yan Gong, Wang Yong-Ling // Chin. J. Vet. Sci. Tech. − 1996. − Vol. 22, № 4. − P.1618.
60. Zhou-Jian Qiang Isolation and identification of the kidney from of infectious bronchitis virus [Text] / Zhou-Jian Qiang, Lu-Zhen Xiang // Chin. J. Vet. Sci. Techn. − 1995. − Vol. 25, № 8. − P. 2223.
61. Abdul Aziz T.A. Использование реакции задержки непрямой гемагглютинации и реакции гемагглютинации для вируса инфекционного бронхита [Text] / T.A. Abdul Aziz, G.M. Jawad // Indian J. of Comparative Microbiol., Immunol. and Infections Dis. − 1989. − Vol. 10, № 2. − P. 100102.
62. A hemagglutinating fraction of infectious bronchitis virus [Text] / N. Biswal [et al.]// Am. J. Vet. Res. − 1966. − Vol. 27. − P. 11571161.
63. Wu-Yan Gong Ways to improve the haemagglutination antigen titres of avian infectious bronchitis virus and its inactivation [Text] / Wu-Yan Gong, Wang-Yong Ling // Chin. J. Vet. Sci. − 1997. − Vol. 17, № 3. − С. 222225.
64. Biological properties of the chick infectious bronchitis virus isolated in Russia [Text] / G.V. Batchenko [et al.] // Vopr. Virusol. − 2006 − Vol. 51, № 1. − P. 4548.
65. Isolation and characterization of a novel antigenic subtype of infectious bronchitis virus serotype DEO 072 [Text] / S.P. Mondal [et al.]// Avian Dis. − 2001. − Vol. 45, № 4. − P. 10541059.
66. Isolation of a variant infectious bronchitis virus in Australia that further illustrates diversity among emerging strains [Text] /