Тропонин сердца быка: особенности структуры и свойства Барская, Наталья Вячеславовна

brief description

Барская,НатальяВячеславовна.Тропонинсердцабыка:особенностиструктурыисвойства: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Москва, 1984. - 192 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
БИОЛОГИЧЕСЮ^Ш с&АКУЛЬТЕТ На правах рукописиБАРСКАЯНатальяВячеславовнаУДК 577. 156.ТРОПОНИНСЕРдаБЫКА:ОСОБЕННОСТИСТРУКТУРЫИСВОЙСТВА03,00.04 - Биологическая

стр. 2
регуляции сокращения скелетных МЕШЦ Ю 10 jO 12 j7 j7 19 21 21 25 26 38 43 47 50 исердца1.Структура,свойстватропомиозина 2. Общая характеристикатропонинаскелетных мышц исердцаа)тропонинС б)тропонин1 в)тропонинТ 3.Особенностивзаимодействия белков тонкого филамента скелетных мышц исердца4.

стр. 3
тропонинас помощью НБД-хлорида 2. Использование флуоресцентной спектроскопии для изучения катион-связывающихсвойствполноготропо­ нина,тропонинаС и С-концевого пептидатропони­ наСсердца. а) Изучение катион-связыващихсвойствполноготропо­ нинас использованием гидрофобного зонда диметиламинонафтэйродина

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Барская, Наталья Вячеславовна
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Ю
I. Общие представления о регуляции сократительной активности.
1. Роль мембранных структур в регуляции мышечного сокращения.
2. Тонкая структура сократительного аппарата.
3. Две системы регуляции сокращения мышцы на уровне сократительных белков. а) Миозиновый тип регуляции. б) Актиновый тип регуляции.
П. Роль тропонин-тропомиозинового комплекса в регуляции сокращения скелетных мышц и сердца.
1. Структура, свойства тропомиозина.
2. Общая характеристика тропонина скелетных мышц и сердца. а) тропонин С. б) тропонин 1. в) тропонин Т.
3. Особенности взаимодействия белков тонкого филамента скелетных мышц и сердца.
4. Гипотетические механизмы функционирования тропонин-тропомиозинового комплекса.
5. Фосфорилирование как возможный механизм тонкой регуляции активности тропонин-тропомиозинового комплекса.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
I. Выделение белков и пептидов. Исследование взаимодействия изолированных компонентов тропонина друг с другом.
1. Выделение тропонина.
2. Разделение тропонина на компоненты. а) Ионообменная хроматография полного тропонина. б) Очистка тропонина С на "голубой"сефарозе.
3. Расщепление тропонина С по остаткам цистеина и выделение пептидов тропонина С.
4. Исследование взаимодействия С-концевого пептида тропонина С с тропонином I и тропонином Т методом электрофореза.
5. Исследование взаимодействия тропонина С с тропонином Т методом гель-фильтрации и электрофореза.
П. Спектральные методы исследования.
1. Исследование реакционной способности БН-групп тропонина с помощью НБД-хлорида.
2. Использование флуоресцентной спектроскопии для изучения катион-связывающих свойств полного тропонина, тропонина С и С-концевого пептида тропонина С сердца. а) Изучение катион-связывающих свойств полного тропонина с использованием гидрофобного зонда диметила-минонафтэйродина. б) Исследование параметров связывания двухвалентных катионов с тропонином С и его С-концевым пептидом по величине собственной белковой флуоресценции.
3. Изучение катион-связывающих свойств тропонина С и его пептидов методом кругового дихроизма.
Ш. Некоторые аналитические методы.
I. Использование хелаторов для поддержания постоянной концентрации двухвалентных катионов в среде.
• 2. Электрофорез белков и пептидов в полиакриламидном геле. а) Электрофорез в присутствии додеодлсульфата натрия. б) Исследование связывания ^Са^ с белками и пептидами
3. Определение концентрации белка и пептидов.
4. Аминокислотный состав пептидов.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ.
I. Вццеление тропонина и его компонентов из сердца быка. 78 П. Изучение катион-связывающих свойств тропонина сердца.
1. Использование гидрофобного зонда диметиламинонафтей-родина для обнаружения конформационных изменений тропонина, вызываемых связыванием Са^4" по (^^"-специфическим центрам.
2. Локализация и свойства катион-связывающих участков тропонина С сердца. а) Химическое расщепление тропонина С по остаткам цис-теина и выделение пептидов. б) Использование собственной белковой флуоресценции для изучения катион-связывающих свойств тропонина С и его С-концевого пептида. в) Исследование катион-связывающих свойств тропонина С и его пептидов методом кругового дихршзма. г) Изучение Са*^-связывающих свойств тропонина С и его С-концевого пептида методом электрофореза.
Ш. Исследование взаимодействия компонентов тропонина сердца. НО
1. Взаимодействие С-концевого пептида тропонина С с тропонином I и тропонином Т. НО
2. Сравнительное изучение взаимодействия тропонина С и тропонина Т сердца и скелетных мышц. а) Использование метода гель-фильтрации для исследования взаимодействия тропонина С и тропонина Т. Н б) Изучение взаимодействия тропонина С и тропонина Т методом электрофореза в полиакриламидном геле.
3. Роль Са^+ и SH-групп в регуляции взаимодействия компонентов тропонина сердца.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
I. Сравнение катион-связывающих свойств тропонина сердца и скелетных мышц.
1. Диметиламинонафтэйродин-флуоресцентный зонд, позволяющий исследовать Са^+-специфические участки тропонина сердца и скелетных мышц.
2. Локализация и свойства катион-связывающих участков тропонина С сердца.
П. Белок-белковое взаимодействие в полном тропонине сердца.
1. Взаимодействие тропонина I и тропонина Т с С-концевым пептидом тропонина С.
2. Особенности взаимодействия тропонина С и тропонина Т сердца и скелетных мышц.
3. Участие Ca + и SH -групп в поддержании целостности тропонина сердца.
ВЫВОДЫ.