Исследование ионных транспортеров плазмалеммы и тонопласта ячменя Ершов, Павел Викторович

brief description

Ершов,ПавелВикторович.Исследованиеионныхтранспортеровплазмалеммыитонопластаячменя: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 2006. - 109 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
61:06-3/900 На правах рукописи Российская академия сельскохозяйственных наук ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологииЕршовПавелВикторовичИсследованиеионныхтранснортеров нлазмалеммы и тононластаячменя(03.00.03. - Молекулярная биология) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических

стр. 4
3.5. Диссоциация Vi сектора V-АТФазыи иммунодетекция белков 14-3-ЗС 3.6.Ионныйобмен в мембранных везикулахплазмалеммыитонопласта3.7. Кинетикаионногообмена в везикулахплазмалеммыитонопласта3.8. Влияние амилорида наионныйобмен 3.9. Идентификация предполагаемого ¥L^/H^- антнпортера в ячмепе

стр. 4
4.2. Функционированиеионныхтранспортеровплазмалеммыитонопластав проросткахячменя4.2.1. Н^-АТФазы 4.2.2. NaVH'^-обменная активпость в везикулахплазмалеммыитонопласта4.2.3. К'^/Н^-обменная активность в везикулахтонопластаЗАКЛЮЧЕНИЕ ВЫВОДЫ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 79 79 82 87 90 92 93 75 72 73 75

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Ершов, Павел Викторович
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. р 1.1. Солевой стресс и его влияние на растение.
1.1.1. Гиперосмотический стресс.
1.1.2 Окислительный стресс.
1.2. Солеустойчивость растений.
1.2.1. Клеточные детерминанты солеустойчивости.
1.3. Ионный гомеостаз растительной клетки при солевом стрессе.
1.3.1. Поступление ионов натрия в клетку.
1.3.2. Удаление ионов натрия из растительных клеток.
1.3.3. Компартментация ионов натрия в клеточных вакуолях.
1.3.4. Поступление анионов хлора.
1.4. Поддержание ионного гомеостаза при солевом стрессе в растениях.
1.4.1. Начальное поступление в корень и удаление Na+ из клеток корня.
1.4.2. Контроль поступления Na+ в ксилему.
1.4.3. Реабсорбция Na+из ксилемы.
1.4.4. Рециркуляция Na+ по флоэме из листьев обратно в корни.
1.4.5. Вакуолярная компартментация Na+ в надземной части.
1.4.6. Плазмалеммарный Ыа+/Н+-антипортер в клетках листьев.
1.4.7. Накопление Na+ в морфологических образованиях листа.
1.5. Сигналы трансдукции солевого стресса в растениях.
1.5.1. SOS сигнальный каскад в Arabidopsis thaliana.
1.5.2. Сигналы трансдукции гиперосмотического стресса. ф 1.5.2.1. АБК и Са2+-зависимые пути передачи стрессовых сигналов.
1.6. Ыа+/Н+-антипортеры эукариот.
1.6.1. Сравнительный анализ функций Ыа+/Н+-антипортеров эукариот.
1.6.2. Структурные особенности Ыа+/Н+-антипортеров.
1.6.3. Структура Ыа+/Н+-антипортеров растений.
1.6.3.1. Плазмалеммарный На7Н+-антипортер.
1.6.4. Механизм функционирования Ыа+/Н+-антипортера.
1.7. Функционирование Ыа+/Н+-антипортеров в животных клетках. ф 1.7.1. Регуляция активности Ыа+/Н+-антипортеров житвотных клеток.
1.8. Ионные транспортеры дрожжей.
1.9. Функциональное значение Na+/H+- и КТН*- антипортеров растений.
1.9.1. К+/Н+-антипортеры.
1.9.2. Ыа+/Н+-антипортеры.
1.9.2.1. Биохимические свойства. w 1.9.2.2. Значение Na /Н -антипортеров для растительной клетки.
1.9.2.3. Сравнение структуры и функций ионных транспортеров.
1.10. Регуляция Ыа+/Н+-антипортеров растений.
1.10.1. С- и N-терминальпые регуляторные домены.
1.10.2. Регуляция экспрессии Ыа+/Н+-антипортеров на транскрипционном и посттранскрипционных уровнях.
1.11. Цели и задачи работы.
II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Объект исследования. ф 2.2. Получение растительного материала.
2.3. Выделение РНК.
2.4. Синтез первой цепи кДНК.
2.5. ПЦР.
2.6. Клонирование.
2.7. Выделение плазмидной ДНК.
2.8. Получение и очистка полипептида HvNHX4 для получения поликлональных антител.
2.9. Электрофорез белков в ПААГ с SDS.
2.10. Иммуноблоттинг 14-3-3 белков и HvNHX4.
2.11. Диссоциация сектора Vi от Vq V-АТФазы.
2.12. Выделение плазматических мембран.
Ф 2.13. Выделение вакуолярных мембран.
2.14. Фракционирование мембран ячменя центрифугированием в градиенте плотности сахарозы.
2.15. Измерение АТФ - гидролазной активности в мембранных препаратах.
2.16. Измерение Н+-траиспортной активности Н+-АТРаз.
1 2.17. Измерение ионного обмена и пассивной проницаемости везикул для протонов
2.18. Реактивы.
2.19. Статистика.
• III. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1. Характеристика выхода, чистоты, ориентации выделенных везикул плазмалеммы и тонопласта.
3.2. Измерение Н+-трапспортной активности Н^АТФаз плазмалеммы и тонопласта.
3.3. Измерение пассивной проницаемости везикул для протонов и АТФ-гидролазной активности.
3.4. Исследование распределения 14-3-3 белков в мембранах тонопласта.
3.5. Диссоциация Vi сектора V-АТФазыи иммунодетекция белков 14-З-ЗС.
3.6. Ионный обмен в мембранных везикулах плазмалеммы и тонопласта.
3.7. Кинетика ионного обмена в везикулах плазмалеммы и тонопласта.
3.8. Влияние амилорида на ионный обмен.
3.9. Идентификация предполагаемого К+/Н+- антипортера в ячмене.
3.10. Установление внутриклеточной локализации HvNHX4.
3.11. Вестерн анализ HvNHX4 в вакуолярных мембранах, выделенных из разных сортов ячменя. ф 3.12. Исследование экспрессии HvNHX4 в разных сортах ячменя.
IV. ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Идентификация предполагаемого вакуолярного К+/Н+-антипортера ячменя HvNHX4.
4.2. Функционирование ионных транспортеров плазмалеммы и тонопласта в проростках ячменя.
4.2.1. Н+-АТФазы.
4.2.2. Ыа+/Н+-обменная активность в везикулах плазмалеммы и тонопласта.
4.2.3. К+/Н+-обменная активность в везикулах тонопласта.