Клонирование провирусов ретровирусов С-типа мышей и создание на их основе векторов экспрессии генов в клетках про- и эукариот Незнамов, Н.С.

brief description

Незнамов,Н.С.КлонированиепровирусовретровирусовС-типамышейисозданиенаихосновевекторовэкспрессиигеноввклеткахпро-иэукариот: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 1984. - 141 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
(U £ s - il:^^S'^ ИНСТИТУТ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ГЕНЕТИКИ АН СССР УДК 576.858.6 На правах рукописи Н.С. НегнановКЛОНИРОВАНИЕПРОВИРУСОВРЕТРОВЙРУСОВ С-ТЙПАМЫШЕЙИСОЗДАНИЕНА ИХОСНОВЕВЕКТОРОВЭКСПРЕССИИГЕНОВВКЛЕТКАХПРО- И 9УКАРИ0Т. 03.00.03 - молекулярная биология Диссертация на соискание учёной степени

стр. 42
быть даже выше, чем исходных'[124] . Это свойство LTEретровирусовпозволяет использовать клонирован­ ныепровирусыв качестве челночныквекторов, работаьэ!11,их как впро- так и в эу1ариотах. длявекторовэкспрессиикакпро-, так иэукариотчасто ^ - е -^лательна воз^чожность регуляи.ии ихэкспрессии

стр. 42
ин.гг,укцию глюкокортикоидньми гормонами позволяет ис­ пользовать ХТЕиз этогоретровирусадлг, получения такого индуцибельноговектораэкспрессии[62,88,99] - 39 III. Использование других глоделей для пол^щениявекторовэукариот. Кроме геномовретровирусовдля получениявекторов-экспрессииэукариотиспользуются и геномы других вирусов. Так одним из первых- , 1 я этой цели был использован вирус ST -'Ю [Ьт^ 1л • Ол~ нако, из-за...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Незнамов, Н.С.
I.BB№ME 1^!'3
II. ОБЗОР ЛИТЕРАРУРЫ №
ГЛАВА
I. Характеристика генома и биологические особенности ретро вирусов 1^ -30 а) Структура генома ретровирусов. б) Обратная транскрипция и образование кДНК. 3 в) Интеграция кДНК. г) Структура и функции XIDR 10 -16 д) Усиливающие транскрипцию последовательности в XTR ретровирусов. 6 -20 е) Структурные участки генома, необходимые для самосборки и репликации. -22 ж) Биологические свойства ретровирусов. 2 8 з) Регуляция экспрессии ретровирусов общеклеточными механизмами -30 и) Общие черты ретровирусов и мобильных генетических элементов
ГЛАВА
II. Векторные молекулы, полученные на основе геномов ретровирусов
ГЛАВА
III. Использование других моделей для получения векторов эукариот. 9 0
III.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. ,
1) Используемые вирусы и ферменты
2) Выделение высокомолекулярной ДНК из клеток C-I
3) Получение s РНК из препаратов
4) Получение и очистка кДНК RLV . .44 . . и
5) Аиплификация фагов
6) Конструирование библиотеки генов
7) Скрининг библиотеки генов
8) Реклонирование в плазиидные векторы
9) Анализ ДНК методом электрофореза в геле блоттинг-гибридизации по Саузерну
10) Ввделение ЕсоЖ рестриктазы
11) Ник-трансляция
12) Ввделение плазмидной ДНК
13) Элюция ДНК из агарозного геля
14) Ввделение ДНК из фагов по Блатнеру
15) •'Дот"-гибридизация фаговых клонов
16) Радиоиммунопреципитационный анализ белков
17) Определение нуклеотидной последовательности ДНК
1у РЕЗУЛЬТАТЫ. I ) Получение на фаге Харон 4А библиотеки генов эритролейкозных клеток мышей линии AKSi, з а ражённых RL
2) Скрининг библиотеки
3) Рестрикционный анализ полученных клонов
4) Анализ плазмидных клонов, содержащих провирусные последовательности
5) Получение вектора-экспресси эукариот на основе провируса из плазмиды 147.2 -
6) Характеристика нровируса экзогенного происхоадения на основ из генома клеток C-I
7) Создание вектора экспрессии на основе провируса из клона
8 ) Определение нуклеотвдной последовательности ДНК из клона 4 3 7 V ОБСУЖДЕНИЕ
1) Характеристика клонов, содержащий провирусн MuLV
2) Вектор экспрессии эукариот на основе эндогенного провируса из клона
3) Характеристика провируса экзогенного происхозздения. ,
4) Прошторные функции LTR провируса из клона
3) Вектор экспрессии на основе провируса из клона
6) Нуклеотидная последовательность фрагмента ДНК из з'части генома провируса клона 107.4 III-112
VI. ВЫВОДЫ. 113
VII. СПИСОК ЛИТЕРАТИРЫ