Электрофоретическое определение нейротрансмиттеров в биологических объектах с использованием OFF-LINE и ON-LINE концентрирования Сидорова, Алла Анатольевна

brief description

Сидорова, Алла Анатольевна.
Электрофоретическое определение нейротрансмиттеров в биологических объектах с использованием OFF-LINE и ON-LINE концентрирования : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.02. - Санкт-Петербург, 2006. - 184 с. : ил
Оглавление диссертациикандидат химических наук Сидорова, Алла Анатольевна
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ.
1.1. Общая характеристика нейротрансмиттеров.
1.2. Методы определения нейротрансмиттеров в биологических объектах.
1.2. 1. Иммунологические и радиохимические методы анализа.
1.2. 1. 1. Иммунологический анализ.
1.2. 1.2. Радиоферментный анализ.
1. 2. 2. Газовая хроматография.
1.2. 2. 1. Силилирование.
1. 2. 2. 2. Алкилирование.
1. 2. 2. 3. Ацилирование.
1.2.3. Определение биогенных аминов и аминокислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
1. 2. 3. 1. УФ- и флуориметрическое детектирование.
1. 2. 3. 2. Электрохимическое детектирование.
1.2.4. Метод высокоэффективной тонкослойной хроматографии (ВЭТСХ).
1.2.5. Метод капиллярного электрофореза (КЭ) при определении нейротрансмиттеров.
1. 2. 5. 1. Основы метода капиллярного электрофореза.
1. 2. 5. 2. Основные варианты капиллярного электрофореза (КЭ).
1. 2. 5. 2. 1. Капиллярный зонный электрофорез (КЗЭ).
1.2.5.2.2. Мицеллярная электрокинетическая хроматография
МЭКХ).
1. 2. 5. 3. Методы детектирования в капиллярном электрофорезе.34 1. 2. 5. 3. 1. УФ-детектирование в капиллярном электрофорезе.
1. 2. 5. 3. 2. Флуоресцентное детектирование.
1. 2. 5. 3. 3. Электрохимическое детектирование.
1. 2. 5. 3. 4. Масс-спектрометрическое детектирование.
1. 2. 5. 4. Возможности on-line концентрирования в КЭ.
1.2.5.5. Эффективность, разрешение и селективность разделения в методе капиллярного электрофореза.
1.2.5.6. Характеристика макроциклических реагентов, используемых в капиллярном электрофорезе.
1.3. Пробоподготовка биологических объектов к электрофоретическому определению биогенных аминов и аминокислот.
1.3. 1. Твердофазная экстракция.
1. 3. 2. Жидкостная экстракция катехоламинов.
1. 3. 3. Жидкостная экстракция аминокислот.
ГЛАВА 2. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЪЕКТОВ И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2. 1. Аппаратура.
2. 2. Реагенты.
2. 3. Методы исследования.
2 .3 .1. Метод капиллярного электрофореза с УФ-детектированием.
2. 3. 2. Метод капиллярного электрофореза с МС-детектированием.64 2.3.3. On-line концентрирование в режиме капиллярного электрофореза.
2. 3. 4. Метод высокоэффективной тонкослойной хроматографии.
2. 3. 5. Использование обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с амперометрическим детектированием при определении катехоламинов.
2.3.6. Масс-спектрометрический анализ реальных объектов и индивидуальных нейротрансмиттеров.
2. 3. 7. Пробоподготовка биологических объектов к анализу.
ГЛАВА 3. ВЫЯВЛЕНИЕ ДОМИНИРУЮЩИХ ФАКТОРОВ, ОПРЕДЕЛЯЮЩИХ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ НЕЙРОТРАНСМИТТЕРОВ.
3. 1. Нейротрансмиттеры. Задачи и проблемы их определения в биологических жидкостях.
3.2. Установление факторов, влияющих на электрофоретическое разделение биогенных аминов.
3.2. 1. Оптимизация электрофоретического разделения биогенных аминов методом капиллярного электрофореза с УФ-детектированием.
3.2.1.1. Оценка констант устойчивости комплексов биогенных аминов с 18-краун-6.
3.2.1.2. Сравнительные оценочные характеристики влияния макроциклов, ион-парного агента и органического растворителя на электрофоретическое разделение аналитов.
3.2.2. Влияние Р-циклодекстрина на электрофоретические характеристики нейротрансмиттерных ароматических кислот.
3.2.2.1. Оценка констант устойчивости комплексов ароматических кислот с p-циклодекстрином.
3.2.3. Определение ароматических кислот методом МЭКХ с УФдетектированием.
3. 2. 4. Выяснение возможностей электрофоретического определения алифатических аминокислот методом капиллярного электрофореза с УФ-детектированием без предварительной дериватизации и с использованием фенилтиокарбамоильных производных.
3.2.5. Изучение кинуренинового пути метаболизма триптофана методами капиллярного электрофореза.
3.2.6. Определение биогенных аминов методом капиллярного электрофореза с масс-спектрометрическим детектированием.
3.2.7. On-line концентрирование в режиме капиллярного электрофореза.
3.3. Хроматографическое определение нейротрансмиттеров.
3.3.1. Анализ катехоламинов методом ОФ ВЭЖХ с амперометрическим детектированием.
3.3.2. Определение триптофана и его метаболитов методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии.
3.4. Масс-спектрометрическое определение нейротрансмитгеров на приборе MALDI-TOF "Voyager DE".
3. 5. Пробоподготовка биологических жидкостей к анализу.
3.5. 1. Оптимизация условий пробоподготовки биологических объектов для масс-спектрометрического анализа.
3.5.2. Пробоподготовка биологических жидкостей для электрофоретического и хроматографического определения.
3.5.2.1. Твердофазная экстракция катехоламинов на активированном оксиде алюминия.
3. 5. 2. 2. Твердофазная экстракция катехоламинов на силикагеле.
3.5.2.3. Твердофазная экстракция катехоламинов на модифицированном С18.
ГЛАВА 4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРИЛОЖЕНИЯ.
4.1. Определение лекарственного препарата «Алкеран».
4. 1. 1. Определение мелфалана в режиме капиллярного зонного электрофореза.
4.2. Определение 3-гидроксикинуренина в структурах мозга Дрозофил.
4. 2. 1. Кинурениновый путь метаболизма триптофана.
4. 2. 2. Оптимизация условий определения и разделения метаболитов кинуренинового пути триптофана в режиме капиллярного электрофореза.
4. 2. 3. Определение 3-гидроксикинуренина, кинуренина и триптофана в реальном образце методом капиллярного электрофореза.
4.3. Определение катехоламинов в биологических жидкостях при сердечно-сосудистых заболеваниях.:.
ВЫВОДЫ.
ПРИМЕЧАНИЯ.
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.