Белки транскрипционно-активных участков хроматина Караванов, Александр Аркадьевич

brief description

Караванов,АлександрАркадьевич.Белкитранскрипционно-активныхучастковхроматина: диссертация ... доктора биологических наук : 03.00.15. - Москва, 1984. - 363 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
^•л^- B/^iD Г AKAJlEiWl НАУК СССР ИНСТИТУТ БИОЛОГИИ РАЗВИТИЕ им. Н^К. КОЛЬЦОВА На правах рукописи УПК 547.9S3.3КАРАВАНОВАлександрАркадьевичБЕЛКИТРАНСКРИПЦИОННО-АКТИВНЫХУЧАСТКОВХРОМАТИНА03.00*15 - генетика Диссертация на соискание згченой степени доктора биологических наук г, Москва 1984 ОГЛАВЛЕНИЕ

стр. 2
БелокА-24 5. Группабелковвысокой подвижности ( HMG--белки) 1. Свойства ШЖ- ~белков2. Ткане- и видоспецифичность 3. Функция т» Структуратранскрипционноеактивныхучастковхроматина*.«•«..... I.Использование нуклеаз для изучения транскрипцинно-активногохроматина2. Недометилирование ДНК и роль

стр. 12
также установлено, что этибелкине вхо­ дят в составтранскрипционноактивногохроматина. Показано, что гистон HI либо совсем не содержится втранскрипционноактивныхучасткаххроматина, либо содержится в крайне незначительных коли­ чествах. Продемонстрировано значение высоких уровней упаковки хро­

Оглавление диссертациидоктор биологических наук Караванов, Александр Аркадьевич
Введение
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
I. Общие понятия о структуре хроматина.
Нуклеосомный уровень организации хроматина
2. Фибриллы нуклеосом
3. Супрафибриллярная упаковка хроматина.
4. Организация супрафибрилл хроматина в интерфазном ядре.
5. Упаковка хроматина в метафазных хромосомах.
II. Негистоновые белки хроматина (НГБ)*.
I. Общая характеристика НГБ как группы.
2» НГБ и процесс транскрипции.
3. НГБ, прочно связанные с хроматином.
4* Белок А-24.,.
5» Группа белков высокой подвижности
С HMG-- белки)
1. Свойства HMG-- белков
2. Ткане- и ввдоспецифичность
3. Функция
Ш* Структура транскрипционно- активных участков хроматина *.
1.Использование нуклеаз для изучения транскрипцинно-активного хроматина.
2. Недометилирование ДНК и роль отдельных ее участков в составе активного хроматина.
3. Гистон НЕ и его роль в организации активных участков хроматина.Л
1У. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
1. Получение эритробластической селезенки.
2. Получение ретикулоцитов
3. Выделение мРНК из ретикулоцитов.
I. Выделение полисом
2# Выделение тотальной РНК.
3. Хроматография тотальной РНК на колонках олиго-дТ и "NitroceltS ».
4* Ультрацентрифугирование РНК в линейном градиенте плотности сахарозы
5. Электрофорез РНК в полиакриламидном геле
6. Бесклеточная система синтеза белка из зародышей пшеницы
7. Щентификация продуктов трансляции
4. Выделение ядер из тканей млекопитающих.
I. Выделение ядер из яиц плодовой мушки
5. Выделение и очистка хроматина из ядер нормальной и эритробластической селезенки мыши.
1. Фракционирование на легко и прочно связанные белки хроматина.
2. Система транскрипции хроматина
6. Выделение ДНК.
1. ДНК из ядер селезенки мыши.
2. Выделение меченной К - тимидином ДНК
3. Гибридизация Н3- кДНК глобина мыши с ДНК клеток эритробластической селезенки.
7. Обработка ядер нуклеазами
8. Фракционирование белков
9» Получение индивидуальных фракций
HMG--белков
1. Электрофоретический анализ белков.
2. Препаративное получение белков методов электроэлюции ♦
3* Изоэлектрофокусирование белка в пластинах полиакриламвдного геля ,.
4. Серебрение белков после электрофореза и изоэлектрофокусирования.
5. Определение аминокислотного состава».
6. Определение М - концевой аминокислоты
7. М- концевой анализ с последовательным отщеплением аминокислот.
8. Определение молекулярной массы белка.
9. Исследование способности образовывать комплексы с
10. Иодирование белков in vitro
II • Изучение межбелковых взаимодействий. то с;
12. Нагрузка меченным I белком эритроцитов .Л
10» Радиоавтография клеточных препаратов.
I. Анализ белка, включившегося в клетки .».
II, Очистка лимфоцитов человека и получение из них ядер.
12. Сканирование негативов
13. Избирательное удаление из ядер гистона HI .,.
I. Экстракция ядер после удаления гистона HI
РЕЗУЛЬТАТЫ И (БШЖЕНИЕ.
Уф Анализ хроматина нормальной и эритробластической селезенки мыши
1# НГБ нормальной и эритробластической селезенки мыши.
2*Транскрипция двух типов хроматина in Vitro .•••
3* Выделение и идентификация глобиновой мРНК мыши .••••
У1* Анализ белков, высвобождающихся из ядер при ограниченном их гидролизе нуклеазами.Л
1. Анализ белков,высвобождающихся из ядер под действием микрококковой нуклеазы.
2. Сравнение белков,, высвобождающихся из ядер цри мягком гидролизе ДНКазой I и микрококковой нуклеазой
УП. Характеристика свойств белка P$j.
1. Выделение и характеристика HMS-1 и белков из селезенки мыши.
2. Электрофоретические свойства PJ>j
3# Аминокислотный состав
4. КЕ - концевая аминокислота.
5. Молекулярная масса
6« Изоэлектрофокусирование
7. Использование серебрения для повышения чувствительности метода изоэлектрофокусирования
8. Взаимодействие с компонентами хроматина
9. Кинетика выхода белка P$j из ядер.*
У111. Микроинъекция белка P$j в
I - клетки мыши
IX» Анализ белков, высвободившихся из ядер клеток разных видов эукариот при ограниченном гидролизе нуклеазами.
I* Содержание белка, сходного с P&j в клетках человека, различающихся по транскрипционной активности.
X. Влияние избирательного удаления гистона HI на экстрагируемость НГБ и гистонов из
I* Изменение экстрагируемости белка
Pi-j
2.; 'Изменение экстрагируемости гистонов после обработки ядер ДНКазой I.