Кинетические аспекты моделирования старения в экспериментах на непересеваемой культуре клеток Моргунова Галина Васильевна

brief description

ОГЛАВЛЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИкандидат наук Моргунова Галина Васильевна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Модели для изучения клеточного старения
1.2. Тестирование геропротекторов
1.3. Проблема поиска биомаркёров старения
1.4. Энергетический метаболизм, эффект ограничения питания и аутофагия
1.4.1. Аутофагия
1.4.2. АМРК
1.5. Взаимосвязь изменения рН и процессов старения
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Культура клеток
2.2. Определение митогенных и цитотоксических свойств тестируемых соединений
2.3. Построение кривых выживания культуры клеток
2.4. Оценка способности к образованию колоний
2.5. Окраска клеток метиленовым синим и трипановым синим
2.6. ПЦР в реальном времени
2.6.1. Определение экспрессии генов
2.6.2. Оценка вариации числа копий генов
2.7. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)
2.8. Оценка экспрессии ассоциированной со старением Р-галактозидазы
2.9. Потенциальные геропротекторные и геропромотерные соединения, а также добавки к средам
2.9.1. Изотонический препарат "Квинтон "
2.9.2. 8-оксо-2'-дезоксигуанозин
2.9.3. 2,4-Динитрофенол
2.9.4. Хлорид аммония NH4Cl
2.9.5. Буфер HEPES
2.9.6. Среды разного состава
2.10. Определение pH культуральной среды
2.11. Статистическая обработка данных
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Подбор оптимальных для изучения "стационарного старения" условий работы с непересеваемой культурой клеток
3.1.1. Изменение со временем соотношения живых и мёртвых клеток
3.1.2. Выбор оптимальных условий для культивирования клеток,
претерпевающих "стационарное старение "
3.2. Установление закономерности вымирания клеток в ходе "стационарного старения"
3.3 Поиск биомаркёров, подходящих для определения "возраста" в модели "стационарного старения"
3.3.1. Экспрессия и число копий генов, связанных с аутофагией и регуляцией
клеточной пролиферации
3.3.2. Ассоциированная со старением fi-галактозидаза
3.4. Влияние нарушающего работу лизосом хлорида аммония (NH4Cl) на кинетику гибели клеток
3.5. Исследование влияния потенциальных геропротекторов на рост и гибель культуры клеток, претерпевающей "стационарное старение"
3.5.1. 2,4-Динитрофенол
3.5.2. 8-оксо-2'-дезоксигуанозин
3.5.3. Изотонический препарат "Квинтон" (QMP)
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ
БЛАГОДАРНОСТИ