Свойства новых сайт-специфических эндонуклеаз Bme 2161 из Bacillus megaterium 216, BbvII из Bacillus brevis 80 и RshII из Rhodopseudomonas sphaeroides 2.4.1 Пачкунов, Дмитрий Михайлович

brief description

Пачкунов,ДмитрийМихайлович.Свойствановыхсайт-специфическихэндонуклеазBme2161изBacillusmegaterium216,BbvIIизBacillusbrevis80иRshIIизRhodopseudomonassphaeroides2.4.1: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Оболенск, 1984. - 127 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 2
рестрикции-модификации III типа 2.5.Сайт-специфическиеэндонуклеазыII типа 2.5.1.Свойствасайт-специфическихэндонуклеаз^^ . . . 13 13 15 16 II типа 2.5.2. Очисткасайт-специфичесшкэндонуклеазII типа 2.6.Сайт-специфическиеметилазы 3 . ЭКСПЕРШШЖАШШ! ЧАСТЬ IV 23 30 33 34 34 35 35 35 36 35 2.5.3. Тестированиесайт-специфических

стр. 5
Определение природы метилировшшого основа­ ния ДНК метилазой Bbvi 4.6. Получение исвойствасайт-специфическойэндонуетеазыRshii4.6.1. Получение препаратасайт-специфическойэндонуклеазыRshii4.6.2. Определение участка узнаванхш ДНК эндонуЕслеазой Rshll 5. ОБСЛЩЕННЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 5.1. Выделение исвойствасайт-специфическихэндонуклеа­ зыи ДНК-метилазы Вте21615.2. Выделение,свойстваи...

стр. 8
лированного нуклеотида в составе узнаваемой последовательности нуклеотидов; 3) выделениеновойсайт-специфическойэьщонущгеазыBbviiизBacillusbrevis80, определение участка узнавания ею по­ следовательности нутшеотидоБ и точек разрыва Д Ж , определение не­ которых физико-химическихсвойствсайт-специфическойэндонуклеазыBbvii; 4) выделениесайт-специфическихметилаз Bbvi иBbviiиз...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Пачкунов, Дмитрий Михайлович
1. ВВЕДЕНИЕ.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Введение.
2.2. Классификация ферментов рестрикции-модификации
2.3. Ферменты рестрикции-модификации I типа.
2.4. Ферменты рестрикции-модификации III типа.
2.5. Сайт-специфические эндонуклеазы II типа.
2.5.1. Свойства сайт-специфических эндонуклеаз
II типа.
2.5.2. Очистка сайт-специфических эндонуклеаз
II типа.
2.5.3. Тестирование сайт-специфических эндонуклеаз.
2.6. Сайт-специфические метилазы.
3. ЭКСПЕРШЖНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
3.1. Материалы.
3.2. Методы.
3.2.1. Получение биомассы
3.2.2. Получение ДНК плазмиды pBR
3.2.2.1. Очистка ДНК на оксиапатите
3.2.2.2. Очистка ДНК в градиенте хлористого цезия.
3.2.2.3. Очистка ДНК от примесей РНК.
3.2.3. Электрофорез
3.2.4. Электрофорез при определении точек разрыва
ДНК сайт-специфическигж эндонуклеазами
3.2.5. Определение ферментативной активности выделенных сайт-специфических эндонуклеаз
3.2.6. Определение активности метилаз.
3.2.7. Очистка сайт-специфической эндонуклеазы
Вше 2161.
3.2.8. Очистка сайт-специфической метилазы
Вше 2161.
3.2.9. Определение основания ДНК, метилируемого метилазой Вше 2161.
3.2.10. Очистка сайт-специфической эндонуклеазы
Bbvll.
3.2.11. Очистка метилазы Bbvi
3.2.12. Очистка метилазы Bbvll
3.2.13. Определение оснований, метилируемых в ДНК метилазами Bbvi и Bbvll
3.2.14. Определение молекулярных масс эндонуклеаз Вше 216i и Bbvll при помощи гель-фильтрации
3.2.15. Определение молекулярных масс эндонуклеаз
Bme 2161 и Bbvll в денатурирующих условиях.
3.2.16. Определение точки разрыва ДНК сайт-специфической эндонуклеазой Bbvll
3.2.16.1. Получение линейной формы ДНК pBR-322.
3.2.16.2. Введение радиоактивной метки в
З'-ОН концы ДНК.
3.2.16.3. Введение радиоактивной метки в
5'-концы ДНК.
3.2.16.4. Препаративное выделение ^2р-меченных фрагментов ДНК.
3.2.16.5. Химическое расщепление фрагментов
3.2.16.6. Определение концевых нуклеотидов у фрагментов ДНК, полученных при гидролизе ДНК pBR-322 эндонуклеазой Bbvil
3.2.17. Определение точки разрыва ДНК эндонуклеазой вше 2161.
3.2.18. Определение концевого нуклеотида, полученного при гидролизе ДНК эндонуклеазой
Вше 2161.
3.2.19. Определение изменения специфичности расщепления ДНК эндонуклеазой Вше 2161.
3.2.20. Очистка эндонуклеазы Rshii.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССВДОВАНШ
4.1. Получение и свойства эндонуклеазы Вше 2161.
4.1.1. Получение гомогенного препарата эндонуклеазы Вше 2161.
4.1.2. Определение молекулярной массы эндонуклеазы
Вше 2161.
4.1.3. Условия эндонуклеазной реакции.
4.1.4. Определение последовательности нуклеотидов ДНК, узнаваемой эндонуклеазой Вше
4.1.5. Определение точки разрыва ДНК эндонуклеазой Вте 2161 в составе узнаваемой последовательности
4.1.6. Определение примесей неспецифических нуклеаз в препарате эндонуклеазы Вше 2161.
4.2. Получение и свойства метилазы Вше 2161.
4.2.1. Очистка метилазы Bme 2161.
4.2.2. Определение основания ДНК, метилируемого метилазой Вте 2161.
4.3. Получение и свойства сайт-специфической эндонуклеазы Bbvii.
4.3.1. Очистка эндонуклеазы Bbvii.
4.3.2. Определение субстратной специфичности эндо-нуклеазы Bbvii
4.3.3. Определение точек разрыва ДНК эндонуклеазой Bbvii.
4.3.4. Определение концевых нуклеотидов, образующихся в результате гидролиза ДНК pBR-322 эндо-нуклеазой Bbvii.
4.4. Получение и свойства метилазы Bbvii.
4.4.1. Очистка метилазы Bbvii.
4.4.2. Определение основания ДНК, метилируемого метилазой Bbvii.
4.5. Выделение и свойства метилазы Bbvi.
4.5.1. Очистка метилазы Bbvi.
4.5.2. Определение природы метилированного основания ДНК метилазой Bbvi.
4.6. Получение и свойства сайт-специфической эндонуклеазы Rsh.ii.
4.6.1. Получение препарата сайт-специфической эндонуклеазы Rshii.
4.6.2. Определение участка узнавания ДНК эндонуклеа-зой Rshli.
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Выделение и свойства сайт-специфических эндонуклеазы и ДНК-метилазы Вше 2161.
5.2. Выделение, свойства и возможности использования эндонуклеазы Bbvii
5.3. Получение и свойства сайт-специфической эндонуглеазы
Rshll.
6. ВЫВОДЫ.III