Изучение белка E(y)2P Drosophila melanogaster, являющегося паралогом фактора транскрипции E(y)2 Марданов, Павел Владимирович

brief description

Марданов,ПавелВладимирович.ИзучениебелкаE(y)2PDrosophilamelanogaster,являющегосяпаралогомфакторатранскрипцииE(y)2: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 2005. - 107 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
6(;оъ-з/ъьб РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ БИОЛОГИИ ГЕНА На правах рукописиМардановПавелВладимировичИЗУЧЕНИЕБЕЛКАE(Y)2PDROSOPHILAMELANOGASTER,ЯВЛЯЮЩЕГОСЯПАРАЛОГОМФАКТОРАТРАНСКРИПЦИИE(Y)2 Специальность 03.00.03 - «молекулярная биология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата

стр. 22
действующих на указанные общиефакторытранскрипции[7]. Часть П.ФакторытранскрипцииГлава 2.1. Компоненты транскрипционного аппаратаБелки-регуляторытранскрипции(факторытранскрипции) важны для жизнедеятельности организма. Это подтверждает тот факт, что более 5% генов высших эукариот кодирует транскрипционные

стр. 80
сигнала РНК использовали зонд гена домашнего хозяйства G3PDH. 80 Гены e(y)2, e(y)2P уDrosophilapseudoobscura иDrosophilamelanogasterЯвляетсяли ситуация с двумя рассматриваемыми генами-паралогамиуникальной для D.melanogaster, или у других видовDrosophilaтакже существуютпаралогие(у)21 Чтобы ответить

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Марданов, Павел Владимирович
Оглавление.
Введение.
Список использованных сокращений.
Обзор литературы.
Часть I. Аппарат транскрипции у эукариот.
Глава 1.1. Транскрипция у эукариот, РНК-полимеразы.
Глава 1.2. РНК-полимераза II.
Глава 1.3. Области контроля транскрипции (TCR).
Промотор.
ТАТА-элемент.
Инициатор.
CpG-островки.
Глава 1.3. Проксимальные и дистальные элементы, энхансеры.
Глава 1.5. LCR, MAR.
Глава 1.6. Инициация транскрипции РНК-полимеразой II.
Часть II. Факторы транскрипции.
Глава 2.1. Компоненты транскрипционного аппарата.
Глава 2.2. Общие факторы транскрипции (GTF).
TFIIA.
TFIIB.
TFIIF.
TFIIHи TFIIE.
Глава 2.2. Активаторы и репрессоры.
ДНК-связывающие домены активаторов (DBD).
Домены активации и репрессии.
Глава 2.4. Корегуляторы.
TFIID.
Медиатор.
Глава 2.5. Посттранскрипционные события.
Часть III. Разнообразие мобильных элементов.
Глава 3.1. Краткая характеристика и классификация мобильных элементов.
Глава 3.2. ДНК-транспозоны или мобильные элементы класса II.
IS прокариот.
ДНК-транспозоны.
Глава 3.3. Общая характеристика ретроэлементов.
Глава 3.4. Ретроэлементы, не содержащие LTR.
Ретроинтроны.
Группа LINE.
SINE-элементы.
Псевдогены.
Процессированные псевдогены.
Псевдогены, возникшие при дупликации геномной ДНК.
Судьба псевдогенов.
Экспериментальная часть.
Объект и задачи исследования.
Гены enhancer of yellow.
Общее описание.
Белок Enhancer of yellow 2 (Е(у)2).
Влияние мутации e(y)2ul на транскрипцию.
Белок Е(у)2 эволюционно консервативен.
Активация транскрипции in vitro и взаимодействие с хроматином.
Е(у)2 входит в состав белкового комплекса и взаимодействует с белками-компонентами комплекса TFIID.
Цели работы.
Материалы и методы.
Реактивы.
Работа с Drosophila melanogaster.
Программное обеспечение, базы данных.
Работа с ДНК.
Приготовление компетентных клеток и трансформация. Выделение плазмидной ДНК. Рестрикция, лигирование, переосаждение ДНК, гель-электрофорез.
Секвенирование ДНК.
Введение радиоактивной метки в ДНК-зонд.
Клонирование гена е(у)2Р.
Работа с РНК.
Выделение тотальной РНК.
Очистка поли(А) РНК.
Получение кДНК, обратный ПЦР.
Нозерн-блот-анализ.
Работа с белками.
Экспрессия и очистка рекомбинантных белков.
Получение антител и их очистка.
Белковый гель-электрофорез.
Иммуноблоттинг (вестерн-блот-анализ).
Дот-блот.
Выделение эмбрионального ядерного экстракта.
Выделение белкового экстракта из семенников.
Детекция активности р-галактозидазы.
Результаты.
Геномная характеристика е(у)2Р.
Поиск белков Drosophila melanogaster, гомологичных Е(у)2.
Клонирование и структура е(у)2Р.
Анализ экспрессии е(у)2Р у Drosophila melanogaster.
Нозерн развития.
Нозерн-блот-анализ тканей.
Экспрессия е(у)2Р в тестисах.
Экспрессия е(у)2Р под контролем промотора гена Su(Hw).
Для того, чтобы проверить, являются ли функции белков Е(у)2Р и Е(у)2 идентичными, была создана конструкция, в которой кДНК е(у)2Р находится под контролем конститутивного промотора гена Su(Hw) и получена трансгенная линия мух, несущая данную конструкцию.
Анализ прилегающих областей гена е(у)2Р D. melanogaster.
Анализ гомологов е(у)2. е(у)2 в различных организмах.
Гены е(у)2, е(у)2Р у Drosophila pseudoobscura и Drosophila melanogaster.
Ген е(у)2 является ретрокопией гена е(у)2Р.
Обсуждение результатов.
Структура гомологов белка Е(у)2 у различных организмов.
Ген е(у)2РD. melanogaster экспрессируется в семенниках.
Белок Е(у)2 функционально заменил белок Е(у)2Р.
Предсказанный промотор гена е(у)2 находится в районе встраивания МЭ Stalker в линии е(у)2и1.
Уникальность примера генов е(у)2 и е(у)2Р.
Выводы.
Благодарности.