Метакрилатредуктаза Geobacter sulferreducens АМ-1: Роль и свойства Микулинская, Оксана Викторовна

brief description

Микулинская,ОксанаВикторовна.МетакрилатредуктазаGeobactersulferreducensАМ-1:Рольисвойства: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Пущино, 1999. - 117 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ БИОХИМИИ И ФИЗИОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ И М Е Н И Т.К. СКРЯБИНА На правах рукописиМИКУЛИНСКАЯОКСАНАВИКТОРОВНАМЕТАКРИЛАТРЕДУКТАЗАGEOBACTERSULFURREDUCENS АМ-1:РОЛЬИСВОЙСТВА03.00.04-Биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный

стр. 41
бензилвиологена, 10 мМ метакрилата и 0.05-0.1 мг белка бесклеточного экстракта или очищеннуюметакрилатредуктазув указанных количествах. При определении активности очищеннойметакрилатредуктазыи контроля активностиметакрилатредуктазына всех стадиях очистки в реакционной смеси присутствовал 21 мкг очищенного из

стр. 77
восстановленного дитионитом после реокисления метакрилатом 78 Таблица 7. Молекулярныесвойстваметакрилатредуктазыи цитохрома с изGeobactersulfurreducens АМ-1.СвойстваМетакрилатредуктазаЦитохром с Молекулярная масса Содержание F A D Концентрация Fe Содержание тема Аминокислотная последовательность N

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Микулинская, Оксана Викторовна
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. НЕНАСЫЩЕННЫЕ ОРГАНИЧЕСКИЕ КИСЛОТЫ -
ТЕРМИНАЛЬНЫЕ АКЦЕПТОРЫ ЭЛЕКТРОН-ТРАНСПОРТНЫХ
ЦЕПЕЙ АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ
1.1 Фумарат - наиболее изученный акцептор электронов
1.1.1 Организация электрон-транспортных цепей, терминальным акцептором которых является фумарат
1.1.2 Синтез АТР в ходе "фумаратного дыхания"
1.1.3 Транспорт фумарата в клетку
1.2 Ключевой фермент "фумаратного дыхания" - фумаратредуктаза
1.2.1 Фумаратредуктаза бактерии Wolinella succinogenes
1.2.2 Фумаратредуктаза бактерии Escherichia coli
1.2.3 Фумаратредуктаза Shewanellaputrefaciens
1.3 Насыщение двойной связи в боковой цепи фенилпропеноата бактерией Acetobacterium woodii 21 Глава 2. ОКИСЛЕНИЕ АЦЕТАТА АНАЭРОБНЫМИ
ХЕМОТРОФНЫМИ БАКТЕРИЯМИ
2.1 Способы активирования ацетата для вовлечения
его в метаболизм анаэробных бактерий
2.2 Окисление ацетата через цикл трикарбоновых кислот
2.2.1 Ферменты и особенности ЦТК
2.2.2 Транспорт восстановительных эквивалентов от ЦТК
к терминальным акцепторам электронов
2.2.3 Анаплеротические реакции ЦТК
2.3 Окисление ацетата через СО-дегидрогеназный путь
2.3.1 СО-дегидрогеназный путь
2.3.2 Перенос восстановительных эквивалентов
от СО-дегидрогеназного пути к терминальным акцепторам
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ 3
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 3. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Работа с чистой культурой СеоЬаЫег яМ/иггейисет АМ-1
3.1.1 Культивирование бактерии 3
3.1.2 Контроль чистоты культуры
3.1.3 Определение параметров роста штамма АМ-1
3.2 Определение ферментативных активностей
3.2.1 Измерение активности метакрилатредуктазы
3.2.2 Определение активностей ключевых ферментов СО-дегидрогеназного пути окисления ацетата
3.2.3 Измерение активностей ферментов ЦТК
3.2.4 Определение активностей ферментов, участвующих в переносе восстановительных эквивалентов от ЦТК
к метакрилату
3.3 Препаративные процедуры
3.3.1 Подготовка суспензии клеток 4
3.3.2 Получение грубого экстракта
3.3.3 Получение фракции периплазматических белков
3.3.4 Фракционирование сульфатом аммония
3.3.5 Хроматография на гидроксиапатите
3.4 Аналитические процедуры
3.4.1 Определение концентрации и типа флавина.
Разрушение флавинов
3.4.2 Определение содержания цитохромов с в различных препаратах и количества гемов цитохрома с (30 кДа)
3.4.3 Определение количества Бе
3.4.4 Экстракция и определение типа хинонов
3.4.5 Электрофорез в денатурирующих условиях
3.4.6 Обнаружение цитохрома с в полиакриламидных гелях
после ОЗ-Иа-электорофореза
3.4.7 Определение аминокислотной последовательности К-конца
3.4.8 Определение количества белка 5