Процессинг предшественника пептидного гормона томата системина фитаспазой Белошистов, Роман Евгеньевич

brief description

Белошистов,РоманЕвгеньевич.Процессингпредшественникапептидногогормонатоматасистеминафитаспазой: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.03 /БелошистовРоманЕвгеньевич; [Место защиты: Моск. гос. ун-т им. М.В. Ломоносова]. - Москва, 2017. - 121 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
правах рукописи БЕЛОШИСТОВРОМАНЕВГЕНЬЕВИЧПРОЦЕССИНГПРЕДШЕСТВЕННИКАПЕПТИДНОГОГОРМОНАТОМАТАСИСТЕМИНАФИТАСПАЗОЙ03.01.03 Молекулярная биология Диссертация

стр. 81
как исистемин, ведь, строго говоря, это никогда не проверялось. Либо L-системин это неактивное промежуточное соединение, подвергающееся дополнительномупроцессингус образованиемсистемина. Мы решили сравнить биологические активностисистеминаи L-системина, а именно их способность индуцировать защитный

стр. 87
просистемина можно объяснить как изменением последовательностисистемина, так и нарушениемпроцессинга. Для изучения этого вопроса были синтезированы пептиды - мутантысистемина:системин-A18 исистемин-E18, содержащие замены D18 на аланин и глутаминовую кислоту, соответственно (Рисунок 22). Для сравнения

Оглавление диссертациикандидат наук Белошистов, Роман Евгеньевич
Оглавление
1. Список используемых сокращений
2. Введение
3. Защита растений от травоядных насекомых (обзор литературы)
Прямая защита
Морфологические структуры
Трихомы
Вторичные метаболиты
Растительные фенольные соединения
Флавоноиды
Танины
Защитные белки растений
Растительные лектины
Ингибиторы протеаз
Ферменты
Пероксидазы
Полифенолоксидазы
Липоксигеназы
Непрямая защита
Защитные летучие вещества растений
Защитные элиситоры
Роль непептидных фитогормонов в индуцированной устойчивости растений
Жасмоновая кислота
Салициловая кислота
Этилен
Роль ионов кальция в защите растений
Роль активных форм кислорода в защите растений
Участие пептидных гормонов в защитном ответе растений
Системин
Фитаспаза
4. Материалы и методы
Получение кДНК просистемина томата и ее экспрессия в клетках E. coli
Выделение суммарной РНК томата
Получение суммарной кДНК томата
ПЦР на суммарной кДНК томата с праймерами для кДНК просистемина
Клонирование кДНК просистемина в плазмиду pUC19
Клонирование кДНК просистемина для удаления терминирующего триплета
Клонирование кДНК просистемина в экспрессионный вектор pET33b(+)
Получение кДНК укороченного просистемина PS15
пЦр на плазмиде pET33b(+)-PS
Клонирование кДНК укороченного просистемина в вектор pET33b(+)
Получение мутанта D18A просистемина-15
Мегапраймерная ПЦР на плазмиде pUC19-PS2
Клонирование продукта мегапраймерной ПЦР в плазмиду pUC 19
Клонирование кДНК PS15D18A в вектор pET33b(+)
Получение кДНК мутанта D-2A просистемина-15
Мегапраймерная ПЦР на плазмиде pUC19-PS2
Клонирование продукта мегапраймерной ПЦР в плазмиду pUC19
Клонирование кДНК PS15D-2A в плазмиду pET33b(+)
Получение кДНК двойного мутанта просистемина-15
Клонирование фрагментов одиночных мутантов в вектор pET33b(+)
Получение кДНК полноразмерного просистемина с заменой метионина 15 на
аланин (PS M15A)
Мегапраймерная полимеразная цепная реакция на плазмиде pUC19-PS2
Клонирование продукта мегапраймерной ПЦР в плазмиду pUC19
Клонирование кДНК PSМ15A в плазмиду pET33b(+)
Выделение и очистка рекомбинантных белков
Гидролиз просистемина и его мутантов фитаспазой
Масс-спектрометрический анализ продуктов гидролиза просистемина
фитаспазой
Анализ экспрессии гена PI-II в растениях томата
Обработка растений томата
Анализ трансгенных растений томата
Выделение РНК из листьев томата
Получение кДНК для количественной ПЦР
Количественная ПЦР
Клеточные культуры и анализ изменения pH культуральной среды
Анализ субстратной специфичности фитаспаз с использованием пептидных
флуорогенных субстратов
Гидролиз ДНК рестриктазами
Превращение 5'-выступающих «липких» концов ДНК в «тупые»
Превращение 3'-выступающих «липких» концов ДНК в «тупые»
Лигирование ДНК по «тупым» и «липким» концам
Трансформация клеток E. coli
Выделение плазмид
Электрофорез ДНК в агарозном геле
Элюция фрагментов ДНК из агарозного геля
Электрофорез белков в ПААГ
Составы буферов и сред, использованных в работе
Буферы
Среды
5. Результаты и обсуждения
Получение кДНК просистемина томата и её экспрессия в клетках E. coli
Фрагментация просистемина фитаспазой
Получение индивидуального укороченного просистемина (PS15) и его гидролиз
фитаспазой
Получение мутантов просистемина по сайтам гидролиза фитаспазой
Гидролиз мутантов просистемина фитаспазой
Получение полноразмерного просистемина и его гидролиз фитаспазой
Анализ продуктов гидролиза просистемина фитаспазой методом масс-
спектрометрии
Биологическая активность L-системина
Функциональная значимость процессинга просистемина
Сколько фитаспаз у томата и какие из них способны процессировать
просистемин?
Гидролиз просистемина фитаспазой перца
Модель участия фитаспазы в защитном ответе томата
6. Заключение
7. Выводы
8. Список литературы