Изучение свойств гамма-интерферон- и TNF- связывающих белков ортопоксвирусов Непомнящих, Татьяна Сергеевна

brief description

Непомнящих,ТатьянаСергеевна.Изучениесвойствгамма-интерферон-иTNF-связывающихбелковортопоксвирусов: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Кольцово, 2006. - 170 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
рукописиНепомнящихТатьянаСергеевнаИЗУЧЕНИЕСВОЙСТВГАММА-ИНТЕРФЕРОН- И TNFСВЯЗЫВАЮЩИХБЕЛКОВОРТОНОКСВИРУСОВ 03.00.03 - «молекулярная биология» Диссертация

стр. 8
вьщеления; 4. сравнительноеизучениефизико-химических и биологическихсвойстврекомбинантных IFNy-связывающихбелковортопоксвирусов; 5. сравпительноеизучениефизико-химических, иммунохимических и биологическихсвойстврекомбинантныхTNF-связывающихбелковортоноксвирусов; 6. оценка потенциалаTNF-связывающих

стр. 13
Секретируемыйбелок, ингибирует LTa Секретируемыйбелок, ипгибируетTNFСекретируемыйбелок, ццгибируетTNFЧленTNFрецепторпого суцерсемейства,связываетCD 153 Ингибитор трансляции СекретируемыйбелокСекретируемыйбелокИнгибитор PICR и 2,5А синтетазы Секретируемыйбелок, блокирует интерлейкиц (IL) 1 G2R (G2R)

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Непомнящих, Татьяна Сергеевна
• 1. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
2. ВВЕДЕНИЕ.
2.1. Актуальность проблемы.
2.2. Цели и задачи исследования.
2.3. Публикации по теме диссертации.
2.4. Вклад автора.
2.5. Положения, выносимые на защиту.
3. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
3.1. Молекулярные факторы вирулентности вирусов.
3.2. Вирусные гомологи рецепторов TNF и их свойства.
3.3. Поксвирусные ингибиторы действия интерферонов.
3.4. Болезни, обусловленные нарушением продукции TNF и IFNy.
3.5. Препараты, ингибирующие действие TNF и IFNy.
3.5.1. Aumu-WF препараты. ф 3.5.2. Анти-IFNyпрепараты.
3.6. Применение вирусных белков для лечения воспалительных и аутоиммунных состояний.
3.6.1. Вирусные ингибиторы хемокинов.
3.6.2. Вирусные ингибиторы комплемента.
3.6.3. Вирусные анаяоги хемокинов.
3.6.4. Вирусные анаюги IL-10.
3.6.5. Вирусные ингибиторы сериновых протеаз.
4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
4.1. Материалы.
4.1.1. Штаммы бактерий, линии клеток, вирусы и плазмиды, использованные в работе.
4.1.2. Ферменты.
4.1.3. Цитокины, рецепторы цитокинов, антитела к цитокинам.
4.1.4. Программное обеспечение.
4.1.5. Олигонуклеотидные праймеры.
4.1.6. Буферные растворы, используемые в работе.
4.2. Методы.
4.2.1. Культивирование клеток.
4.2.2. Получение рекомбинантных плазмид.
4.2.3. Клонирование фрагмента IgGl.
4.2.4. Получение рекомбинантных бакуловирусов.
4.2.5. Аффинная очистка белков CrmB, CrmB/IgGl и IFNyBP.
4.2.6. Получение иммунных сывороток и политональных кроличьих антител.
4.2.7. Дот-блот-аначиз.
4.2.8. Электрофорез и вестерн-блот-анализ.
4.2.9. Твердофазный шшуноферментный анализ.
4.2.10. Определение биологической активности TNF-связывающих белков.
4.2.11. Определение биологической активности вирусных IFNyBP.
4.2.12. Изучение действия CrmB in vivo.
5. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
5.1. Компьютерный анализ аминокислотных последовательностей IFNy-связывающих белков ортопоксвирусов.
5.2. Компьютерный анализ аминокислотных последовательностей TNFсвязывающих белков ортопоксвирусов.
5.3. Получение рекомбинантных бакуловирусов, продуцирующих MPXV-IFNyBP, CPXV-CrmB/IgGI, VARV-CrmB/IgGI.
5.4. Экспрессия TNF- и IFNy-связывлющих белков ортопоксвирусов в клетках насекомых линии Sf21.
5.5. Очистка рекомбинантных белков.
5.6. Характеристика рекомбинантных VARV-IFNyBP и MPXV-IFNyBP ф электофорезом И вестерн-блот-анализом.
5.7. Изучение биологической активности VARV-IFNyBP и MPXV-IFNyBP in vitro
5.8. Иммунохимическая характеристика аффинноочищенных рекомбинантных CrmB.
5.8.1. Электрофоретический анализ.
5.8.2. Вестерн-блот-анализ CrmB.
5.8.3. Твердофазный ИФА CrmB.ИЗ
5.9. Изучение биологической активности вирусных CrmB in vitro.
5.10. Изучение биологической активности вирусных CrmB in vivo.
5.10.1. Индукция эпдотоксического шока.
5.10.2. Изучение эффектов введениярекомбинантных белков СгтВ интактным мышам и на фоне эпдотоксического шока.
5.10.3. Гистологическое изучение эффектов введениярекомбинантного белка VARV-СгтВ интактным мышам и на фоне эпдотоксического шока.
5.11. Сравнение CrmB с известными антагонистами TNF.
6. ВЫВОДЫ.