Моноклональные антитела к антигенам Bac. anthracis: получение и применение Романов, Михаил Геннадьевич

brief description

Романов, Михаил Геннадьевич.
Моноклональные антитела к антигенам Bac. anthracis: получение и применение : диссертация ... кандидата биологических наук : 16.00.03. - Москва, 2005. - 104 с.
ОГЛАВЛЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИкандидат биологических наук Романов, Михаил Геннадьевич
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1Л Морфология Bacillus anthracis.
1.2 Секретируемые факторы вирулентности Вас.anthracis.
1.3 Сибирская язва и её диагностика.
1.4. Иммунитет и иммунизация.
1.5. Производство моноклональных антител и их практическое применение.
1.5.1. Применение моноклональных антител.
1.5.2. Диагностика бактериальных инфекций.
1.5.3. Перспективы терапевтического применения.
1.5.4. Принципы получения моноклональных антител.
1.6. Применение МкАт для изучения сибирской язвы и её обнаружение в объектах исследования.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Лабораторные животные.
2.2. Антигены.
2.3. Штаммы.
2.4. Сыворотки, антитела.
2.5. Антисыворотки.
2.6. Иммунизация.
2.7. Приготовление ультразвуковых дезинтегратов микробных клеток.
2.8. Синтез конъюгатов антител с пероксидазой хрена.
2.9. Миеломные клетки.
2.10. Культуральные среды.
2.11. Посуда.
2.12. Подготовка миеломных клеток к слиянию.
2.13. Приготовление слоя фидерных (подкормочных) клеток.
2.14. Получение иммунных спленоцитов.
2.15. Раствор полиэтиленгликоля. i 2.16. Гибридизация клеток.
2.17. Отбор гибридных культур-продуцентов специфических антител (первичное тестирование).
2.18. Клонирование гибридных клеток.
2.19. Заморозка и разморозка гибридных и миеломных клеток.
2.20.Культивирование гибридных клеток in vivo.
2.21. Очистка моноклональных антител.
2.22. Использование штаммов гибридных культивируемых клеток для получения моноклональных антител. ф 2.23. Исследование специфичности иммунохимических свойств МкАт.
2.23.1. Твердофазный иммуноферментный анализ.
2.23.2. Иммуноблоттинг.
2.23.3. Определение изотипа МкАт.
2. 24. Определение концентрации белка.
2. 25. Статистическая обработка результатов. ф
ГЛАВА 3. ПОЛУЧЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К АНТИГЕНАМ Вас. anthracis, ИХ ВЫДЕЛЕНИЕ И ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА.
3.1. Иммунизация.
3.2. Подбор условий постановки твердофазного иммунофермент-ного анализа (ИФА).
3.3. Гибридизация.
3.3.1. Подготовка клеток к слиянию, гибридизация.
3.3.2. Получение первичных культур гибридных клеток.
3.3.3. Получение гибридом при использовании спленоцитов мышей, щ иммунизированных дезинтегратом спор вакцинного сибиреязвенного штамма 55 - ВНИИВВиМ.
3.3.4. Получение гибридом при использовании спленоцитов мышей, иммунизированных дезинтегратом вегетативных клеток (суточной культурой) вакцинного сибиреязвенного штамма 55 - ВНИИВВиМ.
3.3.5. Получение гибридом при использовании спленоцитов мышей, иммунизированных очищенным протективным антигеном Вас. anthracis
3.4. Изучение свойств моноклональных антител.
3.4.1. Изучение видовой специфичности моноклональных антител.
3.4.2. Культивирование гибридом-продуцентов, продуцирующих антитела in vivo.
3.4.3. Определение изотипа моноклональных антител.
3.4.4. Иммунохимический анализ.
ГЛАВА 4. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ МКАТ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПА Вас. anthracis.
4.1. Приготовление конъюгатов на основе моноклональных антител.
4.2. Подбор пары МкАт для сэндвич-ИФА.
4.3. Сравнение различных вариантов ИФА для количественного определения ПА с использованием полученных МкАт.
ГЛАВА 5. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МКАТ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ И ПЕРСПЕКТИВЫ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ЛАБОРАТОРНОГО АНАЛИЗА СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ.
5.1. Использование МкАт для идентификации Вас. anthracis.
5.2. Оценка возможной пригодности полученных МкАт для характеристики живых споровых вакцинных штаммов и для стандартизации бесклеточных вакцинных препаратов.
5.3. Перспективы использования МкАт для определения уровня защищенности животных от заражения сибирской язвой, привитых различными вакцинными штаммами.