Рибосомная супрессия и функционирование аппарата белкового синтеза у эукариот Сургучев, Андрей Павлович

brief description

Сургучев,АндрейПавлович.Рибосомнаясупрессияифункционированиеаппаратабелковогосинтезауэукариот: диссертация ... доктора биологических наук : 03.00.03. - Москва, 1984. - 293 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
НI S6-3/9'0 '^ АКАДЕГЖЯ ГЛЕДИЦИНСКИХ НАУК СССР ВСЕСОЮЗНЫЙ КАРДИОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР На правах рукописи СУРГЗ^ЧЕВАНДРЕЙПАВЛОВИЧ1Ш 537.363; 543.865;575.2РИБОСОМНАЯСУПРЕССИЯИФУНКЦИОНИРОВАНИЕАППАРАТАЕЕЖОВОГОСИНТЕЗАУЭУКАРИОТДиссертация на соискание учёной степени доктора биологических наук

стр. 3
тер1;1инация ... 19 Строение ифункционированиерибосом уэукариотКоординациясинтезарибосомныхбелкови рРНК .30 Генетический код ... 33 Точностьбелковогосинтеза...39 а).уровень ошибок в реакщш шяиноацилирования.41 б).точность рибосо^шого этапабелковогосинтеза...45 в).изучение неоднозначности ...51

стр. 6
структуры и регуляции активности генов, контролирующих коьлпонентыаппаратабелковогосинтеза, число которых только в ядерном геноме приближается к двумстагл. Выяснение структур­ ной организацииаппаратабелковогосинтеза, а тш-оке меха­ низмов егофункционированияи генетического контроля пред­ ставляется одной

Оглавление диссертациидоктор биологических наук Сургучев, Андрей Павлович
I. Введение
II. Обзор литературы .10 Механизм биосинтеза белка а).общая характеристика б).инициация . II в).элонгация г).терминация
Строение и функционирование рибосом у эукариот
• • • S
Координация синтеза рибосомных белков и рРНК .30 Генетический код
Точность белкового синтеза а).уровень ошибок в реакции аминоацилирования. б).точность рибосомного этапа белкового синтеза в).изучение неоднозначности .51 -переосмысление значащих кодонов . 53 -распознавание нонсенс кодонов как смысловых ошибки фазы трансляции
Генетические подходы к изучению трансляции. а).определение супрессии б).супрессия за счёт тРНК у прокариот в).супрессия нонсенс-кодонов за счёт тРНК у эукариот г).рибосомные мутанты прокариот с изменённой точностью трансляции д).рибосомные супрессоры у эукариот е).обнаружение и свойства рецессивных супрес-соров у дрожжей ж).модификаторы супрессоров з).взаимодействие доминантных и рецессивных супрессоров и). другие типы рибосомных мутантов у эукариот
Организация и экспрессия митохондриального генома
Дрожжи как объект исследования методами генной инженерии
III. Материалы и методы .114 Выращивание клеток дрожжей на твёрдой среде.115 Выращивание клеток дрожжей на жидкой среде
Разрушение клеток . 116 Выделение полисом и рибосом . 116 Определение скорости включения меченых аминокислот в интактных клетках
Определение скорости включения меченых предшественников в РНК в интактных клетках
Определение кинетики распада полисом
Сравнение количества связанной с 80 S рибосомами пептидил-тРНК по образованию пептидил-пуромицина
Количественная оценка связанной с рибосомами пептидил-тРНК
Определение акцепторной специфичности связанной с рибосомами пептидил-тРНК
Определение размеров новосинтезированного пептида, связанного с рибосомами в виде пептидил-тРНК
Определение способности к диссоциации на субчастицы рибосом, связанных с пептидил-тРНК
Определение поли- U-зависимого включения "^С-фенилаланина в s -30 экстракте
Определение поли- U-зависимого включения "^С-фенилаланина в бесклеточной системе, реконструированной из рибосомных субчастиц
Изучение влияния пуромицина на поли-и-зависимое включение фенилаланина.
Определение кинетических констант в реакции деа-т ; цилирования метионил-тРНК^ет
Изучение эффекта паромомицина на супрессию нонсенс-мутаций
Изучение синтеза белка и сборки рибосомных субчастиц у холодочувствительных штаммов
Изучение зависимых от даклогексимида штаммов
Изучение механизма дыхательной недостаточности
Клонирование гена supl
-трансформация клеток дрожжей
-выделение ДНК из трансформированных клеток .135 -трансформация клеток E.coli
-выделение плазмидной ДЕК для электрофорети-ческого анализа "
-электрофорез плазмидной ДНК в геле агарозы .137 -амплификация плазмиды
-субклонирование гена SUP
-выделение поли-А+РНК
-иммобилизация плазмидной ДНК и РНК-ДНК-гибридизация .139 -трансляция мРНК в бесклеточной системе из ре-тшсулоцитов кролика и проростков пшеницы ,.
1У. Результаты и их обсуждение
I. Использование плейотропных проявлений супрессорных мутаций для изучения механизма супрессии.
2.Изучение супрессорных мутантов, чувствительных к повышенной температуре
Влияние рецессивных супрессоров на синтез белка и РНК
Влияние непермиссивной температуры на состояние полисом в клетках супрессорных штаммов
Сравнение количества пептидил-тРНК, связанной с
80 S рибосомами, с помощью ^Н-пуромицина
Количественная оценка связанной пептидил-тРНК
Определение акцепторной специфичности тРНК, входящей в состав связанной с рибосомами пептидил-тРНК.
Определение длины связанного с тРНК пептида
Функциональные свойства рибосом, накапливающихся в непермиссивных условиях
3. Определение кодоновой специфичности рецессивных супрессоров
4. Определение уровня ошибок на рибосомном этапе трансляции
5. Кодоновая специфичность супрессорных мутаций в присутствии паромомицина
6. Роль реакции ферментативного деацилирования в определении точности трансляции ,.
7. Изучение рецессивных супрессорных мутантов дрожжей, чувствительных к пониженной температуре
8. Зависимые от циклогексимида супрессорные мутанты а).влияние щклогексимида на рост клеток б).изучение рибосом методам кругового дихроизма в).связывание ^Н циклогексимида с рибосомами условно-зависимого мутанта .,
9. Дыхательная недостаточность супрессорных штаммов
10.Клонирование гена supl а).принцип метода б).проведение опытов по клонированию в).локализация гена supl в клонированном фрагменте г).обнаружение гена supl в банке генов на основе плазмиды pYSl д). идентификация продукта гена supl .,