Разработка рекомбинантных вакцин-кандидатов против весенней виремии карпа и исследование их иммуногенных и протективных свойств Воронова, Ольга Сергеевна

brief description

Воронова,ОльгаСергеевна.Разработкарекомбинантныхвакцин-кандидатовпротиввесеннейвиремиикарпаиисследованиеихиммуногенныхипротективныхсвойств: диссертация ...кандидатабиологических наук : 03.00.03. - Кольцово, 2005. - 129 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
Министерство здравоохранения и социального развития РФ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ВИРУСОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ «ВЕКТОР» На правах рукописиВороноваОльгаСергеевнаРАЗРАБОТКАРЕКОМБИНАНТНЫХВАКЦИН-КАНДИДАТОВПРОТИВВЕСЕННЕЙВИРЕМИИКАРПАИИССЛЕДОВАНИЕИХ ИММУНОГЕННБ1Х ИПРОТЕКТИВНЫХСВОЙСТВ03.00.03 - молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степеникандидатабиологических...

стр. 4
кандидатная ДНК-вакцина3.2.3. Нродукциярекомбинантноговирусного гликопротеина в культуре клеток 3.2.4. Защитныесвойствавакцин-кандидатов, кодирующих гликопротеин референсного для России изолята вирусавесеннейвиремиикарпа3.3. Генно-инженерные плазмидные ДНК - кандидатныевакцины, кодирующие нуклеопротеин россйского изолята вирусавесеннейвиремиикарпа3.4. Влияние повыщенной температуры воды и ридостина...

стр. 6
важных вирусных патогенов рыб. Наил5^шие результаты были нолучены с ДНК *вакцинамипротивзаболеваний лососевых рыб, вызываемых рабдовирусами. Цель настоящей работы -разработкаи создание экспериментальных плазмидных конструкций - кандидатныхрекомбинантныхвакцинпротиввесеннейвиремиикарпа, иисследованиеихиммуногенныхипротективныхсвойств. в соответствии поставленной целью решались следующие...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Воронова, Ольга Сергеевна
Список принятых сокращений
Введение
Научная новизна и практическая ценность работы
Публикации и апробация работы
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
I.Весенняя виремия карпа
1. Историческая справка
2. Предрасполагающие факторы, группы риска
3. Клиническая картина
4. Возбудитель заболевания - вирус весенней виремии карпа
4.1. Структура вируса
4.2. Гликопротеин (G-белок) рабдовирусов
5. Существующие подходы к профилактике и лечению ВВК
II. Вакцинология в аквакультуре
1. Традиционные инактивированные и атгенуированные вакцины для рыб
2. Рекомбинантные технологии в аквакультуре
2.1. Субъединичные вакцины для рыб
2.2. ДНК-вакцины 25 2.2.1 .Опыт применения ДНК-вакцин для рыб
2.2.2. Возможные системы доставки вакцины в организм рыбы
2.2.3. Исследование тканевого распределения плазмидной ДНК и продолжительности экспрессии рекомбинантног гена в организме рыб
2.2.4. Изучение механизмов представления АГ клеткам ИС после введения ДНК-вакцин
2.2.5. Иммунный ответ
• Гуморальный ИО рыб в ответ на ДНК-вакцинацию
• Т-клеточный ИО у рыб на ДНК-вакцины
• Стимуляция врожденного ИО после введения ДНК-вакцин
2.2.6. Исследование безопасности ДНК-вакцин 43 Заключение
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1.Реактивы
2.2.Ферменты 47 2.3.0лигонулеотиды
2.4.Плазмиды
2.5. Бактерии
2.6. Культуральные среды
2.7. Вирусы и клетки 48 2.9. Растворы 49 2.9. Методы
2.9.1. Выделение вирусной РНК
2.9.2. Синтез ДНК, комплементарной вирусной РНК
2.9.3. Амплификация фрагментов ДНК
2.9.4. Элюция фрагментов ДНК
2.9.5. Коструирование рекомбинантных ДНК
2.9.6. Трансформация клеток Е. Coli плазмидной ДНК
2.9.7. Выделение плазмидной ДЕК
2.9.8. Ферментативный гидролиз ДНК
2.9.9. Электрофоретическое фракционирование ДНК
2.9.10.Анализ первичной структуры ДНК 53 2.9.11.Электрофоретический анализ белка
2.9.12.Получение иммунной сыворотки
2.9.13.Иммуноферментный анализ
2.9.14.Иммуноблотинг белков с иммунными сыворотками
2.9.15.Приготовление препарата субъединичной вакцины для иммунизации 55 2.9.16.Оценка протективности экспериментальных вакцин 56 2.9.17.Оценка иммуногенности экспериментальных вакцин
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 58 3.1 .Генно-инженерные плазмидные ДНК - кандидатные вакцины, кодирующие гликопротеин вируса весенней виремии карпа американского изолята
3.1.1. Рекомбинантная конструкция pcDNA-G-a
3.1.2. Конструирование рекомбинантной плазмидной ДНК pQE-G для экспрессии гена гликопротеина вируса в E.coli - субъединичная вакцина
3.1.3. Исследование продукции рекомбинантного вирусного гликопротеина в клетках Е. coli
3.1.4. Иммуногенность экспериментальных вакцин
3.1.5. Защитные свойства экспериментальных вакцин
3.1.5.1. Эффективность экспериментальной ДНК-вакцины
3.1.5.2. Эффективность субъединичной вакцины
3.1.6. Влияние изменения дозы вводимой плазмидной конструкции и неспецифических иммуностимуляторов на эффективность ДНК-вакцинации
3.2.Генно-инженерные плазмидные ДНК - кандидатные вакцины, кодирующие гликопротеин референсного для России изолята вируса весенней виремии карпа
3.2.1. Конструирование рекомбинантной плазмидной ДНК pcDNA-G-3JI4 - кандидатной ДНК-вакцины
3.2.2. Конструирование рекомбинантной плазмидной ДНК pBACarpVax-G-3JI4 - кандидатная ДНК-вакцина
3.2.3. Продукция рекомбинантного вирусного гликопротеина в культуре клеток
3.2.4. Защитные свойства вакцин-кандидатов, кодирующих гликопротеин референсного для России изолята вируса весенней виремии карпа
3.3. Генно-инженерные плазмидные ДНК - кандидатные вакцины, кодирующие нуклеопротеин россйского изолята вируса весенней виремии карпа
3.4. Влияние повышенной температуры воды и ридостина на эффективность ДНК-вакцинации