Разработка эффективной системы генетической трансформации льна-долгунца (Linum usitatissimum L. ) и дикорастущих видов рода Linum Каляева, Марина Александровна

brief description

Каляева,МаринаАлександровна.Разработкаэффективнойсистемыгенетическойтрансформациильна-долгунца(LinumusitatissimumL. )идикорастущихвидовродаLinum: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.12. - Пущино, 2001. - 145 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ФИЛИАЛ ИНСТИТУТА БИООРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ ИМ. АКАДЕМИКОВ М.М. ШЕМЯКИНА И Ю. А. ОВЧИННИКОВА На правах рукописиКАЛЯЕВАМАРИНААЛЕКСАНДРОВНАРАЗРАБОТКАЭФФЕКТИВНОЙСИСТЕМЫГЕНЕТИЧЕСКОЙТРАНСФОРМАЦИИЛЬНА-ДОЛГУНЦА{ЫпитusitatissimumL.) ИДИКОРАСТУЩИХВИДОВРОДАLINUM03.00.12 - Физиология

стр. 9
о культивированиидикорастущихвидовльнав культуре in vitro единичны (Zhan et al., 1989). Работы по агробактериальнойтрансформациидикорастущихвидовльна, в том числе декоративных, отсутствуют.Разработкаэффективныхсистемрегенерации и агробактериальнойтрансформациильнакрупноцветкового (Linumgrandiflorum Desf.) ильнамноголетнего (Linumperenne Ь.) служит основой для изз^ения...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Каляева, Марина Александровна
Список сокращений
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Генетическая трансформация растений
1.2. Краткая характеристика природных векторных систем
1.2.1. «Генетическая колонизация»
1.2.2. Структурно-функциональная организация Тьплазмид
1.2.3. Ш-плазмиды А^оЪааепит rhizogenes
1.2.4. Векторы на основе вирусов растений
1.2.5. Применение природных векторных систем в генетической инженерии растений
1.3. Методы трансформации растений Тл (Ш)-плазмидами
1.3.1. Методы инокуляции
1.3.2. Методы кокультивирования
1.4. Методы прямого переноса ДНК в растения 21 —1.4.1. Химические стимуляторы
1.4.2. Электропорирование
1.4.3. Микроинъекции ДНК
1.4.4. Инъекции ДНК в молодые цветоносные побеги
1.4.5. Инкубация пыльцы в растворах ДНК
1.4.6. Введение ДНК в прорастающие пыльцевые трубки
1.4.7. Перенос ДНК посредством липосом
1.4.8. Электрофорез
1.4.9. Баллистический метод
1.4.10. Поглощение ДНК семенами
1.5. Анализ методов генетической трансформации растений
1.6. Анализ экспрессии чужеродных генов в трансгенных растениях
1.7. Проблемы и задачи генетической трансформации сельскохозяйственных растений
1.8. Регенерация и агробактериальная трансформация льна культурного
Linum usitatissimum L.)
1.8.1. Биология объекта
1.8.2. Культура in vitro льна обыкновенного (Linum usitatissimum L.). Регенерация растений из соматических тканей
1.8.3. Агробактериальная трансформация льна культурного
1.8.4. Регенерация и агробактериальная трансформация растений льна-долгунца
1.9. Дикорастущие виды рода Linum в кульуре in vitro • 44 1.9.1. Регенерация и агробактериальная трансформация льна крупноцветкового
Linum grandiflorum Desf.) и льна многолетнего {Linum perenne L.) 45 JTJIABA 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
МАТЕРИАЛЫ
2.1. Оборудование
2.2. Реактивы и ферменты
2.3. Объекты исследования
2.4. Среды
2.4.1. Микробиологические среды
2.4.2. Среды для культивирования растений
2.5. Другие растворы
2.6. Бактериальные штаммы и плазмиды
МЕТОДЫ
2.7. Регенерация побегов льна-долгунца из сегментов гипокотилей
2.8. Регенерация побегов льна крупноцветкового и многолетнего из эксплантов различного типа
2.9. Адаптация растений льна-долгунца, многолетнего и крупноцветкового к условиям in vivo
2.10. Колонизация растений льна-долгунца, многлетнего и крупноцветкового метилобактериями Methylovorus mays
2.10.1 Колонизация семян
2.10.2. Колонизация эксплантов
2.11. Индуцирование процессинга агробактериальной Т-ДНК экссудатами растений
2.11.1. Инкубация Agrobacterium tumefaciens с экссудатами тканей растений
2.11.2. Выделение тотальной ДНК Agrobacterium tumefaciens
2.11.3. Трансформация клеток Escherichia coli
2.11.4. Быстрое выделение небольшого количества плазмидной ДНК методом щелочного лизиса
2.12. Выделение суммарной растительной ДНК
2.13. Анализ геномной ДНК трансгенных растений методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)
2.14. Агробактериальная трансформация льна-долгунца
2.15. Получение фосфинотрицинустойчивых растений льна-долгунца
2.16. Агробактериальная трансформация льна крупноцветкового и льна многолетнего
2.17. Определение активности NPTII
2.18. Выявление GUS-активности в трансгенных клетках
2.18.1. Флюориметрическое определение активности GUS
2.18.2. Гистохимическое выявление GUS-активности в гипокотилях льна
2.19. Статистическая обработка результатов исследований
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Особенности регенерации льна-долгунца (.Linum usitatissimum L.)
3.1.1. Возраст экспланта
3.1.2. Величина экспланта
3.1.3. Фитогормоны в питательной среде
3.1.4. Место инициации •
3.1.5. Генотип
3.2. Регенерация льна многолетнего (Linum perenne L.) и льна крупно цветкового
Linum grandiflorum Desf.)
3.2.1. Возраст сегментов гипокотилей
3.2.2. Состав питательной среды
3.3. Сравнительная характеристика регенерации различных видов рода Linum
3.4. Стимуляция роста и морфогенеза растений льна in vitro ассоциативными метилобактериями Methylovorus mays
3.4.1. Колонизация семян
3.4.2. Влияние метилобактерий на эффективность регенерации эксплантов
3.5. Индукция процессинга Т-ДНК экссудатами растений льна
3.6. Трансформация растений льна-долгунца
3.7. Получение трансгенных растений льна-долгунца, устойчивых к гербициду фосфинотрицину
3.8. Агробактериальная трансформация льна крупноцветкового и льна многолетнего
3.8.1. Изучение действия антибиотиков на регенерацию растений при подборе селективной среды
3.8.2. Анализ способов трансформации эксплантов • 114 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 121 ВЫВОДЫ 123 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ